【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺苷核碱基编辑器及其用途专利技术背景靶向编辑核酸序列，例如靶向切割或将特定修饰靶向引入基因组DNA中，是用于研究基因功能的非常有前景的方法，并且还具有为人类遗传性疾病提供新疗法的潜力。由于许多遗传性疾病原则上可以通过在基因组中的特定位置处实现特定的核苷酸变化来治疗(例如，与疾病相关的基因的特定密码子中的A至G或T至C的变化)，开发可编程的方法来实现此类精确的基因编辑既代表强大的新研究工具，又代表基于基因编辑的治疗学的潜在新方法。专利技术概述本文提供了使用腺苷脱氨酶和核酸可编程DNA结合蛋白(例如Cas9)修饰多核苷酸(例如DNA)的组合物、试剂盒和方法。本公开的一些方面提供了核碱基编辑蛋白，其在DNA的背景下催化腺苷的水解脱氨基作用(形成肌苷，其如鸟嘌呤(G)一样碱基配对)。没有作用于DNA的已知天然存在的腺苷脱氨酶。相反，已知的腺苷脱氨酶作用于RNA(例如，tRNA或mRNA)。为了克服这个缺点，将第一脱氧腺苷脱氨酶演化成接受DNA底物并将脱氧腺苷(dA)脱氨基成脱氧肌苷。来自大肠杆菌的作用于tRNA的腺苷脱氨酶(adenosinedeaminaseactingo...
【技术保护点】
1.腺苷脱氨酶，其能够使脱氧核糖核酸(DNA)中脱氧腺苷的腺嘌呤脱氨基。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.03 US 62/370,684;2017.02.02 US 62/454,035;1.腺苷脱氨酶，其能够使脱氧核糖核酸(DNA)中脱氧腺苷的腺嘌呤脱氨基。2.权利要求1的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶来自细菌。3.权利要求1或2的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶来自大肠杆菌或金黄色葡萄球菌细菌。4.权利要求1-3中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶是TadA脱氨酶。5.权利要求4的腺苷脱氨酶，其中所述TadA脱氨酶是大肠杆菌TadA脱氨酶(ecTadA)。6.权利要求1-5中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶包含与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.5％相同的氨基酸序列。7.权利要求1-6中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是D之外的任何氨基酸。8.权利要求7的腺苷脱氨酶，其中X是G、N、V、A或Y。9.权利要求7的腺苷脱氨酶，其中X是N。10.权利要求1-9中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是A之外的任何氨基酸。11.权利要求10的腺苷脱氨酶，其中X是V、I或L。12.权利要求10的腺苷脱氨酶，其中X是V。13.权利要求1-12中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E155X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是E之外的任何氨基酸。14.权利要求13的腺苷脱氨酶，其中X是D、G或V。15.权利要求13的腺苷脱氨酶，其中X是V。16.权利要求1-15中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D147X突变，或另一种腺嘌呤脱氨酶中的相应的突变，其中X是D之外的任何氨基酸。17.权利要求16的腺苷脱氨酶，其中X是Y或F。18.权利要求16的腺苷脱氨酶，其中X是Y。19.权利要求1-18中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含选自下组的一个或多个突变：SEQIDNO：1中的S2A、H8Y、I49F、L84F、A106V、A106T、D108R、H123Y、N127S、D147Y、E155V、I156F和K160S突变，或另一种腺苷脱氨酶中的一个或多个相应的突变。20.权利要求1-19中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的L84F突变，或另一种腺嘌呤脱氨酶中的相应的突变。21.权利要求1-20中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H123Y突变，或另一种腺嘌呤脱氨酶中的相应的突变。22.权利要求1-21中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H156F突变，或另一种腺嘌呤脱氨酶中的相应的突变。23.权利要求1-22中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是E之外的任何氨基酸。24.权利要求23的腺苷脱氨酶，其中X是M、D、A、R、V、S或Y。25.权利要求1-24中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是R之外的任何氨基酸。26.权利要求25的腺苷脱氨酶，其中X是G、N、Q、C、L或K。27.权利要求25或26的腺苷脱氨酶，其中X是G。28.权利要求1-27中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R107X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是R之外的任何氨基酸。29.权利要求28的腺苷脱氨酶，其中X是P、K、A、N、W、H或S。30.权利要求1-29中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A142突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是A之外的任何氨基酸。31.权利要求30的腺苷脱氨酶，其中X是N、D或G。32.权利要求30或31的腺苷脱氨酶，其中X是N。33.权利要求1-32中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A143突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是A之外的任何氨基酸。34.权利要求33的腺苷脱氨酶，其中X是D、G、E、L、W、M、S、Q或R。35.权利要求1-34中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H36X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是H之外的任何氨基酸。36.权利要求35的腺苷脱氨酶，其中X是L。37.权利要求1-36中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的N37X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是N之外的任何氨基酸。38.权利要求37的腺苷脱氨酶，其中X是T或S。39.权利要求1-38中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的P48X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是P之外的任何氨基酸。40.权利要求39的腺苷脱氨酶，其中X是T或L。41.权利要求1-40中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R51X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是R之外的任何氨基酸。42.权利要求41的腺苷脱氨酶，其中X是H或L。43.权利要求1-42中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的S146X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是S之外的任何氨基酸。44.权利要求43的腺苷脱氨酶，其中X是R或C。45.权利要求1-44中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的L157X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是L之外的任何氨基酸。46.权利要求45的腺苷脱氨酶，其中X是N。47.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V和D108N突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。48.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R107C和D108N突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。49.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H8Y、D108N、S127S、D147Y和Q154H突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。50.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H8Y、R24W、D108N、N127S、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。51.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。52.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H8Y、D108N、S127S突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。