本发明专利技术涉及命名为I‑spga的免疫原的组分和制备方法，该免疫原由复合抗原组成，该复合抗原由从患者处分离的18至26种病原微生物制成，用二元乙烯亚胺(BEI)和福尔马林灭活，稀释在SPGA免疫增强剂中，与佐剂QS‑21混合。通过给母鸡接种I‑spga免疫原，获得了高免疫蛋(Imunospaga)，其含有对18‑26种抗原具有特异性的免疫活性蛋白，用于免疫。通过SPGA免疫增强剂放大抗原信号，母鸡的免疫应答对所用的抗原具有特异性，并由于特别的免疫程序，使免疫系统复杂而强烈地发挥作用：I‑spga复合抗原含有从患者处分离的18‑26种微生物，细菌体、通过超声获得的细菌体成分、纤毛、外毒素、内毒素、孢子、病毒、真菌或酵母菌。这种病理材料通过BEI和福尔马林灭活。I‑spga抗原有三种类型。标准I‑spga抗原由从罗马尼亚患者中分离出的18至24种对抗生素有抗性的细菌组成。特异性I‑spga复合抗原由含有7‑9株菌株的混合物的I‑spga复合抗原组成，该菌株的混合物来源于从罗马尼亚患者处分离的单一物种的细菌、真菌或酵母菌，并与SPGA和QS‑21混合，用于接种先前用标准I‑spga抗原免疫的母鸡。个性化I‑spga抗原由含细胞碎片和源于患者处的病理材料组成，经BEI和福尔马林灭活，并与SPGA和QS‑21混合，用于免疫先前用标准I‑spga抗原免疫的母鸡。现在这项专利技术包含了新一代的生物制品，其中母鸡在不同时间间隔，对不同组经肠胃外接种的抗原的免疫反应是重叠的。鸡应答是均匀的，额外的免疫原给药和作为免疫增强剂的SPGA放大了抗原信号和免疫应答。I‑spga免疫原以及免疫应答包括两个标记物，G和A，识别用于免疫的I‑spga抗原，以对抗用于生产Imunoinstant组的生物制剂或类似产品的抗原。I‑spga免疫原用于免疫母鸡来获得免疫活性蛋白，可用于治疗免疫缺陷、牛皮癣、大疱性表皮松解症、其他皮肤病、医院感染、在儿童和成人泌尿系统中对抗生素有抗性的感染。
Composition, preparation and evaluation of the compound immunogen named i-spga for the production of IAP
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫活性蛋白(IAP)生产的名为I-SPGA的复合免疫原的组分、制备方法和评估
人类医学、兽医学、免疫病理学、多克隆抗体、通过被动免疫的预防和治愈性治疗、抗生素抗性的控制。专利技术描述包括参考书目的当前技术的介绍在2012-2014年期间，开展了有关高免疫蛋的生产和母鸡的免疫球蛋白(IgY)的使用的研究。这些研究产生了一些专利(16-20)。上述所提及的产品是第一代免疫球蛋白和免疫调节剂，并且是通过涉及到用于母鸡免疫的免疫原不同的技术获得的。Imunoinstant品牌包括从传统的蛋鸡中制备的生物制品，其中多价抗原由细菌、酵母菌、病毒制备而成，用于在37℃下，用3％福尔马林进行2小时的标准方法的灭活。该方法不允许在细菌、酵母菌、病毒或真菌抗原结构中保留某些抗原组分和表位。在所有的细菌种类中，使用相同的方法，用福尔马林灭活并用QS-21佐剂形成免疫原。对于有些细菌菌株，超声波处理可以增加抗原的接触表面。在这一代生物制品中，从患者处分离获得的几种具有抗生素抗性或敏感的菌株的抗原的混合物代表用于免疫的抗原物质，其在灭活后，作为抗原与纯化的皂甙衍生物QS-21混合被制备出来。免疫的成功取决于几个因素，包括第一次、第二次和随后的免疫之间的时间间隔。为了这一目的，进行了大量研究，采用0、14和28天间隔(37、26)，或采用连续7周(27)每周一次。几位作者以10天间隔对鸡进行免疫(27、28)，但一般建议是，第一次和第二次免疫原的注射之间的间隔至少应为4周。这反映了免疫的记忆，必须给其时间来形成(31)。在0天、10周和15周免疫的母鸡中，获得了高滴度的抗体，范围为1:160,000(30)。这些结果是可重复的，是相似的，并且建议施加一稍后的脉冲(31、55)。已经证实，通过将脉冲间隔从14天延长到42天可以获得非常高的滴度(32)。有证据表明，在短时间内进行频繁的免疫接种会导致免疫的抑制，而不是刺激抗体的产生(29)。对于第一代产品Imunoinstant的制备，母鸡分别以10天的短间隔进行免疫。相反，新一代生物制品，其作为本专利主题，分别在0、30和45天进行免疫，留下时间来恢复母鸡的免疫记忆。