结合NKG2D、CD16和肿瘤相关抗原的蛋白质制造技术

描述了结合NKG2D受体、CD16和选自CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52和CD133的肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白，以及可用于治疗癌症的药物组合物和治疗方法。

Proteins binding to NKG2D, CD16 and tumor associated antigens

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合NKG2D、CD16和肿瘤相关抗原的蛋白质与相关申请的交叉引用本申请要求2017年5月23日提交的美国临时专利申请号62/510,173、2017年7月31日提交的美国临时专利申请号62/539,396、2017年7月31日提交的美国临时专利申请号62/539,416、2017年7月31日提交的美国临时专利申请号62/539,419、2017年8月16日提交的美国临时专利申请号62/546,292、2017年8月16日提交的美国临时专利申请号62/546,296和2017年8月30日提交的美国临时专利申请号62/552,146的利益和优先权，所述每个申请的内容为所有目的整体通过引用并入本文。序列表本申请含有以ASCII格式电子提交并整体通过引用并入本文的序列表。所述在2018年5月21日生成的ASCII拷贝被命名为DFY-022WO.txt，大小为212kb。
本专利技术涉及结合到NKG2D、CD16和选自CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52和CD133的肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白。
技术介绍
尽管在文献中已报道了治疗癌症的大量研究尝试和科学进展，但这种疾病依然是显著的健康问题。血液和骨髓癌症、包括多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤是频繁被诊断到的癌症类型。当前用于这些癌症的治疗选项不对所有患者有效和/或可能具有实质性严重副作用。其他类型的癌症对于使用现有治疗选项治疗来说也仍然具有挑战性。癌症免疫疗法是理想的，因为它们是高度特异性的并且可以使用患者自己的免疫系统来促进癌细胞的破坏。融合蛋白例如双特异性T-细胞衔接器是文献中描述的结合到肿瘤细胞和T-细胞以促进肿瘤细胞破坏的癌症免疫疗法。结合到某些肿瘤相关抗原和结合到某些免疫细胞的抗体在文献中已有描述。参见例如WO2016/134371和WO2015/095412。自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的组成部分，占循环淋巴细胞的大约15％。NK细胞事实上浸润所有组织，并且最初因它们不需前期致敏即可杀伤肿瘤细胞的能力而被表征。激活的NK细胞通过与细胞毒性T细胞相似的手段杀伤靶细胞，即通过含有穿孔素和颗粒酶的细胞溶解颗粒以及通过死亡受体途径。激活的NK细胞还分泌炎性细胞因子例如IFN-γ和促进其他白细胞向靶组织的召集的趋化因子。NK细胞通过它们表面上的各种不同激活和抑制受体对信号做出响应。例如，当NK细胞遇到健康的自体细胞时，它们的活性通过杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的激活而被抑制。或者，当NK细胞遇到外来细胞或癌细胞时，它们通过它们的激活受体(例如NKG2D、NCR、DNAM1)而被激活。NK细胞也通过它们表面上的CD16受体被某些免疫球蛋白的恒定区激活。NK细胞对激活的总体灵敏度取决于刺激性和抑制性信号的总和。CD37这种细胞表面抗原的四次跨膜蛋白超家族的成员，表达在几乎所有成熟B淋巴细胞上，但不表达在前B细胞或浆细胞上。它是谱系特异性B-细胞抗原，并且在正常T细胞、胸腺细胞、单核细胞、粒细胞、血小板、自然杀伤(NK)细胞和红细胞上不存在或极少表达。此外，CD37表达在源自于外周成熟B细胞的恶性肿瘤例如B-细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、非霍奇金淋巴瘤和急性髓系白血病上。CD20是在B细胞从前B细胞期直至成熟的分化期间表达在B细胞表面上的一种激活糖基化磷蛋白。它在B-细胞发育和分化成浆细胞中发挥作用。CD20也在慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和B-细胞恶性肿瘤上被发现。CD19是在向B-细胞胚细胞发育期间在来自于最早可识别的B-谱系细胞的B淋巴细胞的表面上表达的一种跨膜糖蛋白。它主要与CD21和CD81联合充当B细胞辅助受体。CD19在许多癌症例如慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、B-细胞恶性肿瘤和急性髓系白血病中表达。CD22这种B-细胞限制的磷酸糖蛋白，表达在成熟B细胞的表面上并在较低程度上表达在某些不成熟B细胞上。它起到B细胞受体(BCR)信号传导的抑制性受体的作用。此外，CD22在癌细胞例如慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞恶性肿瘤和毛细胞白血病上表达。CD30是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族、具体来说是TNFR8的成员。CD30在激活的淋巴细胞和几种其他正常细胞上表达。它的信号传导激活NF-κB转录因子，引起基因功能的多效调控。CD30是经典霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和胚胎细胞癌的特征性标志物，并且它在攻击性T-和B-细胞肿瘤的一个亚组上表达。它在正常细胞上的受限表达使它成为靶向疗法的一个有吸引力的候选物。CAMPATH-1，也被称为分化抗原52(CD52)，是一种12个氨基酸的锚定到糖基磷脂酰肌醇(GPI)的肽。CD52表达在成熟B和T淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞的细胞表面上，但在这些淋巴细胞所源自的干细胞上不表达。此外，CD52存在于男性生殖道中，并存在于成熟精细胞的表面上。CD52与某些类型的癌症相关，包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、皮肤T-细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤和T-细胞幼淋巴细胞性白血病、B细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、成年人T-细胞白血病-淋巴瘤、成熟T/自然杀伤(NK)细胞肿瘤和胸腺瘤。CD133是一种主要在人类造血干细胞和祖细胞中鉴定到的5次跨膜糖蛋白。目前，这种表面受体的生理作用仍不清楚。然而，CD133在各种不同的癌包括乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肾癌、子宫癌和睾丸生殖细胞癌、急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和头颈部鳞状细胞癌中，被鉴定为癌症干细胞的标志物。CD133可以与p85相互作用以在癌症干细胞中激活PI3K/AKT/mTOR信号传导途径，并且这种激活随后唤起癌症干细胞促进肿瘤发生的能力。
技术实现思路
本专利技术提供了结合到自然杀伤细胞上的NKG2D受体和CD16受体和选自CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52和CD133的肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白。这些蛋白质可以结合超过一种NK激活受体，并且可以阻断天然配体与NKG2D的结合。在某些实施方式中，所述蛋白质可以在人类中激动NK细胞。在某些实施方式中，所述蛋白质可以在人类和其他物种例如啮齿动物和食蟹猴中激动NK细胞。本专利技术的各个不同方面和实施方式将在下文中更详细描述。因此，本专利技术的一个方面提供了一种蛋白质，其包含：结合NKG2D的第一抗原结合位点；结合选自CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52和CD133的肿瘤相关抗原的第二抗原结合位点；和抗体Fc结构域、其足以结合CD16的部分或结合CD16的第三抗原结合位点。所述抗原结合位点可以各自包含抗体重链可变结构域和抗体轻链可变结构域(例如像在抗体中那样排列或融合在一起以形成scFv)，或者一个或多个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白质，其包含：/n(a)结合NKG2D的第一抗原结合位点；/n(b)结合CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52或CD133的第二抗原结合位点；和/n(c)抗体Fc结构域或其足以结合CD16的部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170523 US 62/510,173;20170731 US 62/539,396;20171.一种蛋白质，其包含：
(a)结合NKG2D的第一抗原结合位点；
(b)结合CD37、CD20、CD19、CD22、CD30、CD52或CD133的第二抗原结合位点；和
(c)抗体Fc结构域或其足以结合CD16的部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。


