【技术实现步骤摘要】
基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物
，涉及一种外泌体膜蛋白检测技术，特别是涉及一种基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台及其制备方法与应用，可采用免超离荧光方法同步检测外泌体两种膜蛋白。
技术介绍
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。外泌体可以携带蛋白，运送RNA，在细胞间物质和信息转导中起重要作用；外泌体可能通过调控免疫功能，促进肿瘤血管新生和肿瘤转移，以及直接作用于肿瘤细胞等途径，影响肿瘤的进展。外泌体携带的膜蛋白被认为是新型癌症诊断的生物标志物，其最常规的鉴定方法是蛋白免疫印迹(WesternBlot，WB)，但该方法检测耗时长、操作步骤复杂、检测灵敏度低，且需要多重抗体与大量外泌体，不利于外泌体膜蛋白的快速鉴定和临床疾病早期诊断应用。近年来，研究人员利用不同的传感机制专门设计适用于纳米级尺寸外泌体检测的生物传感技术，由于这些技术需要样品体积少、样...
【技术保护点】
1.一种基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用抗体CD63包被磁珠，与外泌体孵育，通过磁性分离法分离富集外泌体，以Apt
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用抗体CD63包被磁珠，与外泌体孵育，通过磁性分离法分离富集外泌体，以AptEpCAM-T作为外泌体的识别元件及催化反应启动元件，然后与发卡结构H1及发卡结构H2共同构建组成检测平台。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述发卡结构H1的序列为：
所述发卡结构H2的序列为：
所述AptEpCAM-T的序列为：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述发卡结构H1以FAM作为荧光报告基团、以BHQ1作为荧光猝灭基团，所述发卡结构H1的序列为：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述磁性分离法包括如下步骤：
1)吸取50ul包被CD63抗体的磁珠于PE管中，置于磁力架磁性分离，留取沉淀磁珠；
2)用200ul0.1％BSAPBS缓冲液洗涤1次磁珠，每次洗涤将样品置于磁力架上使其充分沉降，留取沉淀，最后用200ul0.1％BSAPBS缓冲液重悬沉淀；
3)加入5ul外泌体，摇床孵育18-22h；
4)样品置于磁力架磁性分离，留取沉淀，用200ul0.1％BSAPBS缓冲液洗涤2次样品，留取沉淀，即得外泌体。
5.一种基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台，其特征在于：所述检测平台包括磁珠包被的抗体CD63、外泌体、外泌体催发链、发卡结构H1及发卡结构H2，所述检测平台能够实现外泌体双膜蛋白共表达的定性检测。
6.根据权利要求5所述的检测平台，其特征在于：所述外泌体催发链为AptEpCAM-T，其序列为：
技术研发人员：郑磊，陈贤华，潘炜伦，李博，张晔，罗世华，司徒博，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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