一种坎地沙坦酯基因毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种坎地沙坦酯基因毒性杂质1‑氯乙基环己基碳酸酯的分析方法，属于原料药分析技术领域。本发明专利技术利用坎地沙坦酯中自身存在的杂质1‑氯乙基环己基碳酸酯与坎地沙坦酯本身进行衍生反应的柱前衍生化方法，测定杂质1‑氯乙基环己基碳酸酯含量，实现了对坎地沙坦酯中基因毒性杂质1‑氯乙基环己基碳酸酯的控制。本发明专利技术提供了一种坎地沙坦酯中该基因毒性杂质的检测方法，为坎地沙坦酯制剂的质量控制提供了保障。

A method for the detection of toxic impurities in candesartan ester gene

The invention relates to an analysis method of 1 \u2011 chloroethyl cyclohexyl carbonate, a genotoxic impurity of candesartan ester, belonging to the technical field of API analysis. The invention uses the pre column derivatization method of derivatization reaction between the impurity 1 \u2011 chloroethyl cyclohexyl carbonate in candesartan ester and candesartan ester to determine the content of the impurity 1 \u2011 chloroethyl cyclohexyl carbonate, and realizes the control of the genotoxic impurity 1 \u2011 chloroethyl cyclohexyl carbonate in candesartan ester. The invention provides a detection method of the gene toxic impurity in candesartan ester, which provides a guarantee for the quality control of candesartan ester preparation.

【技术实现步骤摘要】
一种坎地沙坦酯基因毒性杂质的检测方法
本专利技术涉及一种坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的分析方法，属于原料药质量控制

