C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种C‑反应蛋白快速定量免疫层析试纸及其制备方法，该定量检测CRP胶体金免疫层析方法是利用羧基化胶体金与特异性抗体共价结合的标记技术及免疫层析技术，层析膜位置同时设置三条检测线及一条质控线，通过对四条检测线显色情况进行计算，实现对检测样本中CRP的精准定量。

Rapid quantitative immunochromatography of C-reactive protein and its preparation

【技术实现步骤摘要】
C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸及其制备方法
本专利技术涉及检测
，涉及C-反应蛋白(CRP)快速定量免疫层析试纸及其制备方法，以及更具体地涉及一种定量检测C-反应蛋白的胶体金免疫层析方法及其检测试纸。
技术介绍
C-反应蛋白(C-reactiveproteinCRP)是一种典型的急性时相蛋白，因最早发现其和肺炎球菌的C多糖发生沉淀反应而得名。在结构上，CRP的相对分子量为11.5万-14万，是由5个相同的多肽链亚单位以非共价键结合，形成对称的环状五球体，中间环绕一孔型结构，其凹面含有配体结合位点，每个亚单位有206个氨基酸残基。CRP正常情况下含量极微量，在急性创伤和感染时其血浓度急剧升高。在健康人群中，新生儿血清中CRP＜2mg/L，儿童和成年人血清中CRP≤10mg/L。而在人体发生炎症疾病或者组织发生溃烂或坏死时的四到八小时内，CRP值急剧升高可达到约20至500毫克/升，且随着组织结构和功能的恢复，CRP含量也恢复正常值。因此CRP在血液中的水平，可用于评价感染，组织损伤和炎症性疾病的严重性，进程，愈后和治疗效果。超敏C反应蛋白(hypersensitive-CRP，hs-CRP)还可作为心血管疾病的重要指标，其水平可预测将来心肌梗塞及中风的危险性。健康人超敏CRP的参考范围基本为0.58-1.13mg/L。CRP含量大于2.1mg/L的较CRP≤1.0mg/L的人，将来发生心肌梗塞的危险性是后者的2.9倍，发生缺血性中风的危险性是后者的1.9倍。超敏CRP和血脂的联合测定，较其他危险因子更能预示发生心，脑血管疾病的危险性。目前，临床实验室测定CRP的常规方法主要有胶乳凝集试验和免疫比浊法(如散射、透射比浊法，并且已实现了自动化)以及放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和发光法。但是现有方法存在需要专业化仪器设备，专业实验室操作，操作复杂耗时长，所需样品量大等问题，无法满足当今高新科技的发展和医学科学的进步对即时检测技术(POCT)的要求。免疫层析法(Lateralflowimmunoassay，LFIA)是目前常用的快速检测方法之一。免疫层析是一种快速免疫分析技术，有效结合了层析法和免疫检测法的优点。免疫层析法具有操作简单、检测快速、结果易观察、样品需要量少、成本低、携带和保存方便等优点，此外，试纸条检测无需仪器或仅需简单仪器，且操作人员不需技术培训，非常适合现场检测及大规模筛查检测之用，目前已广泛应用于医学检测、食品安全检测、农牧业等多个领域中，具有良好的应用前景。CN106370861B公开了一种C反应蛋白唾液检测试纸条，包括反应膜和金标垫，所述反应膜为硝酸纤维膜，其具有分别包被C反应蛋白单克隆抗体的检测线和羊抗鼠IgG的质控线；所述金标垫是包被有胶体金标记的C反应蛋白单克隆抗体的聚酯膜。CN103217532A公开了一种C-反应蛋白检测试纸条，包括底板(7)以及贴附在底板(7)上的样品区(6)、金标记CRP单克隆抗体I区(5)、硝酸纤维素膜(2)和吸水垫(1)；所述样品区(6)、所述金标记CRP单克隆抗体I区(5)、所述硝酸纤维素膜(2)和所述吸水垫(1)在液体流动方向上顺序排列；所述硝酸纤维素膜(2)上设有在液体流动方向上顺序排列的第一单克隆抗体线(9)、第二单克隆抗体线(8)、第三单克隆抗体线(4)以及质控线(3)；所述第一单克隆抗体线(9)包含5μgCRP单克隆抗体II，所述第二单克隆抗体线(8)包含15μgCRP单克隆抗体II，所述第三单克隆抗体线(4)包含5μgCRP单克隆抗体II；所述CRP单克隆抗体I的抗原表位与所述CRP单克隆抗体II的抗原表位不同。CN109270274A公开了一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，其特征在于：所述的量子垫上包被有碳量子点标记的C反应蛋白抗体，所述的硝酸纤维素膜上自所述的样品垫所在侧向着所述的吸水纸所在侧依次设置有检测线和质控线，所述的检测线上包被有识别C反应蛋白的单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗鼠IgG。CN108333374A公开了C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A免疫层析定量联合检测试纸条及其制备方法，包括卡壳、底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述试纸条由样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接粘贴在底板上构成。