2.权利要求1所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点结合到人类中的NKG2D。


3.权利要求1或2所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


4.根据权利要求3所述的蛋白质，其中所述重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。


5.根据权利要求3或4所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


6.根据权利要求5所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。


7.根据权利要求5或6所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点的轻链可变结构域具有与所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域的氨基酸序列相同的氨基酸序列。


8.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与选自SEQIDNO：1、SEQIDNO：41、SEQIDNO：49、SEQIDNO：57、SEQIDNO：59、SEQIDNO：61、SEQIDNO：69、SEQIDNO：77、SEQIDNO：85和SEQIDNO：93的氨基酸序列至少90％同一性的重链可变结构域。


9.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：41至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：42至少90％同一性的轻链可变结构域。


10.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：49至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：50至少90％同一性的轻链可变结构域。


11.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：57至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：58至少90％同一性的轻链可变结构域。


12.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：59至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：60至少90％同一性的轻链可变结构域。


13.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：61至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：62至少90％同一性的轻链可变结构域。


14.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：69至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：70至少90％同一性的轻链可变结构域。


15.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：77至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：78至少90％同一性的轻链可变结构域。


16.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：85至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：86至少90％同一性的轻链可变结构域。


17.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：93至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：94至少90％同一性的轻链可变结构域。


18.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：101至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：102至少90％同一性的轻链可变结构域。


19.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO：103至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQIDNO：104至少90％同一性的轻链可变结构域。


20.权利要求1或2所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点是单域抗体。


21.权利要求20所述的蛋白质，其中所述单域抗体是VHH片段或VNAR片段。


22.根据权利要求1-2或20-21中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


23.根据权利要求22所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。


24.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD37，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：109至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：113至少90％同一性的氨基酸序列。


25.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD37，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：117至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：121至少90％同一性的氨基酸序列。


26.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD37，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：125至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：129至少90％同一性的氨基酸序列。


27.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD20，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：134至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：138至少90％同一性的氨基酸序列。


28.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD20，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：142至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：146至少90％同一性的氨基酸序列。


29.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD20，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：150至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：154至少90％同一性的氨基酸序列。


30.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD20，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：158至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：162至少90％同一性的氨基酸序列。


31.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD20，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：166至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：170至少90％同一性的氨基酸序列。


32.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD19，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：175至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：179至少90％同一性的氨基酸序列。


33.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD19，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：183至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：187至少90％同一性的氨基酸序列。


34.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD19，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO：191至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO：195至少90％同一性的氨基酸序列。


35.根据权利要求1-23中任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CD19，...

【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里·P·常，安·F·张，威廉·哈尼，布拉德利·M·伦德，比昂卡·普林茨，
申请(专利权)人：蜻蜓疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US