【技术实现步骤摘要】
一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法。
技术介绍
白酒作为我国优势传统酿造食品，是粮食精深加工行业及固态酿造产业的典型代表之一，对促进农民增产增收、企业增效、国家增税具有重要意义。浓香型白酒作为四大基本香型白酒之一，处于主导地位，其中酒醅是白酒酿造过程中微生物发酵的主要载体和白酒呈香物质的直接来源。目前对于酒醅中微生物的研究，主要集中在以16SrDNA为基础的微生物群落多样性研究，尽管从DNA水平上已发现酒醅中存在成百上千种微生物，但无法检测其中微生物的活性状态。此外，绝大多数(≈90％)微生物在现有实验条件下很难实现纯培养，进而无法确定上述微生物在白酒酿造中的功能及其对白酒酿造的具体贡献。较之于DNA水平上的微生物研究，以RNA为基础的转录组学研究能更真实地反应微生物在白酒酿造环境中的活性微生物状态，是研究复杂生态体系中的微生物生理功能、物质和能量代谢、代谢关联性及发酵机制的必要手段。目前关于RNA的提取方法有Trizol法、SDS法、CTAB法和试剂盒法等，Trizol法和...
【技术保护点】
1.一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱腐处理：取7g酒醅于离心管中，加入3‑8mL 0.8‑1.2mol/L的CaCl2溶液和3‑8mL 4‑6％PVP溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；沉淀中加入5‑15mL 0.04‑0.06mol/L的草酸钠溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；(2)PBS处理：步骤(1)处理得到的沉淀中加入10‑15mL 0.08‑0.12mol/L PBS缓冲液悬浮，加入3‑6颗大玻璃珠，涡旋振荡，离心，取上清至新的离心管中，剩余沉淀再洗涤一次，将两次的上清混合，离心，弃去上清，收集细胞沉淀，然后转移至新的离心管中；(...
【技术特征摘要】
1.一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱腐处理：取7g酒醅于离心管中，加入3-8mL0.8-1.2mol/L的CaCl2溶液和3-8mL4-6％PVP溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；沉淀中加入5-15mL0.04-0.06mol/L的草酸钠溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；(2)PBS处理：步骤(1)处理得到的沉淀中加入10-15mL0.08-0.12mol/LPBS缓冲液悬浮，加入3-6颗大玻璃珠，涡旋振荡，离心，取上清至新的离心管中，剩余沉淀再洗涤一次，将两次的上清混合，离心，弃去上清，收集细胞沉淀，然后转移至新的离心管中；(3)提取：步骤(2)处理得到的细胞沉淀中加入0.4-0.6g小玻璃珠，再加入260-330uLSDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清至新的离心管中；继续在沉淀中加入260-330uLSDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清和前一步中的上清混合；(4)去除蛋白质：向步骤(3)得到的上清中加入490-510uL酸性水饱和酚，涡旋混匀，离心，取上清；上清中加入490-510uL氯仿-异戊醇混合液，涡旋混匀，离心，取上清；(5)沉淀RNA：步骤(4)得到的上清中加入1.8-2.2倍体积的PEG-NaCl混合液，混匀，低温静置1.5-2.5h，离心，弃上清；(6)清洗RNA：步骤(5)得到的沉淀中加入180-220uL的65-75％乙醇清洗沉淀，离心，弃上清，吹干沉淀；(7)溶解RNA：在步骤(6)沉淀中加入50uLRNase-freewater溶解RNA，低温保存。2.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤(2)所述的PBS缓冲液由NaH2PO4溶液、Na2HPO4溶液和去离...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓龙，王康丽，白艳红，曹振华，牛广杰，许育民，赵东，韩素娜，张治刚，李红，
申请(专利权)人：郑州轻工业学院，
类型：发明
国别省市：河南,41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。