利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA及应用技术方案

本发明专利技术提供了一组利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明专利技术所述sgRNA包括g1RNA和g2RNA；所述g1RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述g2RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。利用本发明专利技术提供的sgRNA组合构建得到的重组表达载体转染水稻植株，能特异性地将xal3基因的启动子区域149nt进行缺失，从而使水稻体内xal3基因失去被白叶枯病菌诱导表达的能力，使缺失该启动子片段的转基因水稻对白叶枯病菌表现出抗性。另外，本发明专利技术提供的方法不影响转基因水稻的其他性状，转基因水稻育性良好。

Specific splicing of sgRNA of xal3 gene promoter in rice using CRISPR/Cas9 system and its application

【技术实现步骤摘要】
利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA及应用
本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及一组利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA及其应用。
技术介绍
抗病虫育种是农业生产上育种的主要目标之一，水稻白叶枯病由白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.Oryzae，Xoo)引起，是世界上对水稻危害最大的细菌性病害。目前在水稻中已鉴定出30多个抗白叶枯病菌主效基因，其中有5个是隐性的。xa13是近年来克隆的一个非常特殊的水稻隐性抗白叶枯病基因(Chuetal.2006)，xa13与其显性等位基因Xa13在基因的编码区没差异，但是xa13启动子部分的序列变异导致了其在水稻叶片中的表达显著下降，从而使得水稻植株获得了对白叶枯病菌菌株PXO99特异性的抗性。组成型抑制xa13等位显性基因Xa13的表达可以提高水稻对菌株PXO99抗性，但是同时会导致花粉育性显著下降，表明该基因不仅控制水稻的抗病性还与水稻的育性有关(Bartetal.2006；Chuetal.2006)。在育种上特别是杂交育种中，由于隐性抗性基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括g1RNA和g2RNA；所述g1RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述g2RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一组利用CRISPR/Cas9系统特异性剪切水稻xal3基因启动子的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括g1RNA和g2RNA；所述g1RNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述g2RNA的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体以pYLCRISPR/Cas9-MH为基础，包括依次串联的Cas9基因、U3启动子、权利要求1所述g1RNA、U6a启动子和权利要求1所述g2RNA。3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述Cas9基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述U3启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述U6a启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。4.根据权利要求2或3所述的重组表达载体，其特征在于，所述U3启动子通过靶点接头T1与g1RNA连接；所述靶点接头T1由Pxal3U3-F和Pxal3U3-R变性退火制得；所述Pxal3U3-F的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；所述Pxal3U3-R的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。5.根据权利要求2或3所述的重组表达载体，其特征在于，所述U6a启动子通过靶点接头T2与g2R...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昌焱，李威，林拥军，马伟华，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42