多重PCR反应体系制造技术

本发明专利技术提供了一种单管超多重的PCR检测引物探针组的设计方法、反应体系以及基于所述方法和反应体系的多重靶标检测试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，特别是属于核酸扩增和检测领域。

技术介绍

1、聚合酶链式反应(pcr)是不采用活的生物体而对dna进行酶复制的分子生物学技术。pcr通常用于医学和生物研究实验室以承担多种任务，例如感染性疾病的诊断、基因克隆、实验动物表型鉴定、转录组研究、遗传疾病的检测、基因指纹的鉴定、亲子鉴定等等。由于其无可比拟的复制和精确能力，pcr被分子生物学家认为是核酸检测的首选方法。上世纪90年代后期，美国abi公司推出的实时荧光定量pcr(real time quantitative pcr，qpcr)技术及相关产品更是将pcr发展成为一种高灵敏、高特异性和精确定量的核酸序列分析技术。

2、目前在qpcr平台应用较多的引物探针设计方式主要为taqman水解探针法，其工作原理主要是利用了一条能与模板特异性结合且两端分别标记荧光基团(供体)和淬灭基团(受体)的寡核苷酸探针，同时在探针的上游和下游分别设计一条特异性pcr引物。在pcr反应开始之前，由于荧光共振能量转移(fret)原理，taqman探针一端的荧光基团发射的荧光信号被另一端的淬灭本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于PCR检测靶序列的组合物，所述组合物包括检测探针和引物组，所述引物组包含第一引物，第二引物和辅助引物，

2.根据权利要求1的组合物，所述辅助引物上的阻断区位于序列h2的上游，和/或位于序列x的下游。

3.根据权利要求1的组合物，所述第一引物和第二引物还分别包含与靶序列相结合的靶序列结合区，并且所述检测探针不包含与所述靶序列互补或相同的序列。

4.根据权利要求1的组合物，所述检测探针还包含阻断区，如果所述检测探针与检测序列的结合位点在所述阻断区的下游，所述阻断区阻断检测序列的继续延伸，

5.根据权利要求1的组合物，所述组合物包含针对n...

【技术特征摘要】

1.用于pcr检测靶序列的组合物，所述组合物包括检测探针和引物组，所述引物组包含第一引物，第二引物和辅助引物，

2.根据权利要求1的组合物，所述辅助引物上的阻断区位于序列h2的上游，和/或位于序列x的下游。

3.根据权利要求1的组合物，所述第一引物和第二引物还分别包含与靶序列相结合的靶序列结合区，并且所述检测探针不包含与所述靶序列互补或相同的序列。

4.根据权利要求1的组合物，所述检测探针还包含阻断区，如果所述检测探针与检测序列的结合位点在所述阻断区的下游，所述阻断区阻断检测序列的继续延伸，

5.根据权利要求1的组合物，所述组合物包含针对n条靶序列的n组引物组和m条检测探针，其中1≤n≤20，1≤m≤n，

6.根据权利要求1的组合物，所述第一引物或第二引物从5’端至3’端依次包括序列a和靶序列结合区，所述第一引物或第二引物从5’端至3’端依次包括辅助结合区x，序列h1和靶序列结合区。

7.根据权利要求1的组合物，所述第一引物为正向引物，

8.根据权利要求1的组合物，所述第二引物为反向引物，

9.根据权利要求1的组合物，所述检测探针的长度为15-800个碱基长度，优选15-600个碱基长度，优选15...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡莞尔，葛志琪，赵雨航，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：