一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法，属于植物黄酮提取技术领域。本发明专利技术通过特定的酶解、灭酶、超声、离心等步骤，克服了现有技术中提取方法得率较低、活性成分损失等问题。本发明专利技术提供的中亚苦蒿总黄酮提取方法得到的总黄酮得率可达4.75％，提取得到的总黄酮中含有41种有效化合物，能够有效抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡。促进肿瘤细胞凋亡。促进肿瘤细胞凋亡。

【技术实现步骤摘要】
一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法


[0001]本专利技术涉及植物黄酮提取
，尤其涉及一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法。

技术介绍

[0002]中亚苦蒿，属桔梗目，菊科，俗称艾草。它是一种重要的多年生药用植物，在我国主要分布在新疆、四川、云南等地。此外，中亚苦蒿中含有丰富的次生代谢产物，包括黄酮类、生物碱、酚类、萜类及衍生物等。具有多种药理活性(例如抗菌、抗炎、抗病毒、保肝、降血糖和心血管疾病等)，它还显示出广泛的抗氧化和抗癌作用。
[0003]生物总黄酮也称黄酮类化合物，是一种天然的植物成分。已从植物中鉴定和分离出8000多种，其结构通过两个酚羟基的苯环(A环和B环)，以三碳键相互连接所形成的一系列(C6‑
C3‑
C6)化合物。依据结构多样性可分为6类黄酮类、异黄酮类、萜类、生物碱类、花青素类。越来越多的研究报道，黄酮类化合物在肿瘤的治疗与预防方面具有显著作用。这归因于它们多样的结构和广泛的活性(如抗炎、抗氧化、抗高血脂等)。目前，黄酮类化合物提取方法主要包括加热回流提取法、有机溶剂萃取法、微波辅助提法、超声辅助法、酶解法等。
[0004]专利技术人日前研究发现，传统提取方法工艺设备虽然比较简单，但提取的时间长、效率不高，且易在高温下破坏热不稳定成分使其降解，并且由于中亚苦蒿中总黄酮的含量较低且及其复杂，不能实现较高得率，提取出的总黄酮活性较低。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法，用以解决现有技术中提取方法得率较低、活性成分损失等问题。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
[0008]将中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液、复合酶混合，进行酶解，得到酶解液；
[0009]将酶解液依次进行灭酶、超声、离心，所得上清液即为中亚苦蒿总黄酮。
[0010]优选的，所述中亚苦蒿粉末的粒径为90以下μm。
[0011]优选的，所述中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液的质量体积比为1g:20～30mL；
[0012]所述乙醇水溶液的质量体积浓度为80～100％。
[0013]优选的，所述复合酶的添加量为中亚苦蒿粉末质量的1.5～2.5％。
[0014]优选的，所述复合酶的种类为纤维素酶和果胶酶；
[0015]所述纤维素酶和果胶酶的添加比例为1:0.5～0.7。
[0016]优选的，所述纤维素酶的酶活为40～60U/mg，所述果胶酶的酶活为400～600U/mg。
[0017]优选的，所述酶解的pH为3～4，所述酶解的温度为40～50℃，所述酶解的时间为100～110min。
[0018]优选的，所述灭酶的温度为80～120℃，所述灭酶的时间为3～8min。
[0019]优选的，所述超声的功率为50～150W，所述超声的温度为20～40℃，所述超声的时
间为10～30min。
[0020]优选的，所述离心的转速为10000～14000r/min，所述离心的时间为5～15min。
[0021]本专利技术的技术效果和优点：
[0022]本专利技术提供的中亚苦蒿总黄酮提取方法得到的总黄酮得率可达4.75％，提取得到的总黄酮生物活性更高，其中含有41种有效化合物，能够有效抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡。
附图说明
[0023]图1为标准曲线；
[0024]图2为不同超声温度组比较结果图；
[0025]图3为不同纤维素酶和果胶酶比例组比较结果图；
[0026]图4为不同复合酶用量组比较结果图；
[0027]图5为不同酶解pH组比较结果图；
[0028]图6为不同乙醇体积百分数组比较结果图；
[0029]图7为不同料液比组比较结果图；