53.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H8Y、D108N、N127S、D147Y和Q154H突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。54.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H8Y、R24W、D108N、N127S、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。55.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。56.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108Q、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。57.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108M、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。58.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108L、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。59.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108K、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。60.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108I、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。61.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的D108F、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。62.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108N和D147Y突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。63.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108M、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。64.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E59A、A106V、D108N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。65.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E59A突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。66.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的L84F、A106V、D108N、H123Y、D147Y、E155V、I156Y突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。67.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26G、L84F、A106V、R107H、D108N、H123Y、A142N、A143D、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。68.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25G、R26G、L84F、A106V、R107H、D108N、H123Y、A142N、A143D、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。69.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26Q、L84F、A106V、D108N、H123Y、A142N、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。70.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25M、R26G、L84F、A106V、R107P、D108N、H123Y、A142N、A143D、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。71.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26C、L84F、A106V、R107H、D108N、H123Y、A142N、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。72.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的L84F、A106V、D108N、H123Y、A142N、A143L、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。73.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26G、L84F、A106V、D108N、H123Y、A142N、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。74.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25A、R26G、L84F、A106V、R107N、D108N、H123Y、A142N、A143E、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。75.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25D、R26G、L84F、A106V、R107K、D108N、H123Y、A142N、A143G、D147Y、E155V和I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。76.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的L84F、A106V、D108N、H123Y、D147Y、E155V、I156F突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。77.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108N、A142N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。78.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26G、A106V、D108N、A142N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。79.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25D、R26G、A106V、R107K、D108N、A142N、A143G、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。80.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R26G、A106V、D108N、R107H、A142N、A143D、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。81.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的E25D、R26G、A106V、D108N、A142N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。82.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、R107K、D108N、A142N、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。83.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108N、A142N、A143G、D147Y、E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。84.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A106V、D108N、A142N、A143L、D147Y和E155V突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。85.权利要求1-46中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的H36L、R51L、L84F、A106V、D108N、H123Y、S146C、D147Y、E155V、I156F和K157N突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。86.