技术介绍
基因毒性杂质与药品质量、安全性密切相关，基因毒性杂质的存在可能会对人体产生毒副作用，甚至引起基因突变或者癌症等。因此，必须通过适当的检测分析方法控制药物中基因毒性杂质的种类和含量，确保药品质量。坎地沙坦酯是一种选择性血管紧张素II受体（ATI）拮抗剂，适用于原发性高血压，化学名为（±）-l-[(环己氧基）羰基氧基]乙基2-乙氧基-1-[[2’-(1H-四氮唑基-5-基）联苯-4-基]甲基]-1H-苯并咪唑-7-羧酸酯，化学结构式如下：。目前，常用的坎地沙坦酯合成工艺为：。1-氯乙基环己基碳酸酯是合成坎地沙坦酯的原料，因含有基因毒性结构，根据药品注册法规，需要在坎地沙坦酯原料药中对1-氯乙基环己基碳酸酯进行检测。因1-氯乙基环己基碳酸酯紫外吸收极弱，且遇水会降解，而坎地沙坦酯在高温条件下也会降解，同时作为基因毒性杂质，要求其限度极低，根据该药制剂的用法用量，上述基因毒性杂质的限度为47ppm。文献《MethoddevelopmentandvalidationbyGC-MSforquantificationof1-chloroethylcyclohexylcarbonateasagenotoxicimpurityincandesartancilexetildrugsubstance》（NalavadeAtulKakasaheb,RamakrishnaK,SrinivasaraoV.MethodDevelopmentandValidationbyGC-MSforQuantificationfor1-ChloroethylCyclohexylCaronateasaGenotoxicImpurityinCandesartanCilexetilDrugSubstance.InternationalJournalofPharmacyandPhermaceuticalSciences.2014,vol6,Issue11:370-372）中采用GC-MS检测杂质1-氯乙基环己基碳酸酯，文献采用丙酮做溶剂，存在以下缺陷：一是在丙酮中坎地沙坦酯不溶解；二是坎地沙坦酯在170℃以上高温条件下会降解，降解物质进入质谱检测器，重复进样会干扰杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测，并污染检测器，导致检测结果不准确。且使用气相-质谱检测器，价格昂贵，限制了方法的推广。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有较高精密度的坎地沙坦酯中基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法。通过高效液相柱前衍生法对样品前处理、流动相、色谱条件等反复筛选，探索出了合适的分析条件。本专利技术利用坎地沙坦酯中自身存在的杂质1-氯乙基环己基碳酸酯与坎地沙坦酯本身进行衍生反应的柱前衍生化方法，测定杂质1-氯乙基环己基碳酸酯含量，实现了对坎地沙坦酯中基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的控制，保证了坎地沙坦酯原料药的质量。本专利技术的技术方案是：一种坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，包括以下步骤：步骤1.采用衍生化法制备样品溶液：在碱性条件下，以碘化钾做催化剂，坎地沙坦酯原料药与自身存在的1-氯乙基环己基碳酸酯反应，水浴加热至40-80℃并搅拌，生成衍生物1与衍生物2。反应方程式如下：。后处理过程：将反应瓶中的反应液用滤纸过滤，保留滤液作为供试品溶液。所述搅拌为磁旋子搅拌加热3-8h，更优选的，所述水浴加热温度为60℃，磁旋子搅拌加热3h。反应溶剂选自N,N-二甲基乙酰胺。因衍生条件下，1M的杂质1-氯乙基环己基碳酸酯与坎地沙坦酯反应，会生成1M的衍生物1或者1M的衍生物2，杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的分子量为206.67，衍生物1、衍生物2的分子量均为780.35，根据杂质1-氯乙基环己基碳酸酯与衍生物1/衍生物2的分子量，折合换算系数为：0.265:1，故杂质1-氯乙基环己基碳酸酯检出量为衍生物1与衍生物2检出量之和乘以0.265。所述碱性条件用碳酸钾控制，为分析纯试剂。取坎地沙坦酯供试品2-10g，优选的，取坎地沙坦酯供试品2g，加入的碳酸钾的量为0.4g-1.0g，碘化钾的量为0.04g-0.20g，加入3-8mlN,N-二甲基乙酰胺，加热反应。本专利技术检测方法衍生过程中溶剂与坎地沙坦酯的比例、衍生温度及衍生时间对检测结果中基因毒性杂质的回收率有很大影响。通过研究发现，衍生过程中溶剂与坎地沙坦酯的比例为（2-2.5）ml：1g时回收率最好，衍生温度为60℃，反应3小时时反应最完全。所述后处理过程为：反应液用滤纸过滤，用乙腈冲洗反应瓶并过滤，滤液置于100ml量瓶中，用乙腈定容，摇匀。再精密量取5ml，置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。步骤2.对照品溶液的制备：分别取坎地沙坦酯衍生物1和坎地沙坦酯衍生物2的对照品，加乙腈溶解后制成分别含坎地沙坦酯衍生物1和坎地沙坦酯衍生物2的溶液，作为对照品溶液。坎地沙坦酯衍生物1和坎地沙坦酯衍生物2对照品由申请人根据药品注册法规自行制备。具体的，包括以下步骤：分别精密称定衍生物1和衍生物2对照品各约18mg，置同一100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取1ml对照品贮备液，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。步骤3.检测：采用高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，依据相对保留时间和色谱峰面积，确定供试品溶液中坎地沙坦酯衍生物1和衍生物2的含量。色谱系统为高效液相色谱仪，色谱柱填料为十八烷基硅烷键和硅胶柱，检测波长为208-212nm，流速：0.6-1.0ml/min。流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱。所述高效液相色谱法的色谱条件为：检测波长为210nm，流速：0.8ml。梯度洗脱，分析时间50min。所述梯度洗脱的具体程序为（见表1）：第0-27min，A相：B相体积比为45:55-10:90；第27-40min，A相：B相体积比为10:90；第40-41min，A相：B相体积比为10:90-45:55；第41-50min，A相：B相体积比为45:55。表1洗脱梯度表。所述高效液相色谱法还包括有以下条件：柱温：25-40℃，优选为30℃；进样量5-50μl，优选为10μl。所述确定供试品溶液中衍生物1、衍生物2的成分含量的方法为外标法。所述外标法是指：按各品种项下的规定，精密称取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，进样，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1. 采用衍生化法制备样品溶液：/n在碱性条件下，以碘化钾做催化剂，坎地沙坦酯原料药与自身存在的1-氯乙基环己基碳酸酯反应，水浴加热至40-80℃并搅拌，生成衍生物1与衍生物2，将反应瓶中的反应液用滤纸过滤，保留滤液作为供试品溶液，反应方程式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1.采用衍生化法制备样品溶液：
在碱性条件下，以碘化钾做催化剂，坎地沙坦酯原料药与自身存在的1-氯乙基环己基碳酸酯反应，水浴加热至40-80℃并搅拌，生成衍生物1与衍生物2，将反应瓶中的反应液用滤纸过滤，保留滤液作为供试品溶液，反应方程式如下：

；
步骤2.对照品溶液的制备：
分别称取坎地沙坦酯衍生物1和坎地沙坦酯衍生物2的对照品，加乙腈溶解后制成分别含坎地沙坦酯衍生物1和坎地沙坦酯衍生物2的溶液，作为对照品溶液；
步骤3.检测：
采用高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，依据相对保留时间和色谱峰面积，确定供试品溶液中坎地沙坦酯衍生物1和衍生物2的含量，色谱系统为高效液相色谱仪，色谱柱填料为十八烷基硅烷键和硅胶柱，柱温：25-40℃，检测波长为208-212nm，流速：0.6-1.0ml/min，流动相A为水，流动相B为乙腈，进样量5-50μl，梯度洗脱，
所述梯度洗脱的具体程序为：
第0-27min，A相：B相体积比为45:55-10:90；
第27-40min，A相：B相体积比为10:90；
第40-41min，A相：B相体积比为10:90-45:55；
第41-50min，A相：B相体积比为45:55。


2.根据权利要求1所述坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，其特征在于，步骤1中，水浴加热温度控制在60℃。


3.根据权利要求1所述坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，其特征在于，步骤1中，反应溶剂选自N,N-二甲基乙酰胺。


4.根据权利要求1所述坎地沙坦酯基因毒性杂质1-氯乙基环己基碳酸酯的检测方法，其特征在于，步骤1中，取坎...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，李晶，高钦磊，
申请(专利权)人：威海迪素制药有限公司，迪沙药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37