抗AXL抗体、抗体片段和它们的免疫缀合物以及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种具有重链可变区和/或轻链可变区的特异性结合Axl蛋白的多肽，以及包含重链可变区和/或轻链可变区的与Axl蛋白结合的抗体和抗体片段。还提供了包含所述多肽或者包含含有所述多肽的抗体和抗体片段的药物组合物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗AXL抗体、抗体片段和它们的免疫缀合物以及其用途
本专利技术涉及抗Axl抗体、抗体片段和此类抗体及抗体片段的免疫缀合物以及此类抗体、抗体片段和免疫缀合物在诊断和治疗方法中的用途。
技术介绍
Axl蛋白(也称为Ark、UFO、Tyro-7)是Tyro-3激酶家族中的受体酪氨酸激酶。Tyro-3受体激酶的特征在于细胞外区域中两个免疫球蛋白样结构域和双纤连蛋白III型重复与细胞质激酶结构域的组合。Tyro-3受体激酶的配体是Gas6(生长停滞特异性6)和蛋白S，它们是两种维生素K依赖性蛋白，显示出43％的氨基酸序列同一性并具有相似的结构域结构。每种蛋白都具有一个含有11g-羧基谷氨酸残基的N末端GIa结构域，随后是四个表皮生长因子(EGF)样模块，以及由两个串联层粘连蛋白G结构域组成的C末端性激素结合球蛋白(SHBG)样结构。SHBG结构域对于Tyro-3受体激酶结合和活化而言是必要且充分的，而GIa结构域结合带负电荷的膜磷脂并在Tyro-3激酶介导的对凋亡细胞的吞噬中起重要作用。Axl活化导致通过PI-3-激酶/Akt(Franke等，Oncogene，第22卷，第8983-8998页，2003)和其他诸如Ras/Erk和β-连环蛋白/TCF的主要途径的信号传导(Goruppi等，Mol.Cell.Biol，第21卷，第902-915页，2001)。Axl在一系列正常组织(包括脑、心脏、骨骼肌、器官囊和几种其他器官的结缔组织)中，以及单核细胞中弱表达，但在淋巴细胞中不是如此。已经在成纤维细胞(Goruppi等，Mol.Cell.Biol.，第17卷，第4442-4453页，1997)、内皮细胞(Hasanbasic等，AmJPhysiolHeartCircPhysiol，第287卷，H1207-H1213，2004)、血管平滑肌细胞(Melaragno等，J.Mol.Cell.Cardiol.，第37卷，第881-887页，2004)和神经元(Allen等，Mol.Endocrinol.，第13卷，第191-201页，1999)的存活中描述了Axl诱导的Akt磷酸化。此外，Axl在细胞粘附和趋化性中起作用，原因是Axl基因敲除动物由于血小板整联蛋白IIb3的活化减少而显示出受损的血小板聚集体稳定化作用和血栓形成。Axl或其配体Gas6的失调涉及多种人类癌症的发病机理。Axl过度表达已经在各种癌症类型中得到了证实，例如乳腺癌(Meric等，Clin.CancerRes.，第8卷，第361-367页，2002；Berclaz等，Ann.Oncol.，第12卷，第819-824页，2001)、结肠癌(Chen等，Int.J.Cancer，第83卷，第579-584页，1999；Craven等，Int.J.Cancer，第60卷，第791-797页，1995)、前列腺癌(Jacob等，CancerDetect.Prey.，第23卷，第325-332页，1999)、肺癌(Wimmel等，EurJCancer，第37卷，第2264-2274页，2001)、胃癌(Wu等，AnticancerRes.，第22卷，第1071-1078页，2002)、卵巢癌(Sun等，Oncology，第66卷，第450-457页，2004)、子宫内膜癌(Sun等，Ann.Oncol.，第14卷，第898-906页，2003)、肾癌(Chung等，DNACellBiol.