免疫对产蛋能力的影响母鸡的表现通常很容易通过简单的抗原接种而影响(40、34、35)，但抗体滴度可能会下降，这取决于注射的免疫原类型。例如，用源于肠道寄生虫(蛔虫)的，包括体细胞的、分泌-排泄抗原的溶液免疫的母鸡中，接种的母鸡的免疫应答在三周后降低或完全停止，这可能是由于源于肠道寄生位点的亚毒性位置(35、36)。此外，弗氏(Freund)完全(FCA)和不完全(FIA)佐剂影响抗体(Ab)滴度的稳定性。结果发现，使用FCA可显著降低在SPF罗德岛(SPFRhodeIsland)母鸡中的Ab滴度(39)，但仅产生较小的和暂时性的影响(38)，或者，甚至不能显著地影响在来亨(Leghorn)白母鸡中的Ab滴度的稳定性(40)。这些结果之间的差异可能是由于实验条件的不同造成的。IgY滴度的提高兔免疫后，免疫系统产生一级应答，然后通过从同一免疫原注射第二剂量引起二级应答。这两个阶段有不同的特点。在一级应答中，IgM被合成，但仅在低水平和短暂水平上提高抗体滴度，而在二级免疫后，IgG抗体以高滴度出现。抗体滴度持续数周，在抗原接种后大约4天，母鸡的血清中出现IgY抗体，在6至8天达到最高的滴度，此后下降。通过加强免疫可提高Ab滴度。似乎有两种不同机制的二级免疫应答。根据这些结果，一些鸡应答具有类似哺乳动物的抗体动力学，而对同一免疫方案的其它应答在第一次免疫后Ab滴度增加，但第二次免疫后没有发生显著的变化。最经常地，在第一阶段，在第一次免疫后母鸡的抗体滴度动力学显示了暂时的IgY增加，而第二阶段(增强免疫)的特征是，Ab滴度的初始增加约10天，随后的平台期又持续10天，之后下降。抗体滴度增加可能是由于IgY的半衰期较IgG相对较短所致。相反，一些作者已经证明Ab滴度在数周内仍保持较高和稳定(41、42、43、44)。直到现在，在抗体产生的动力学中，这些差异的原因仍不清楚。为了提高抗体滴度，本专利中提出的解决方案，将采用用于免疫增强剂(SPGA)和佐剂(QS-21)的新配方，并将使用改进的免疫程序。Imunoinstant产品(16-19)没有根据它们的医疗用途(口服、皮肤、粘膜、呼吸)进行分组，也没有制定程序来控制和区分这些产品。未使用免疫增强剂来增加与免疫母鸡的免疫系统直接相关的抗原性，也未使用免疫增强剂作为最终稀释液。对于这种免疫原，与QS-21相结合，Tween20被用作乳化剂以增加抗原蛋白质的表面张力(16、19)。我们在IMUNONOMEDICA-SH实验室的研究旨在改善免疫原的制备条件，涉及到抗原含量、抗原的复杂性、选择性失活、使用免疫增强剂和Tween20作为乳化剂。对人体的临床前和临床研究，支持了预防的和治愈的使用免疫活性蛋白的需要，以及存在于高免疫蛋中的其他产品，包括免疫调节剂、接触蛋白、肽和自由基。与本专利中所述的高免疫蛋相关，其旨在提高由细菌、酵母菌和病毒制备的免疫原的质量，并提高其免疫原性。为了这一目的，采用二元乙烯亚胺(BEI)和福尔马林作为灭活剂，通过超声检查和伽马射线灭活，对细菌体的碎片进行了测试。抗原刺激物是通过使用SPGA免疫增强剂放大的，作者从1970年开始研究，1972年后用于疫苗生产。显示SPGA对从感染细胞(细胞相关)中提取的病毒性疱疹(无细胞)有保护作用，并且对免疫母鸡体内的抗原刺激有潜在作用(1-8)。SPGA被用于为人类和动物生产新的免疫原(6-9)。我们将继续使用母鸡进行免疫，并且从高免疫蛋中提取免疫活性蛋白(IAP)。在母鸡(家鸡(Gallusdomesticus))中的抗体应答由于其与用于免疫的产品之间具有更长的遗传距离从而更显著。这种现象还涉及到从高免疫蛋中制备的IAP与人类之间的关系，即与IAP接触的生物体之间的关系。IAP在人体内的可及性是由于口服或其他粘膜给药，以及鸟类和人类之间的祖先关系。哺乳动物和鸟类有共同的祖先，其具有3.5亿年的进化漂移。基于这个原因，IAP才可能在人体内作为自身被识别。母鸡抗体的多样性，主要是通过基因转换实现的，额外地，还通过V-J灵活性操作和作为哺乳动物的体细胞点突变来实现的。与哺乳动物相比，鸡体内只有一个VH或VL基因，但除此之外，还有大约25个所谓的伪-V-基因(它们失去了通常用于转录调控和信号识别的序列)。母鸡经常能产生抗体，将会比哺乳动物抗体识别更多的表位(9-11)。在这些免疫过程中，通过给药免疫活性蛋白，淋巴细胞的网络和具有可变区域(V)的分子被激活。因此，免疫系统被视为具有由V-V相互作用而相互连接的成分的网络。T辅助和抑制性细胞作用是在非特异性的免疫应答中的佐细胞(74-78)。