阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用技术

本发明专利技术为阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用。阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法，包括：(1)将阿魏菇子实体粉末用95％乙醇提取后，浓缩，得浓缩液A；(2)将浓缩液A用石油醚萃取3次，合并石油醚部分并浓缩，得浸膏B；(3)将浸膏B进行硅胶柱层析，经薄层层析检测，收集流分，旋蒸浓缩，得粗品C；(4)将粗品C进行葡聚糖凝胶柱层析，经薄层层析检测，收集流分，旋蒸浓缩，重结晶，得麦角甾醇过氧化物。本发明专利技术还公开了麦角甾醇过氧化物的应用。本发明专利技术通过用乙醇提取、石油醚萃取、硅胶柱层析及葡聚糖凝胶柱层析分离纯化，可有效提取出麦角甾醇过氧化物(PFEP)；通过实验研究发现，PFEP可作为理想的抗食管癌及结肠癌候选药物。

【技术实现步骤摘要】
阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用。
技术介绍
药用真菌是天然药物中的一个重要组成部分，因其具有突出的生物功效已成为功能食品和医学研究的热点。近年来，天然产物尤其是具有生物活性的化合物以其抗肿瘤、抗氧化及免疫调节的高效性和候选资源丰富性的优势，成为药物及保健品研发关注的热点。研究表明，一些药用真菌具有抗肿瘤潜力，如灵芝、茯苓、猴头菇及阿魏菇等。阿魏菇(Pleurotusferulae)是一种药食同源的真菌，寄居生长在戈壁沙漠的阿魏根茎上。野生阿魏菇主要分布于新疆准噶尔盆地荒漠区的伊犁、塔城和阿勒泰地区。鉴于野生阿魏菇的资源稀缺，1983年，新疆生物沙漠土壤研究所对野生阿魏菇进行了人工驯化。研究报道阿魏菇具有调节机体生理平衡、抗氧化、增强机体免疫功能、抗辐射、抗肿瘤及降血脂等功效，具有广阔的药用及保健品开发价值。有鉴于此，本专利技术提出一种阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法，该提取方法简单，可有效提取出阿魏菇中麦角甾醇过氧化物。为了实现上述目的，所采用的技术方案为：阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法，包括以下步骤：(1)将阿魏菇子实体粉末用95％乙醇提取后，浓缩至无醇味，得浓缩液A；(2)将浓缩液A用石油醚萃取3次，合并石油醚部分，并浓缩至浸膏状，得浸膏B；(3)将浸膏B进行硅胶柱层析，收集流分并浓缩，经薄层层析检测，合并相同流分，得粗品C；(4)将粗品C进行SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析，收集流分，经薄层层析检测，合并相同流分后，重结晶，得到所述的麦角甾醇过氧化物。进一步的，所述的步骤(1)的具体操作步骤为：向阿魏菇子实体粉末中加入95％乙醇，在60℃水浴浸提2h，离心，得到上清液和滤渣；所述的滤渣再反复浸提3次，合并多次浸提后的上清液，减压浓缩，得浓缩液A。再进一步的，所述的离心转速为5000r/min，时间为15min；所述的减压浓缩的温度为50℃。再进一步的，所述的水浴浸提过程中，超声辅助20min，功率为300W。进一步的，所述的步骤(3)中，所述的硅胶柱层析分离采用梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，每个配比洗脱液洗脱一个柱体积，每250mL为一个流分。再进一步的，所述石油醚和乙酸乙酯的体积配比为：1:0、8:2、7:3、1:1、4:6、2:8、0:1。进一步的，所述的步骤(4)中，所述的SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离，采用甲醇进行洗脱，每10mL收集一次。本专利技术的另一个目的在于提供阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的应用，通过实验研究发现，麦角甾醇过氧化物可作为理想的抗食管癌及结肠癌候选药物。麦角甾醇过氧化物在制备抗肿瘤药物中的应用。进一步的，所述的抗肿瘤药物为抗食管癌药物。进一步的，所述的抗肿瘤药物为抗结肠癌药物。与现有技术相比，本专利技术的有益之处在于：本专利技术通过用乙醇提取、石油醚萃取、硅胶柱层析及葡聚糖凝胶柱层析分离纯化，可有效提取出栽培阿魏菇中麦角甾醇过氧化物(Pleurotusferulaeerogosterolperoxide，PFEP)，其结构式如图9所示。通过实验研究发现，阿魏菇麦角甾醇过氧化物(PFEP)可以抑制食管癌及结肠癌细胞生长、抑制CT26结肠癌小鼠肿瘤生长、提高CT26结肠癌小鼠的生存率。并且，提取出的PFEP在体外作用于人食管癌Eca-109细胞及小鼠结肠癌CT26细胞，证实PFEP能抑制这两种肿瘤细胞的生长，诱导肿瘤细胞的凋亡、坏死及细胞周期阻滞；体内注射给CT26结肠癌小鼠抑制了肿瘤生长，提高了CT26结肠癌小鼠的生存率，证实栽培阿魏菇麦角甾醇过氧化物可作为理想的抗食管癌及结肠癌候选药物。