，第22卷，第533-540页，2003)、肝细胞癌(Tsou等，Genomics，第50卷，第331-340页，1998)、甲状腺癌(Ito等，Thyroid，第12卷，第971-975页，2002；Ito等，Thyroid，第9卷，第563-567页，1999)，此外，在慢性髓性白血病(Janssen等，Oncogene，第6卷，第2113-2120页，1991；Braunger等，Oncogene，第14卷，第2619-2631页，1997；O’Bryan等，Mol.Cell.Biol.，第11卷，第5016-5031页，1991)、急性髓性白血病(Rochlitz等，Leukemia，第13卷，第1352-1358页，1999)、骨肉瘤(Nakano等，J.Biol.Chem.，第270卷，第5702-5705页，2003)、黑色素瘤(vanGinkel等，CancerRes.，第64卷，第128-134页，2004)、以及头颈部鳞状细胞癌(Green等，BrJ.Cancer.，第94卷，第1446-5页，2006)中得到了证实。最近，通过分析磷酸酪氨酸信号传导，在约5％的NSCLC原发性肿瘤中检测到活化的Axl(Rikova等，Cell，第131卷，第1190-1203页，2007页)。靶向化疗药物诱导Axl表达，药物诱导的Axl表达使急性髓细胞白血病具有化疗耐药性(Hong等，CancerLetters，第268卷，第314-324页，2008)，以及使胃肠道间质肿瘤(Mehadevan等，Oncogene，第26卷，第3909-3919页，2007)和乳腺癌(Liu等，CancerResearch，第281卷，第6871-6878页，2009)分别具有对伊马替尼和拉帕替尼/赫赛汀的耐药性。此外，已经确定Axl与肿瘤转移相关，因为与非侵入性细胞相比，Axl在侵袭性乳腺癌细胞系中上调。在体外，发现Axl活性是迁移和侵袭所需要的，并且该活性可以通过抗体处理来抑制(WO04/008147)。类似地，在小鼠异种移植实验中，通过表达显性失活形式的Axl(Vajkoczy，P.等，Proc.Natl.Acad.ScienceU.S.A.，第103卷，第5799-5804页，2005)或者通过siRNA介导的Axl下调(Holland等，CancerRes.，第65卷，第9294-9303页，2005)体内消除Axl活性，防止了皮下和原位细胞生长。因此，已经描述了抗Axl单克隆抗体用于治疗癌症。例如，涉及抗Axl抗体的公开包括WO2009/063965、WO2009/062690、WO2011/014457、US2014/0227283和第8,853,369号美国专利。US2014/0227283公开了抗Axl单克隆抗体及其在诊断和治疗方法中的用途。WO2009/062690公开了结合Axl蛋白的细胞外结构域并且可以至少部分抑制Axl活性的抗体。这些抗Axl单克隆抗体将在患者身体的任何位置以相似的亲和力结合Ax1，包括它们意图治疗的肿瘤的位置。预期这些抗体在非肿瘤环境中与Ax1的结合会对这些环境中Axl的正常功能产生不利影响，因此可能会引起显著的副作用。本专利技术提供条件活性的抗Axl抗体和抗体片段，与其在非肿瘤环境中对Axl的结合亲和力相比，其在肿瘤微环境中对Ax1具有更高的结合亲和力。与本领域已知的抗Axl单克隆抗体相比，预期本专利技术的抗Axl抗体和抗体片段具有相当的或更高的抗癌功效并且具有减少的副作用。这还可以允许施用更高剂量的抗Axl抗体和抗体片段或更频繁的治疗，从而提供更有效的治疗选择。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了分离的重链可变区多肽，其特异性结合Ax本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的多肽，其特异性结合Axl蛋白，所述多肽包含含有三个互补决定区的重链可变区，所述区具有H1、H2和H3序列，其中：(a)H1序列为X1GX2X3MX4(SEQ ID NO:1)；(b)H2序列为LIKX5SNGGTX6YNQKFKG(SEQ ID NO:2)；(c)H3序列为GX7X8X9X10X11X12X13X14DYX15X16(SEQ ID NO:3)，其中，X1为T或A或W，X2为H或A，X3为T或I，X4为N或I，X5为P或N，X6为S或I或T，X7为H或D或E或P或R或W，X8为Y或N，X9为E或A或D或F或G或H或I或L或M或N或R或V或Y，X10为S或D或M或N或Q，X11为Y或C或E或P，X12为F或E或N或S或T或V，X13为A或D或G或L或Y，X14为M或E或F，X15为W或A或D或H或L或N或P或R或T，X16为G或H。