谷氨酸的使用，作用于母鸡的T淋巴细胞，增加抗原信号，使成熟的淋巴细胞取代它，储存并从其V变种转移到高活性的B淋巴细胞的变种V上，它将开始产本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，它是由复合抗原组成的，该复合抗原获得自从患者处分离的18至26种病原微生物，经二元乙烯亚胺(BEI)和福尔马林灭活，并与作为免疫增强剂的SPGA和作为佐剂的QS-21混合。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170606 RO a2017003401.一种称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，它是由复合抗原组成的，该复合抗原获得自从患者处分离的18至26种病原微生物，经二元乙烯亚胺(BEI)和福尔马林灭活，并与作为免疫增强剂的SPGA和作为佐剂的QS-21混合。
2.Immunopabo高免疫蛋的制备方法和组合物，其特征在于，这些高免疫蛋是从经I-spga复合免疫原肠胃外接种的母鸡(家鸡)中获得的。
3.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，从18至26种微生物中制备的复合I-spga抗原包含细菌体、通过超声获得的细菌体的成分、纤毛、外毒素、内毒素、孢子、病毒、真菌的混合物，或分离自患者。
4.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，I-spga复合抗原稀释在作为免疫增强剂的SPGA中，该免疫增强剂含有0.218M蔗糖、0.0038M磷酸单钾、0.0072M磷酸二钾、0.0049M谷氨酸单钾和1％牛白蛋白粉。
5.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，I-spga复合抗原稀释在作为免疫增强剂的SPGA中，并与作为佐剂的QS-21混合。
6.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，I-spga复合抗原包含经BEI和福尔马林灭活的通过超声获得的细菌体的细菌体组分、纤毛、外毒素、内毒素、孢子、病毒、真菌或酵母菌。
7.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其中包含细菌体、通过超声获得的细菌体的成分、纤毛、外毒素、内毒素、孢子、病毒、真菌或酵母菌的I-spga免疫原可以是标准I-spga、特异性I-spga和定制I-spga。
8.根据权利要求7所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，标准I-spga免疫原是从患者处分离的由18至24种对抗生素有抗性的或敏感的细菌组成的。
9.根据权利要求7所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，特异性I-spga免疫原是由6-8个菌株制成的单特异性抗原组成，该菌株来自从罗马尼亚的患者处分离的细菌、真菌或酵母菌的单一菌株，经BEI灭活，与作为免疫增强剂的SPGA和作为佐剂的QS-21混合，用于免疫先前用标准I-spga免疫原免疫的母鸡。
10.根据权利要求8所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，个性化I-spga免疫原是由来源于患者的病理材料组成，该病理材料包括细胞碎片和致病病菌，经BEI和福尔马林灭活，与作为免疫增强剂的SPGA和作为佐剂的QS-21混合，并用于免疫先前用标准I-spga免疫原免疫的母鸡。
11.根据权利要求4所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，在I-spga免疫原中，每个对微生物物种具有特异性的抗原是细菌体、纤毛、孢子、外和内毒素的蛋白质混合物，该蛋白质混合物由相同的对抗生素有抗性的或敏感的物种的若干细菌菌株制备。
12.根据权利要求1所述的称为I-spga的复合免疫原的制备方法，其特征在于，通过用作为免疫原的I-spga免疫的母鸡中获得的I-spga高免疫蛋，可通过对于目标抗原具有特异性的免疫球...
【专利技术属性】
技术研发人员：I·V·帕特拉斯库，
申请(专利权)人：R·S·凡塔纳，
类型：发明
国别省市：罗马尼亚;RO
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