[0030]图8为不同酶解温度组比较结果图；
[0031]图9为不同酶解时间组比较结果图；
[0032]图10为中亚苦蒿总黄酮的离子流色谱图；
[0033]图11为总黄酮中各化合物结构式；
[0034]图12为不同浓度总黄酮处理H8、HeLa和SiHa细胞24h后的细胞活力图；
[0035]图13为不同浓度总黄酮处理HeLa细胞24h后的细胞形态图；
[0036]图14为不同浓度总黄酮处理HeLa细胞24h后细胞凋亡图A；
[0037]图15为不同浓度总黄酮处理HeLa细胞24h后细胞凋亡图B。
具体实施方式
[0038]本专利技术提供了一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
[0039]将中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液、复合酶混合，进行酶解，得到酶解液；
[0040]将酶解液依次进行灭酶、超声、离心，所得上清液即为中亚苦蒿总黄酮。
[0041]在本专利技术中，中亚苦蒿粉末优选由中亚苦蒿常温干燥后粉碎制得，所述中亚苦蒿粉末的粒径优选为90μm以下，进一步优选为70μm以下，以过筛目数计算粒径优选为200目以下，所述粉碎优选采用高速万能粉碎机进行。
[0042]在本专利技术中，所述乙醇水溶液的体积浓度优选为80～100％，进一步优选为85～95％，所述中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液的质量体积比优选为1g:20～30mL，进一步优选为1g:24～28mL；所述复合酶的种类优选为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶和果胶酶的添加比例优选为1:0.5～0.7，进一步优选为1:0.65～0.68，所述纤维素酶的酶活优选为40～60U/mg，进一步优选为45～55U/mg，所述果胶酶的酶活为400～600U/mg，进一步优选为450～550U/mg，还优选为480～520U/mg；所述复合酶的添加量优选为中亚苦蒿粉末质量的1.5～2.5％，进一步优选为中亚苦蒿粉末质量的1.8～2.2％；本专利技术所述酶解的pH优选为3～4，进一步优选为3.2～3.6，所述酶解的温度优选为40～50℃，进一步优选为43～47℃，所述
酶解的时间优选为100～110min，进一步优选为103～107min；本专利技术在酶解过程中优选每20～40min混匀一次。
[0043]在本专利技术中，酶解后进行灭酶，所述灭酶的温度优选为80～120℃，进一步优选为90～110℃，所述灭酶的时间优选为3～8min，进一步优选为5～7min，所述灭酶优选采用水浴法进行。
[0044]在本专利技术中，灭酶后进行超声，所述超声的功率优选为50～150W，进一步优选为80～120W，所述超声的温度优选为20～40℃，进一步优选为25～35℃，所述超声的时间优选为10～30min，进一步优选为15～25min；所述超声之后进行离心，所述离心的转速优选为10000～14000r/min，进一步优选为11000～13000r/min，所述离心的时间优选为5～15min，进一步优选为8～12min，离心所得上清液即为中亚苦蒿总黄酮。
[0045]下面结合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中亚苦蒿总黄酮的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：将中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液、复合酶混合，进行酶解，得到酶解液；将酶解液依次进行灭酶、超声、离心，所得上清液即为中亚苦蒿总黄酮。2.根据权利要求1所述的中亚苦蒿总黄酮的提取方法，其特征在于，所述中亚苦蒿粉末的粒径为90μm以下。3.根据权利要求2所述的中亚苦蒿总黄酮的提取方法，其特征在于，所述中亚苦蒿粉末与乙醇水溶液的质量体积比为1g:20～30mL；所述乙醇水溶液的体积浓度为80～100％。4.根据权利要求3所述的中亚苦蒿总黄酮的提取方法，其特征在于，所述复合酶的添加量为中亚苦蒿粉末质量的1.5～2.5％。5.根据权利要求4所述的中亚苦蒿总黄酮的提取方法，其特征在于，所述复合酶的种类为纤维素酶和果胶酶；所述纤维素酶和果胶酶的添加比例为1:0.5～0.7。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金耀，马荣斌，夏丽洁，何美珠，
申请(专利权)人：新疆前进荣耀投资有限公司，
类型：发明
国别省市：