本发明专利技术涉及生物医学领域，尤其涉及一种HLA‑0201限制性PADI4表位多肽及其应用，本发明专利技术提供一种HLA‑0201限制性PADI4表位多肽，其氨基酸序列选自下述(a)‑(c)：(a)YLTGVEISL，即SEQ ID NO.1；(b)CLEEKVCSL，即SEQ ID NO.2；(c)ELLKRELGL，即SEQ ID NO.3。根据本发明专利技术，编码所述PADI4表位多肽的基因，包含PADI4表位多肽基因的表达载体。本发明专利技术的HLA‑0201限制性PADI4表位多肽与HLA‑0201具有强亲合力，对其免疫原性进行评价，发现其可以在HLA‑0201阳性健康人外周血中诱导出特异性的、HLA‑0201限制性的细胞毒T淋巴细胞，而且是一个被细胞自然加工、递呈的免疫原性多肽。HLA‑0201限制性PADI4表位多肽诱导的抗原特异的细胞毒T淋巴细胞具有高杀伤活性和高IFN‑γ分泌能力。
A HLA-0201 Restricted PADI4 Epitope Peptide and Its Application
The invention relates to the field of biomedicine, in particular to a HLA 0201 restrictive PADI4 epitope polypeptide and its application. The invention provides an HLA 0201 restrictive PADI4 epitope polypeptide whose amino acid sequence is selected from the following (a)(c): (a) YLTGVEISL, namely SEQ ID NO.1; (b) CLEEKVCSL, namely SEQ ID NO.2; (c) ELLKRELGL, namely SEQ ID NO.3. According to the invention, the gene encoding the PADI4 epitope polypeptide comprises an expression vector of the PADI4 epitope polypeptide gene. The HLA 0201 restrictive PADI4 epitope polypeptide of the present invention has strong affinity with HLA 0201, and its immunogenicity is evaluated. It is found that the HLA 0201 restrictive cytotoxic T lymphocyte can be induced in peripheral blood of HLA 0201 positive healthy people, and it is an immunogenic polypeptide naturally processed and presented by cells. Antigen-specific cytotoxic T lymphocytes induced by HLA 0201 restrictive PADI4 epitope polypeptide have high killing activity and high IFN gamma secretion capacity.
【技术实现步骤摘要】
一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽及其应用
本专利技术涉及生物医学领域，尤其涉及一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽及其应用。
技术介绍
在哺乳动物中，肽基精氨酸去亚胺基酶家族一共有5个成员，分别是PADI1、2、3、4和6，它们都具有去亚胺基酶活性，能以依赖于Ca2+离子的方式将精氨酸转化为瓜氨酸，其中PADI1、2、3和6主要分布在细胞质中，而PADI4在N端含有核定位信号，主要分布于细胞核中，这也是它参与组蛋白修饰的前提条件，PADI4另一个不同之处在于它能够将单甲基化的精氨酸转化为瓜氨酸，多余的亚胺基和甲基以氨基甲烷(NH2CH3)的形式除去。PADI4对H2A，H3，H4三种组蛋白具有催化活性，对H2A和H4的修饰位点位于第三位的精氨酸上，并且这两个位点具有SGRGK的序列保守性；而对H3的修饰位点较多，包括：H3R2、R8、R17和R26，它们并不具有序列上的保守性。其中H3R8、H3R17以及H4R3是PADI4在体内的主要作用位点。PADI4对组蛋白H3上精氨酸的修饰会抑制激素受体介导基因的转录，当激素刺激引起基因转录下调时，PADI4会被募集到pS2基因的启动子上，并引起H3上相应位点的去亚胺基化，这种修饰会阻止CARM1对H3精氨酸的催化，后者被认为是激素介导基因转录所必需的，PADI4就是通过去亚胺基化作用拮抗了CARM1，从而抑制了转录的进行。PADI4在各种恶性肿瘤组织中有很高的表达，尤其是在各种腺癌。Westernblot和抗瓜氨酸化蛋白抗体的免疫组化也证实了PADI4在肿瘤癌细胞中的表达。因此，如果以PADI4为靶标，对机体进行免疫，将会使机体产生针对PADI4蛋白的特异性免疫应答，从而使机体能有效地抑制、清除肿瘤细胞，为相关肿瘤的预防及治疗提供措施。合成肽疫苗是近年来随着分子生物学及免疫学的进展而发展起来的一种新的疫苗，可以诱导机体产生特异性的免疫应答，而且其副作用轻微、安全性好，是目前疫苗研究的一个新的方向，广泛应用与抗肿瘤及抗病毒免疫治疗，己有证据表明，合成肽能直接与MHC-I类分子结合，而不需要APC的加工、处理，它和天然的内源性肽在激活免疫系统方面具有同等的效力。多肽疫苗己成为目前抗恶性肿瘤的一项新策略，也是目前研究最多的肿瘤治疗性疫苗。尽管在研究肿瘤特异性肽疫苗方面已取得了重大的进步，但由于目前已鉴定出来的T细胞表位十分局限，主要集中在HLA-A2，缺少A33、A24、A11限制性表位。而随着人种的不同，其HLA-I类分子呈现多态性，除A2外，A33、A24、A11也占据了很大的比重。HLA-0201是一种在我国人群中具有较高分布的一种MHC-I类分子。因此，鉴定新的HLA限制性的肿瘤抗原显得极为必要和重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽及其应用，以解决上述技术问题。