编码甲基-CpG结合蛋白2的重组腺相关病毒的鞘内递送制造技术

提供了用于对编码甲基‑CpG结合蛋白2(MECP2)的重组腺相关病毒9(rAAV9)进行鞘内递送的方法和材料。例如，设想了这些方法和材料用于治疗瑞特综合征的用途。

Intrathecal delivery of recombinant adeno-associated virus encoding methyl-CpG binding protein 2

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】编码甲基-CpG结合蛋白2的重组腺相关病毒的鞘内递送本申请要求2016年11月17日提交的美国临时专利申请系列号62/423,618的优先权。通过电子提交材料的引用并入通过引用以其整体并入的是同时提交并且鉴定如下的计算机可读形式的序列表：ASCII文本文件名为“50215PCT_SeqListing.txt”，24,148字节，2017年11月17日创建。
本专利技术涉及用于对编码甲基-CpG结合蛋白2(MECP2)的重组腺相关病毒9(rAAV9)进行鞘内递送的方法和材料。例如，设想了这些方法和材料用于治疗瑞特综合征(Rettsyndrome)的用途。
技术介绍
瑞特综合征是一种神经发育X连锁显性病症，发病率是10,000个女孩中有大约1个患病。半合子男性通常死于新生儿脑病。杂合子女性存活到成年期，但是表现出严重的症状，包括小头畸形、失去有目的手运动和语言能力、以及运动异常，这些症状在表面上正常发育期之后出现。发作年龄在6-18个月左右。瑞特综合征被分类为典型的(或经典的)瑞特综合征或非典型瑞特综合征。编码转录因子甲基-CpG结合蛋白2(MECP2)的自发突变基因引起两种分类中大部分(大约90％)病例，尽管非典型瑞特综合征可能是由MECP2以外的基因的突变引起的。MECP2突变的性质(例如缺失对比点突变)和X染色体失活偏移影响疾病严重性。MECP2转录因子调节数千种基因的转录。治疗努力已经集中在MECP2下游的靶，包括神经递质、生长因子和代谢途径。已经报道了针对瑞特综合征的至少九种临床试验跨不同措施的积极结局，但是这些发现尚未独立地进行验证或产生新的治疗[Katz等人,TrendsinNeurosciences[神经科学趋势],39:100-113(2016)]。对于瑞特综合征，目前还没有经认可的疗法。存在雄性和雌性小鼠模型，其中小鼠表现出RTT样行为[Guy等人,NatureGenetics[自然遗传学],27:322-326(2001)；Chen等人,NatureGenetics[自然遗传学]27:327-331(2001)；以及Katz等人,5:733-745(2012)]。MECP2是52kD核蛋白，它在多种组织中表达，但是在神经元中富集，并且已经在神经系统中对其进行了最多研究。在人类中存在MECP2的两种同种型，称为MECP2A和MECP2B(图1)[Weaving等人,JournalofMedicalGenetics[医学遗传学杂志],42:1-7(2005)]。这两种同种型源自可变剪接mRNA转录物，并且具有不同翻译起始位点。MECP2B包括外显子1、3和4并且是脑中的主要同种型。MECP2可逆地结合甲基化DNA并且调节基因表达[Guy等人,AnnualReviewofCellandDevelopmentalBiology[细胞与发育生物学年度评论],27:631-652(2011)]。这些功能分别映射到甲基结合结构域(MBD)和转录阻遏因子结构域(TRD)[Nan和Bird,Brain&Development[脑和发育],23,增刊1:S32-37(2001)]。MECP2最初被认为是转录阻遏因子，可以同时诱导和抑制靶基因表达[Chahrour等人,Science[科学],320:1224-1229(2008)]。假设MECP2支持正确的神经发育和维持。在神经元中，MECP2通过DNA结合和与不同结合配偶体相互作用，促进突触活动转化为基因表达[Ebert等人,Nature[自然],499:341-345(2013)和Lyst等人,NatureNeuroscience[自然神经科学],16:898-902(2013)]。在星形胶质细胞中，MECP2缺陷与小鼠中的窒息事件相关联[Lioy等人,Nature[自然],475:497-500(2011)]。