权利要求1-85中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的P48X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是P之外的任何氨基酸。87.权利要求86的腺苷脱氨酶，其中X是S、T或A。88.权利要求87的腺苷脱氨酶，其中X是A。89.权利要求1-88中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的A142X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是A之外的任何氨基酸。90.权利要求89的腺苷脱氨酶，其中X是N。91.权利要求1-90中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的W23X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是W之外的任何氨基酸。92.权利要求91的腺苷脱氨酶，其中X是R或L。93.权利要求91的腺苷脱氨酶，其中X是L。94.权利要求1-93中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1中的R152X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是R之外的任何氨基酸。95.权利要求94的腺苷脱氨酶，其中X是P或H。96.权利要求94的腺苷脱氨酶，其中X是P。97.权利要求1-4中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述TadA脱氨酶是金黄色葡萄球菌TadA脱氨酶(saTadA)。98.权利要求1-4或97中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶包含与SEQIDNO：8的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.5％相同的氨基酸序列。99.权利要求97-98中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的D107X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是D之外的任何氨基酸。100.权利要求99的腺苷脱氨酶，其中X是A。101.权利要求97-100中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的D108X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是D之外的任何氨基酸。102.权利要求101的腺苷脱氨酶，其中X是N。103.权利要求97-102中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的G26X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是G之外的任何氨基酸。104.权利要求103的腺苷脱氨酶，其中X是P。105.权利要求97-104中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的S142X突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变，其中X是S之外的任何氨基酸。106.权利要求105的腺苷脱氨酶，其中X是A。107.权利要求97-106中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的D107A和D108N突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。108.权利要求97-106中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的D107A、D108N和G26P突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。109.权利要求97-106中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：8中的D107A、D108N、G26P和S142A突变，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的突变。110.权利要求1的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含与SEQIDNO：1、64-84、420-437或672-684的任一项至少85％、90％、95％、98％、99％或99.5％相同的氨基酸序列。111.权利要求1的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列包含SEQIDNO：1、64-84、420-437或672-684的任一项的氨基酸序列。112.权利要求1的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶的氨基酸序列由SEQIDNO：1、64-84、420-437或672-684的任一项的氨基酸序列组成。113.权利要求1-112中任一项的腺苷脱氨酶，其中所述腺苷脱氨酶包含表4中显示的任何突变或突变的组合，或另一种腺苷脱氨酶中的相应的一个或多个突变。114.融合蛋白，其包含：(i)核酸可编程DNA结合蛋白(napDNAbp)，和(ii)权利要求1-113中任一项的腺苷脱氨酶。115.权利要求114的融合蛋白，其中所述核酸可编程DNA结合蛋白(napDNAbp)是Cas9域、Cpf1、CasX、CasY、C2c1、C2c2或C2c3。116.权利要求115的融合蛋白，其中所述Cas9域是核酸酶死亡Cas9(dCas9)、Cas9切口酶(nCas9)或核酸酶活性Cas9。117.权利要求115或116的融合蛋白，其中所述Cas9域是核酸酶死亡Cas9(dCas9)。118.权利要求117的融合蛋白，其中所述核酸酶死亡Cas9(dCas9)包含SEQIDNO：34中所示的氨基酸序列。119.权利要求116的融合蛋白，其中所述Cas9域是Cas9切口酶(nCas9)。120.权利要求119的融合蛋白，其中所述Cas9切口酶包含SEQIDNO：35中所示的氨基酸序列。121.权利要求114-120中任一项的融合蛋白，其进一步包含(iii)碱基修复抑制剂(IBR)。122.权利要求121的融合蛋白，其中所述碱基修复抑制剂(IBR)是碱基切除修复的抑制剂。123.权利要求121或122的融合蛋白，其中所述碱基修复抑制剂是结合肌苷的蛋白质。124.权利要求121-123中任一项的融合蛋白，其中所述碱基修复抑制剂是催化无活性的肌苷特异性核酸酶(catalyticallyinactiveinosine-specificnuclease)(dISN)。125.权利要求124的融合蛋白，其中所述催化无活性的肌苷特异性核酸酶(dISN)包含SEQIDNO：32或SEQIDNO：33中所示的氨基酸序列。126.权利要求114-125中任一项的融合蛋白，其进一步包含所述核酸可编程DNA结合蛋白(napDNAbp)和所述腺苷脱氨酶之间的一个或多个接头。127.权利要求126的融合蛋白，其中所述一个或多个接头包含SEQIDNO：10、37-40、384-386或685-688的任一项中所示的氨基酸序列。128.权利要求126或127的融合蛋白，其中所述一个或多个接头包含SEQIDNO：10中所示的氨基酸序列。129.权利要求126的融合蛋白，其中所述一个或多个接头包含SEQIDNO：37中所示的氨基酸序列。130.权利要求114-129中任一项的融合蛋白，其进一步包含一个或多个核定位序列(NLS)。131.权利要求130的融合蛋白，其中所述NLS包含SEQIDNO：4中所示的氨基酸序列。132.权利要求114-131中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含以下结构[腺苷脱氨酶]-[napDNAbp]；[腺苷脱氨酶]-[napDNAbp]-[NLS]；[腺苷脱氨酶]-[napDNAbp]-[IBR]；或[腺苷脱氨酶]-[napDNAbp]-[IBR]-[NLS]，其中所述napDNAbp是核酸可编程DNA结合蛋白，并且其中所述IBR是碱基修复抑制剂。133.权利要求132的融合蛋白，其中所述结构中的每个“-”表示存在任选的接头序列。134.权利要求132或133的融合蛋白，其中所述napDNAbp是Cas9域。135.权利要求134的融合蛋白，其中所述Cas9域是dCas9或nCas9。136.权利要求132-135中任一项的融合蛋白，其中所述IBR是dISN。137.权利要求132-136中任一项的融合蛋白，其中所述napDNAbp和所述NLS经由接头融合，所述接头包含氨基酸序列SGGS(SEQIDNO：37)或SGSETPGTSESATPES(SEQIDNO：10)。138.权利要求132-137中任一项的融合蛋白，其中所述napDNAbp和所述IBR经由接头融合，所述接头包含氨基酸序列SGGS(SEQIDNO：37)或SGSETPGTSESATPES(SEQIDNO：10)。139.权利要求132-138中任一项的融合蛋白，其中所述IBR和所述NLS经由接头融合，所述接头包含氨基酸序列SGGS(SEQIDNO：37)或SGSETPGTSESATPES(SEQIDNO：10)。140.权利要求114-131中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含以下结构[napDNAbp]-[腺苷脱氨酶]；[napDNAbp]-[腺苷脱氨酶]-[NLS]；[napDNAbp]-[腺苷脱氨酶]-[IBR]；或[napDNAbp]-[腺苷脱氨酶]-[...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·R·刘，N·高德利，
申请(专利权)人：哈佛大学的校长及成员们，
类型：发明
国别省市：美国,US
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