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.15 US 62/323,0361.一种分离的多肽，其特异性结合Axl蛋白，所述多肽包含含有三个互补决定区的重链可变区，所述区具有H1、H2和H3序列，其中：(a)H1序列为X1GX2X3MX4(SEQIDNO:1)；(b)H2序列为LIKX5SNGGTX6YNQKFKG(SEQIDNO:2)；(c)H3序列为GX7X8X9X10X11X12X13X14DYX15X16(SEQIDNO:3)，其中，X1为T或A或W，X2为H或A，X3为T或I，X4为N或I，X5为P或N，X6为S或I或T，X7为H或D或E或P或R或W，X8为Y或N，X9为E或A或D或F或G或H或I或L或M或N或R或V或Y，X10为S或D或M或N或Q，X11为Y或C或E或P，X12为F或E或N或S或T或V，X13为A或D或G或L或Y，X14为M或E或F，X15为W或A或D或H或L或N或P或R或T，X16为G或H。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述重链可变区由选自SEQIDNO:11-13的序列的DNA序列编码。3.根据权利要求1-2中任一项所述的多肽，其与包括三个互补决定区L1、L2和L3序列的分离的轻链可变区组合，其中：(a)L1序列为KASQDX17X18SX19VX20(SEQIDNO:4)；(b)L2序列为X21X22X23TRX24T(SEQIDNO:5)；(c)L3序列为QEX25X26SX27X28X29X30(SEQIDNO:6)，其中，X17为V或D或G或N或W，X18为S或V，X19为A或L或M，X20为A或D或N或Q，X21为W或F，X22为A或I或N或P或Q，X23为S或D，X24为H或D，X25为H或C或F或I或L或Q或S或T或V或Y，X26为F或C或D或E或G或N或S，X27为T或C或P，X28为P或A或C或D或E或H或K或S或T或V或W，X29为L或G或R，X30为T或I或R。4.根据权利要求3所述的多肽，其中所述轻链可变区由选自SEQIDNO:7-10的DNA序列编码。5.一种分离的多肽，其特异性结合Axl蛋白，所述多肽包含轻链可变区，所述轻链可变区包括具有L1、L2和L3序列的三个互补决定区，其中：(a)L1序列为KASQDX17X18SX19VX20(SEQIDNO:4)；(b)L2序列为X21X22X23TRX24T(SEQIDNO:5)；(c)L3序列为QEX25X26SX27X28X29X30(SEQIDNO:6)，其中，X17为V或D或G或N或W，X18为S或V，X19为A或L或M，X20为A或D或N或Q，X21为W或F，X22为A或I或N或P或Q，X23为S或D，X24为H或D，X25为H或C或F或I或L或Q或S或T或V或Y，X26为F或C或D或E或G或N或S，X27为T或C或P，X28为P或A或C或D或E或H或K或S或T或V或W，X29为L或G或R，X30为T或I或R。6.根据权利要求5所述的多肽，其中所述轻链可变区由选自SEQIDNO:7-10的DNA序列编码。7.一种抗Axl抗体或抗体片段，其包含权利要求1所述的分离的重链可变区多肽。8.根据权利要求7所述的抗体或抗体片段，其还包含分离的轻链可变区，所述轻链可变区包...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰·M·肖特，怀文·张，格哈德·弗雷，
申请(专利权)人：生物蛋白有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US