MECP2缺陷会引起脑尺寸减小，增加神经元填充密度和降低树突复杂性[Armstrong等人,JournalofNeuropathologyandExperimentalNeurology[神经病理学和实验神经学杂志],54:195-201(1995)]。重要地是，神经元死亡MECP2缺陷不相关联[Leonard等人,NatureReviews,Neurology[自然评论,神经学],13:37-51(2017)]。还在神经系统外发现了MECP2，不过它的水平在不同组织间不同(图2)。最近的研究检查了小鼠中瑞特综合征对于外周Mecp2表达的依赖性[Ross等人,HumanMolecularGenetics[人类分子遗传学],25:4389-4404(2016)]。外周缺陷活动过少、运动疲劳和骨异常相关联。外周MECP2敲除小鼠中缺失大部分RTT相关行为、感觉运动、步态和自主(呼吸和心脏)表型。因为MECP2是X连锁基因，所以在雌性中，由于X染色体失活(Xci)，MECP2的一个拷贝被沉默。在每个细胞基础上，Xci被认为是随机的，这导致瑞特雌性MECP2嵌合状态。无论活性X染色体含有完整的还是突变的MECP2基因，疾病严重性都受到影响。这被称为偏移Xci。雄性并不经历Xci，因此MECP2缺陷更严重，因为没有细胞会具有MECP2的功能拷贝。MECP2突变的性质还影响疾病严重性。在RettBASE数据库(http://mecp2.chw.edu.au/)中描述了MECP2基因的超过600种不同突变，包括缺失、无义突变和点突变。最常见的突变(大约9％的患者)是T185M等位基因，它影响甲基结合结构域。其他常见突变示出在图3中(Leonard，同上)。这些总计占RettBASE中列出的超过40％的病例。在8％-10％的病例中发现涉及MECP2的大规模缺失[Li等人,JournalofHumanGenetics[人类遗传学杂志],52:38-47(2007)和Hardwick等人,EuropeanJournalofHumanGenetics[欧洲人类遗传学杂志],15:1218-1229(2007)]。存在R133C、R294X和C末端突变与缺失(TRD的下游)的基因型-表型相关性，引起更温和的疾病。大的缺失和早期截短突变(R270X、R255X和R168X)严重的瑞特综合征相关联。表1描述了最近由一组国际瑞特临床医生汇编的共识性瑞特诊断标准[Neul等人,AnnalsofNeurology[神经学年报],68:944-950(2010)]。腺相关病毒(AAV)是复制缺陷型细小病毒，它的单链DNA基因组是约4.7kb长并且包括145个核苷酸的反向末端重复序列(ITR)。AAV血清型2(AAV2)基因组的核苷酸序列呈现在以下文献中：Srivastava等人,JVirol[病毒学杂志],45:555-564(1983)，由以下文献修正：Ruffing等人,JGenVirol[普通病毒学杂志],75:3385-3392(1994)。ITR内含有指导病毒DNA复制(rep)、包壳/包装和宿主细胞染色体整合的顺式作用序列。三个AAV启动子(针对其相对图定位称为p5、p19、和p40)驱动编码rep和cap基因的两个AAV内部开放读码框的表达。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗患者的瑞特综合征的方法，该方法包括以下步骤：向有需要的患者鞘内给予编码甲基‑CpG结合蛋白2(MECP2)的重组腺相关病毒9(rAAV9)，其中该rAAV9包含编码MECP2B的自身互补基因组，并且其中该自身互补基因组的序列在SEQ ID NO:1中列出。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.17 US 62/423,6181.一种治疗患者的瑞特综合征的方法，该方法包括以下步骤：向有需要的患者鞘内给予编码甲基-CpG结合蛋白2(MECP2)的重组腺相关病毒9(rAAV9)，其中该rAAV9包含编码MECP2B的自身互补基因组，并且其中该自身互补基因组的序...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·K·卡斯帕，K·福斯特，
申请(专利权)人：全国儿童医院公司，俄亥俄州创新基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US