附图说明图1为实施例1中石油醚相硅胶柱层析的薄层层析检测；图2为实施例1中SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析的薄层层析检测；图3为实施例1中化合物电喷雾电离质谱(ESI-MS)图谱；图4为实施例1中化合物核磁共振氢谱(1H-NMR)及碳-13核磁共振(13C-NMR)图谱；图5为PFEP在体外对Eca-109及CT26细胞生长的抑制作用，其中A为不同浓度PFEP处理24h后的Eca-109及CT26细胞的形态学变化；B为PFEP处理Eca-109，CT26及NCTC1469细胞24、48和72h后，MTT法检测细胞活性，数据进行单因素方差分析，*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001，处理组与对照组比较得出。图6为PFEP诱导Eca-109细胞染色体凝聚和细胞凋亡，为不同浓度PFEP处理24h后，流式细胞仪分析Eca-109细胞的凋亡和坏死，数据进行单因素方差分析，**p<0.01,***p<0.001，处理组与对照组比较得出。图7为PFEP诱导Eca-109细胞周期阻滞。不同浓度PFEP处理Eca-109细胞24h后，采用PI染色，流式细胞仪分析细胞周期，数据进行单因素方差分析，*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001，处理组与对照组比较得出。图8为PFEP对体内肿瘤生长的抑制作用。通过注射CT26细胞诱导小鼠肿瘤模型。3天后，采用二甲基亚砜(DMSO)、PFEP及顺铂对肿瘤小鼠(每组8只)进行治疗。在所指示的时间点对小鼠体重(A)、肿瘤生长(B)和生存率(C)进行监测。数据进行单因素方差分析，**p<0.01,***p<0.001，治疗组与对照组比较得出。图9为阿魏菇麦角甾醇过氧化物(PFEP)的结构式。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用，达到预期专利技术目的，以下结合较佳实施例，对依据本专利技术提出的阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用，其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。下面将结合具体实施例对本专利技术阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用做进一步的详细介绍：实施例1.具体操作步骤如下：(1)将栽培阿魏菇子实体洗净，切片，待其完全干燥后粉碎，过60目筛备用。准确称量1kg，加入95％乙醇(料液比为1：20g/ml)，在60℃水浴浸提2h，并超声辅助20min(60℃，300W)。再在5000r/min离心15min，得到上清液和滤渣；将滤渣再反复浸提3次，合并多次浸提后的上清液，用真空旋转蒸发仪在50℃下，水浴浓缩至无醇味，得到浓缩液A。(2)将浓缩液A用石油醚进行萃取3次，合并石油醚相，旋转蒸发溶剂，获得石油醚相浸膏B。(3)将浸膏B用甲醇完全溶解，然后拌入2倍质量硅胶。将拌好的样品水浴蒸发溶剂至拌样硅胶干燥，颗粒分散均匀。用于分离的硅胶填料浸泡于石油醚中搅拌均匀，装柱至适当高度，然后平整加入拌好样的硅胶，进行硅胶柱层析。硅胶柱层析采用的洗脱体系为石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚和乙酸乙酯的体积配比为：1:0、8:2、7:3、1:1、4:6、2:8、0:1。每个配比洗脱液洗脱一个柱体积，每250mL为一个流分(收本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将阿魏菇子实体粉末用95％乙醇提取后，浓缩至无醇味，得浓缩液A；(2)将浓缩液A用石油醚萃取3次，合并石油醚部分，并浓缩至浸膏状，得浸膏B；(3)将浸膏B进行硅胶柱层析，收集流分并分别浓缩，经薄层层析检测，合并相同流分，得粗品C；(4)将粗品C进行Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱层析，收集流分，经薄层层析检测，合并相同流分后，重结晶，得到所述的麦角甾醇过氧化物。

【技术特征摘要】
1.阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将阿魏菇子实体粉末用95％乙醇提取后，浓缩至无醇味，得浓缩液A；(2)将浓缩液A用石油醚萃取3次，合并石油醚部分，并浓缩至浸膏状，得浸膏B；(3)将浸膏B进行硅胶柱层析，收集流分并分别浓缩，经薄层层析检测，合并相同流分，得粗品C；(4)将粗品C进行SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析，收集流分，经薄层层析检测，合并相同流分后，重结晶，得到所述的麦角甾醇过氧化物。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的步骤(1)的具体操作步骤为：向阿魏菇子实体粉末中加入95％乙醇，在60℃水浴浸提2h，离心，得到上清液和滤渣；所述的滤渣再反复浸提3次，合并多次浸提后的上清液，减压浓缩，得浓缩液A。3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述的离心转速为5000r/min，时间为15min；所述的减压浓缩...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金耀，马荣斌，杨艺，
申请(专利权)人：新疆前进荣耀投资有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65