抗组蛋白抗体测定试剂、试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开一种抗组蛋白抗体测定试剂，包括包被有组蛋白抗原的固相载体，其中，所述组蛋白抗原为经还原处理的天然组蛋白；进一步的，所述组蛋白抗原为经还原处理的天然组蛋白和重组组蛋白H1亚基组成；公开的试剂盒中，还可以包括第三试剂；通过调整第三试剂的渗透压可进一步调整抗原抗体反应的整体环境渗透压。本发明专利技术的试剂、试剂盒及使用方法能明显降低漏检率、且特异性好、灵敏度高、重复性好、稳定性好，且配套全自动免疫分析仪，能实现仪器自动化检测等优点。

Reagents, kits and methods of use for the determination of antihistone antibodies

【技术实现步骤摘要】
抗组蛋白抗体测定试剂、试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及化学发光免疫诊断
，具体涉及一种抗组蛋白抗体测定试剂、试剂盒及其使用方法。
技术介绍
His是DNA相关蛋白(11.2～21.5KDα)，是核小体的主要组成部分，它们的功能是稳定DNA双螺旋结构，还可能参与DNA修复、转录、复制和表达调节机制。His有五种不同类型：H1、H2A、H2B、H3和H4，其中H3-H4四聚体和两个H2A-H2B二聚体组成组蛋白八聚体核心，H1起连接核小体的作用。抗组蛋白抗体是系统性红斑狼疮患者体内是常见的自身抗体，在药物(普鲁卡因、肼屈嗪等)诱导的系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)患者中其阳性率较高，表现为一种或几种抗组蛋白抗体或抗H2A-H2B复合体的抗体。此外，在播散性红斑狼疮和类风湿性关节炎的患者中也可检测到抗组蛋白抗体。目前临床上用于检测抗组蛋白抗体的方法主要有间接免疫荧光法，免疫印记法，酶联免疫吸附法，化学发光法等。间接免疫荧光法基本原理是血清样本中的特异性抗体与切片中的抗原特异性结合后，再用间接荧光抗体，与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定阴阳性。该方法操作复杂，容易出现假阳性，且结果需由有经验的专业人员进行判断，分析结果的客观性不足，且检测难以实现自动化。免疫印迹法其基本原理是膜条显色技术，通常固定多个不同类型的抗原在同一膜条上，让其与血浆中的特异性抗体结合，再加入酶标二抗和显色剂，最终通过肉眼进行定性判定。该方法灵敏度低，反应时间长，检测项目只能固定搭配组合，灵活性差，且抗干扰能力差，容易出现假阳性。酶联免疫吸附法的基本原理是将已知的抗原吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，与血浆中的特异性抗体结合后，再与酶标记的二抗反应，最后在酶标仪上进行显色检测。该方法灵敏度在免疫印迹法的基础上有所提升，但仍然较低，且操作复杂，重复性差，反应时间长。化学发光法的基本原理是采用磁微粒化学发光免疫分析技术，利用间接法原理进行检测，测量相对发光值(RLU)。相对发光值与样本中的抗组蛋白抗体的浓度呈正比例关系。该方法较其他方法学特异性好，灵敏度高，线性范围宽，可用仪器自动化进行操作，且可实现定量检测，综上所述，化学发光法会成为今后自身抗体检测的主流方法。据相关文献报道，在系统性红斑狼疮患者中，抗组蛋白抗体的检出率在30％～70％，且药物性狼疮患者中，检出率>90％，但是在实际工作中，我们应用不同方法学的试剂对系统性红斑狼疮确诊患者的标本进行检测，其检出率远远低于文献报告的比例，因此我们推测，不同厂家不同方法学的试剂均存在大量漏检的风险。
技术实现思路
为了解决上述现有试剂盒存在的缺陷，本专利技术对试剂盒的成分进行了研究，从而完成本专利技术。据此，在一方面，本专利技术提供了一种抗组蛋白抗体测定试剂，包括包被有组蛋白抗原的固相载体，其中，所述组蛋白抗原为经还原处理的天然组蛋白抗原。本专利技术的检测试剂盒，在保证其特异性的前提下，显著提高了检出率。不希望收到理论的束缚，我们推测，由于天然组蛋白抗原是复合抗原，由H1、H2A、H2B、H3和H4等几种亚型构成，除H1外，其他4种组蛋白均分别以二聚体相结合形成八聚体，其抗原位点可能未充分暴露出来，使其与血浆中的抗原反应不充分造成漏检。本专利技术通过对天然组蛋白进行还原处理，打开二硫键，使其充分暴露其抗原位点，从而检出患者血浆中的抗体，降低漏检率。在一些实施方式中，组蛋白抗原是由经还原处理的天然组蛋白和重组组蛋白H1亚基组成。本试剂盒强化了H1亚基的比例，在包被抗原时，补充了一部分重组组蛋白H1亚基；进一步提高了试剂盒的反应性，降低了漏检率。在一些实施方式中，还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS、1～4ml/L的TX-200或0.4～0.8g/L的巯基乙醇处理16～20h；在优选的实施方式中，还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS处理16～20h。通过使用SDS预处理天然组蛋白抗原，不仅使用安全，而且预处理后的检出率最好。在第二方面，本专利技术提供了一种抗组蛋白抗体测定试剂盒，包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂为包被有组蛋白抗原的固相载体，并且所述组蛋白抗原是经还原处理的天然组蛋白；所述第二试剂为标记物标记的抗人IgG。除上述成分外，本专利技术第一试剂、第二试剂还可以包括适合测定抗组蛋白抗体的其它成分，例如，缓冲物质、盐类物质、稳定剂、表面活性剂和防腐剂。在一些具体实施方式中，所述第二试剂包括0.1～2ug/ml的抗人IgG单克隆抗体，10～14g/L的缓冲物质，6～10g/L的盐类物质，20～30g/L的稳定剂，0.5～1.5ml/L的表面活性剂，1～5ml/L的防腐剂。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括第三试剂；其中，第一试剂包括：0.1～2μg/mL组蛋白抗原、10～14g/L缓冲物质、6～10g/L盐类物质、6～15g/L稳定剂、1～5ml/L表面活性剂和1～5ml/L防腐剂；所述第一试剂的渗透压为300～400mosm；第三试剂包括：0.5～3.0g/l的缓冲物质，1～4g/L的盐类物质，2～10g/L的稳定剂，3～6ml/L的表面活性剂，1～5ml/L的防腐剂；第三试剂是渗透压为60～100mosm的缓冲溶液；优选地，所述第三试剂是渗透压为80～90mosm的缓冲溶液；例如可以为65、70、73、75、78、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、92、95mosm渗透压的缓冲溶液。所述第一试剂和第三试剂同时与待测样本混合，混合比例为待测样本：第一试剂：第三试剂为1:5:10。本专利技术中，第三试剂的目的就是进一步调整样本与第一试剂接触时的整体混合液的渗透压，从而有效降低抗原与抗体反应时的整体渗透压，适当提高反应信号。进一步地，所述第一试剂的pH值为6.8～7.2；所述第三试剂的pH值为7.5～8.0。在一些实施方式中，组蛋白抗原是由经还原处理的天然组蛋白和重组组蛋白H1亚基组成。在示例性的实施方式中，经还原处理的天然组蛋白和重组组蛋白H1亚基的包被质量比为2～5:1～3。在具体的实施方式中，经还原处理的天然组蛋白的包被质量大于重组组蛋白H1亚基。在一些实施方式中，还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS、1～4ml/L的TX-200或0.4～0.8g/L的巯基乙醇处理16～20h；在优选的实施方式中，还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS处理16～20h。在一些实施方式中，所述固相载体为磁珠、微孔板、电极、塑料板、胶体金、乳胶珠、琼脂糖珠、玻璃、硝酸纤维素膜、尼龙膜、二氧化硅板或微芯片；所述标记物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、吖啶酯或吖啶酯衍生物。在第三方面，该试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)将待测样本与第一试剂混合，使其充分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗组蛋白抗体测定试剂，包括包被有组蛋白抗原的固相载体，其中，所述组蛋白抗原为经还原处理的天然组蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗组蛋白抗体测定试剂，包括包被有组蛋白抗原的固相载体，其中，所述组蛋白抗原为经还原处理的天然组蛋白。