荧光标记物结合垫含有链霉亲和素标记荧光蛋白和生物素标记的C-反应蛋白单克隆抗体、生物素标记的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体；硝酸纤维膜上有检测线和质控线。CN202814988U公开了一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，在其底衬上依次相互搭接的是第一样品垫、第二样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上设有第一检测线、第二检测线和质控线。CN102023211A公开了一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，所述试纸条由样品垫(1)、标记垫(2)、包被膜(3)、吸水纸(4)顺次搭接粘贴在底板上构成，其特征在于，所述标记垫(2)上包被有荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体和荧光胶乳微粒标记的兔IgG；所述包被膜(3)包括检测区(5)和质控区(6)，所述检测区(5)包被有与所述荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体处于不同表位的另一种CRP单克隆抗体。“5种C反应蛋白快速检测系统检测性能比较”，蒋玲丽等，检验医学，2016年04期，评价了目前常用的5种C反应蛋白(CRP)快速检测系统的分析性能。方法对5种CRP快速检测系统(UppergoldU2金标斑点法定量读数仪、NEPHSTAR特定蛋白分析仪、ABXMicrosCRP200全自动血液分析仪、i-CHROMAReader免疫荧光分析仪和QuikRead101型检测系统，均使用原厂配套试剂；以A、B、C、D、E随机顺序代表)进行不精密度即变异系数(CV)]、准确度、线性、抗干扰能力性能评价，对参考区间进行验证，并以DadeBehringBNProSpec全自动血浆蛋白分析系统(简称DADE系统)作为参照系统进行比较。然而，上述传统胶体金大多利用物理吸附原理标记，其存在明显的工艺稳定性差从而导致定量不精准、灵敏度差的问题。本领域需要一种定量精准、灵敏度高的定量检测C-反应蛋白的检测试纸以及定量检测C-反应蛋白的胶体金免疫层析方法。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术人通过深入系统研究和联合开发，完成了一种新的基于胶体金免疫层析技术的C-反应蛋白定量测试试纸与测试盒，利用羧基化胶体金与特异性抗体共价结合的标记技术及免疫层析技术，通过对检测区域4条检测线显色情况进行综合计算，实现对检测样本中CRP的精准定量。与常规胶体金免疫层析方法相比，本专利技术具有标记稳定性好、灵敏度高、定量准确、线性范围宽的明显优势，不仅可以满足常规CRP的定量测定，还较其他免疫层析法提高了灵敏度，可以显著实现超敏CRP的检测。更具体而言，本专利技术利用共价结合原理对胶体金溶液进行修饰，较传统胶体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中该试纸包括：从左至右方向即沿层析方向依次粘贴于底板上的样品垫、滤血垫、标记垫、层析膜和吸收垫。/n

【技术特征摘要】
1.一种C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中该试纸包括：从左至右方向即沿层析方向依次粘贴于底板上的样品垫、滤血垫、标记垫、层析膜和吸收垫。


2.根据权利要求1所述的C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中所述标记垫上固定有抗体修饰的羧基化胶体金溶液。


3.根据权利要求2所述的C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中所述抗体修饰的羧基化胶体金溶液通过以下方法得到：利用共价结合作用将C-反应蛋白的特异性抗体连接到羧基化胶体金，制得抗体修饰的羧基化胶体金溶液。


4.根据权利要求3所述的C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中所述抗体是CRP单克隆抗体。


5.根据前述权利要求中任一项所述的C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中所述层析膜上设有三条检测线和一条质控线。


6.根据权利要求5所述的C-反应蛋白快速定量免疫层析试纸，其中所述三条检测线和一条质控线的排列顺序是：沿层析方向，依次为第三检测线、第二检测线、第一检测线和质控线。


7.一种制备根据前述权利要求1-6中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光中，姚世平，高鲁嘉，关苗，丁绍伟，
申请(专利权)人：北京倍肯恒业科技发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11