用于早期肝纤维化诊断的标志物、试剂盒及用途制造技术

本申请提供了一种肝纤维化早期诊断标志物、试剂盒及用途，其中肝纤维化早期诊断标志物包括细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21‑1中的至少一种，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体样本中与对照样本中差异表达。本申请肝纤维化早期诊断标志物能够实现早期肝纤维化的诊断。

Markers, kits and applications for early diagnosis of liver fibrosis

【技术实现步骤摘要】
用于早期肝纤维化诊断的标志物、试剂盒及用途
本申请涉及生物检测
，具体而言，本申请涉及一种用于早期肝纤维化诊断的标志物、试剂盒及用途。
技术介绍
肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展共有的病理改变和必经之路。纤维化发生是预测慢性肝脏损伤和疾病进展的重要因素，检测肝纤维化的早期发生非常重要。肝纤维化的临床诊断方法包括两大类。一类是有创检查，即肝穿刺活组织检查；另一类是无创检查，包括血清分子标志物和影像学检查。肝穿刺活组织检查是目前临床上检测肝纤维化分期诊断的金标准，但是肝穿刺活组织检查是一种有创检查，而且肝纤维化在肝脏组织中分布不均匀，一次肝穿刺取的活组织数量有限，特别是在早期肝脏损伤而发生肝纤维化时，活检组织病理结果对肝纤维化程度的判断仍有一定的误差，且难以反复取材动态观察。影像学检查对肝纤维化的诊断也有一定帮助，但由于早期肝纤维化的形态学变化不明显，因此对早期纤维化的诊断仍然困难。现有技术中，尽管血清分子标志物与肝脏炎症活动、肝脏代谢等状态有关，但不能准确反映肝纤维化程度，特别是在早期肝纤维化检测方面的能力不足。
技术实现思路
本申请的目的旨在提供一种用于早期肝纤维化诊断的标志物、试剂盒及用途。为了实现上述目的，本申请提供以下技术方案：一种肝纤维化早期诊断标志物，包括细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体样本中与对照样本中差异表达。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中差异表达。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中表达上调。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体血清样本中与对照血清样本中差异表达。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体血清样本中与对照血清样本中的表达上调。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中，所述细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体血清样本中的蛋白浓度上调。优选地，所述蛋白浓度通过酶联免疫吸附试验测得。本申请还提供一种肝纤维化早期诊断标志物用于制备早期肝纤维化诊断和/或疗效监控检测试剂盒的用途。本申请还提供一种肝纤维化早期诊断测试试剂盒，其包含上述的肝纤维化早期诊断标志物的定量检测试剂。相比现有技术，本申请的方案具有以下优点：1.本申请将在早期肝纤维化组织内异常表达明显的细胞角蛋白19确定为研究对象，找出了与早期肝纤维化密切相关的细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1，并通过选择细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1中的至少一种，实现早期肝纤维化诊断。2.本申请将细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1与其他肝纤维化相关的临床诊断标志物对比后发现，细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1都能稳定与肝纤维化相关。进一步地，血清中细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1在肝纤维化发生的早期阶段的被检出率明显高于其他已知的标志物(细胞角蛋白18-M65、细胞角蛋白18-M30、丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶)。本申请的早期肝纤维化诊断标志物采用细胞角蛋白19及其片段CYFRA21-1，区别于其他肝纤维化相关的临床标志物，能够更好地预测肝组织胆管反应和纤维化的发生，能够更好地检测早期肝纤维化。3.本申请还通过研究肝纤维化早期诊断标志物在受试体血清样本与对照血清样本的表达差异，确定了本申请肝纤维化早期诊断标志物作为早期肝纤维化无创诊断的潜在可能。本申请附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。附图说明图1是DDC模型小鼠肝组织的胆管反应程度情况图；图2是K19+和SOX9+细胞的分布面积的定量分析图；图3是DDC模型小鼠肝组织的纤维化情况图；图4是DDC、TAA、MCD模型血清中K19及其片段CYFRA21-1的表达情况统计图；图5是DDC模型血清中K18-M65、K18-M30、ALT和AST的表达情况统计图；图6是TAA模型血清中K18-M65、K18-M30、ALT和AST的表达情况统计图；图7是MCD模型血清中K18-M65、K18-M30、ALT和AST的表达情况统计图；图8是DDC、TAA和MCD模型中胆管反应和纤维化在组织水平上的相关系数大小热力图。图9是DDC、TAA和MCD模型中血清K19、CYFRA21-1、K18-M65、K18-M30、ALT、AST与组织中DR和纤维化相关系数大小的热力图。具体实施方式下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本申请，而不能解释为对本申请的限制。此外，如果已知技术的详细描述对于示出本申请的特征是不必要的，则将其省略。一种肝纤维化早期诊断标志物，包括细胞角蛋白19(K19)和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体样本中与对照样本中差异表达。在本申请的一个实施例中，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中差异表达。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中表达上调。在本申请的另一个实施例中，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体血清样本中与对照血清样本中差异表达。优选地，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体血清样本中与对照血清样本中的表达上调。具体地，所述肝纤维化早期诊断标志物中，所述细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体血清样本中的蛋白浓度上调。所述蛋白浓度通过酶联免疫吸附试验测得。本申请将在早期肝纤维化组织内异常表达明显的K19确定为研究对象，找出了与早期肝纤维化密切相关的K19及其片段CYFRA21-1，并通过选择K19及其片段CYFRA21-1中的至少一种，实现早期肝纤维化诊断。进一步地，本申请还通过研究肝纤维化早期诊断标志物在受试体血清样本与对照血清样本的表达差异，确定了本申请肝纤维化早期诊断标志物作为早期肝纤维化无创诊断的潜在可能。下面通过动物模型对本申请肝纤维化早期诊断标志物进行验证：通过喂养7-8周龄的雄性C57BL/6小鼠构建慢性肝纤维化模型，具体地，通过喂食含有0.1％1,4-二氢-2,4,6-三甲基-3,5-吡啶二甲酸二乙酯(3,5-diethoxycarbonyl-1,4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝纤维化早期诊断标志物，包括细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体样本中与对照样本中差异表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种肝纤维化早期诊断标志物，包括细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体样本中与对照样本中差异表达。


2.根据权利要求1所述的肝纤维化早期诊断标志物，其特征在于，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中差异表达。


3.根据权利要求2所述的肝纤维化早期诊断标志物，其特征在于，所述肝纤维化早期诊断标志物中，细胞角蛋白19和细胞角蛋白19的片段抗原CYFRA21-1中的至少一种在受试体肝脏组织样本中与对照肝脏组织样本中表达上调。


4.根据权利要求1所述的肝纤维化早期诊断标志物，其特征在于，所述肝纤维化早期诊断标志物中至少一种在受试体血清样本中与对照...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪艳，杨金连，何彩萍，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东;44