2.如权利要求1所述的抗组蛋白抗体测定试剂，所述组蛋白抗原是由经还原处理的天然组蛋白和重组组蛋白H1亚基组成。


3.如权利要求1或2所述的抗组蛋白抗体测定试剂，其中，所述还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS、1～4ml/L的TX-200或0.4～0.8g/L的巯基乙醇处理16～20h；优选地，所述还原处理为使用0.2～0.4g/L的SDS处理16～20h。


4.一种抗组蛋白抗体测定试剂盒，包括第一试剂和第二试剂；
其中，所述第一试剂为包被有组蛋白抗原的固相载体，并且所述组蛋白抗原是经还原处理的天然组蛋白；
所述第二试剂为标记物标记的抗人IgG。


5.如权利要求4所述的抗组蛋白抗体测定试剂盒，所述试剂盒还包括第三试剂；其中，
第一试剂包括：0.1～2μg/mL组蛋白抗原、10～14g/L缓冲物质、6～10g/L盐类物质、6～15g/L稳定剂、1～5ml/L表面活性剂和1～5ml/L防腐剂；所述第一试剂的渗透压为300～400mosm；
第三试剂包括：0.5～3.0g/l的缓冲物质，1～4g/L的盐类物质，2～10g/L的稳定剂，3～6ml/L的表面活性剂，1～5ml/L的防腐剂；第...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛亚琳，石丹，王小波，黄谦，田君喜，龙腾镶，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51