本专利技术为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：第一方面，本专利技术提供一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽，其氨基酸序列选自下述(a)-(c)：(a)YLTGVEISL，即SEQIDNO.1；(b)CLEEKVCSL，即SEQIDNO.2；(c)ELLKRELGL，即SEQIDNO.3。根据本专利技术，编码所述PADI4表位多肽的基因。第二方面，本专利技术提供一种表达载体，所述表达载体包含第一方面中的PADI4表位多肽的基因。第三方面，本专利技术提供一种抗原递增细胞，所述抗原递增细胞是被第一方面中的PADI4表位多肽负载的。第四方面，本专利技术提供一种特异性免疫效应细胞，所述特异性免疫效应细胞针对第一方面中所述的PADI4表位多肽。第五方面，本专利技术提供一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面中PADI4表位多肽或第三方面的抗原递增细胞或第四方面中的特异性免疫效应细胞，所述HLA-0201限制性PADI4表位多肽的药物组合物用于治疗或预防HLA-0201阳性对象的肿瘤。根据本专利技术，所述药物组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂。第六方面，本专利技术第一方面中PADI4表位多肽或第三方面中的抗原递增细胞或第四方面中的特异性免疫效应细胞均在制备治疗或预防肿瘤药物中应用。根据本专利技术，所述治疗或预防的肿瘤为共同表达HLA-0201和PADI4蛋白的肿瘤，为胃癌、结肠癌、肺癌、食管癌、头颈部鳞癌胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、非霍奇金淋巴瘤和胶质母细胞瘤中的任意一种。本专利技术的有益效果是：本专利技术的HLA-0201限制性PADI4表位多肽与HLA-0201具有强亲合力，对其免疫原性进行评价，发现其可以在HLA-0201阳性健康人外周血中诱导出特异性的、HLA-0201限制性的细胞毒T淋巴细胞，而且是一个被细胞自然加工、递呈的免疫原性多肽。HLA-0201限制性PADI4表位多肽诱导的抗原特异的细胞毒T淋巴细胞具有高杀伤活性和高IFN-γ分泌能力。附图说明图1为P109-117肽致敏的树突状细胞(DC)体外诱导HLA-0201阳性结肠癌病人外周血抗原特异性CTL细胞的IFN-γ分泌的ELISPOT检测结果。图2为P109-117肽致敏的树突状细胞(DC)体外诱导HLA-0201阳性结肠癌病人外周血抗原特异性CTL细胞的IFN-γ分泌的流式细胞仪检测结果。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本专利技术，但下述实施例仅仅为本专利技术的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本专利技术的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽，其氨基酸序列选自下述(a)-(c)：(a)YLTGVEISL，即SEQIDNO.1；(b)CLEEKVCSL，即SEQIDNO.2；(c)ELLKRELGL，即SEQIDNO.3。编码PADI4表位多肽的基因，包含上述PADI4表位多肽基因的表达载体。一种抗原递增细胞，抗原递增细胞是被上述PADI4表位多肽负载的。一种特异性免疫效应细胞，特异性免疫效应细胞针对上述PADI4表位多肽。一种药物组合物，药物组合物包括上述PADI4表位多肽或上述抗原递增细胞或上述特异性免疫效应细胞，HLA-0201限制性PADI4表位多肽的药物组合物用于治疗或预防HLA-0201阳性对象的肿瘤，药物组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂。上述PADI4表位多肽或上述抗原递增细胞或上述特异性免疫效应细胞均在制备治疗或预防肿瘤药物中应用，治疗或预防的肿瘤为共同表达HLA-0201和PADI4蛋白的肿瘤，为胃癌、结肠癌、肺癌、食管癌、头颈部鳞癌胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、非霍奇金淋巴瘤和胶质母细胞瘤中的任意一种。实施例1对于HLA-0201高亲和力肽的筛选在对PADI4进行计算机模拟分析的基础上，选择性地合成有可能与HLA-0201结合并诱导机体产生CTL的PADI4特异的抗原肽(如表1)，通过稳定表达HLA-0201分子的RMA-S细胞(TAP缺陷型)的肽结合实验，筛选出与HLA-0201具有强亲合力的表位本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HLA‑0201限制性PADI4表位多肽，其氨基酸序列选自下述(a)‑(c)：(a)YLTGVEISL，即SEQ ID NO.1；(b)CLEEKVCSL，即SEQ ID NO.2；(c)ELLKRELGL，即SEQ ID NO.3。
【技术特征摘要】
1.一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽，其氨基酸序列选自下述(a)-(c)：(a)YLTGVEISL，即SEQIDNO.1；(b)CLEEKVCSL，即SEQIDNO.2；(c)ELLKRELGL，即SEQIDNO.3。2.根据权利要求1所述的一种HLA-0201限制性PADI4表位多肽，其特征在于：编码所述PADI4表位多肽的基因。3.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体包含权利要求2中所述的PADI4表位多肽的基因。4.一种抗原递增细胞，其特征在于：所述抗原递增细胞是被权利要求1中所述的PADI4表位多肽负载的。5.一种特异性免疫效应细胞，其特征在于：所述特异性免疫效应细胞针对权利要求1中所述的PADI4表位多肽。6.一种药物组合物，其特征在于：所...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹琦，孙伟红，苏小平，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，格源致善上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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