本发明专利技术涉及一种抗人CD26抗体及其制备和商业化应用，属于体外诊断领域。本发明专利技术公开的一种抗人CD26抗体，其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。本发明专利技术提供的抗人CD26抗体特异性等相关检测性能可满足免疫组化试剂盒的性能要求，并且申请人基于上述抗体构建的嵌合人源抗体更便于大量重组表达生产，减少人抗鼠抗体反应，减少非特异性吸附，可满足大规模临床应用的需求。
【技术实现步骤摘要】
一种抗人CD26抗体及其在检测试剂盒中的应用
本专利技术属于体外诊断领域，尤其是一种抗人CD26抗体及其在免疫组织化学检测试剂盒中的应用。
技术介绍
CD26是一种普遍存在的多功能II型跨膜蛋白，有多种生物学功能，也可以以溶解形式存在于血浆中。CD26常以同源二聚体形式存在，其单体含766个氨基酸，相对分子质量约110kDa。CD26氨基酸残基从内向外分为5个部分：胞内区(aa1～6)、跨膜区(aa7～28)、高度糖基化区(aa29-323)、富含半胱氨酸区(aa324～551)和C端催化结构域(552～766)。CD26的C端催化结构域发挥二肽基肽酶IV(Dipeptidylpeptidase4，DPPIV)活性，可以水解体内多种底物发挥生物学作用，富含半胱氨酸区可以和体内多种分子相互作用，从而参与体内免疫功能。CD26在免疫调节中的作用已被广泛研究，CD26是T细胞活化的分子标志，也在T细胞信号转导过程中作为共刺激分子，还涉及多种T细胞功能，包括T细胞发生成熟及迁移，细胞因子分泌，T细胞依赖的抗体产生，B细胞免疫球蛋白转型等。CD26在自身免疫性疾病的发生发展过程中发挥重要作用，已成为临床疾病的分子标志，并被认为是某些免疫性疾病的治疗或诊断靶点。研究表明，部分癌症患者肿瘤组织无CD26表达，该类病人在使用以CD26为靶点的抗癌药物无疗效。因此，在使用CD26靶点药物前，对癌症病人肿瘤组织进行CD26蛋白表达情况检测，可达到精准治疗的效果。本专利技术所涉及的CD26抗原免疫组织化学检测试剂盒则可达到上述效果。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一个能有效的、特异性结合人CD26的抗体，并将其应用到免疫组织化学检测试剂盒中。更具体地说：本专利技术的第一目的在于提供一种抗人CD26抗体，其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：1所示的HCDR1、如序列SEQIDNO：2所示的HCDR2和如序列SEQIDNO：3所示的HCDR3；以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：4所示的LCDR1、如序列SEQIDNO：5所示的LCDR2和如序列SEQIDNO：6所示的LCDR3。优选的是上述抗人CD26抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。本专利技术第二个目的是提供一种嵌合抗体，所述抗体重链氨基酸序列如SEQIDNO:9所示，编码抗体重链的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示，所述抗体轻链氨基酸序列如SEQIDNO:11所示，编码抗体轻链的核苷酸序列如SEQIDNO:12所示。本专利技术第三个目的是提供一种含有上述嵌合抗体核苷酸序列的表达载体。本专利技术第四个目的是提供一种含有上述嵌合抗体表达载体的重组细胞株。本专利技术第五个目的是提供一种生产上述嵌合抗体的方法，包括：(1)构建上述所述的表达抗人CD26抗体的哺乳动物宿主细胞株；(2)将上述细胞株接种于培养基中悬浮培养；(3)抗人CD26嵌合抗体的纯化制备。上述所述载体优选为pCHO1.0。上述所述哺乳动物细胞CHO优选为CHO-S细胞。本专利技术的第六个目的在于提供上述抗人CD26抗体在检测人体组织中CD26蛋白的应用。本专利技术第七个目的是提供一种用于检测人肿瘤组织中的CD26蛋白表达的免疫组化试剂盒，包括抗人CD26抗体、同型对照阴性抗体、抗体稀释液和监控染色质量的质控片，所述抗人CD26抗体，其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：1所示的HCDR1、如序列SEQIDNO：2所示的HCDR2和如序列SEQIDNO：3所示的HCDR3；以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：4所示的LCDR1、如序列SEQIDNO：5所示的LCDR2和如序列SEQIDNO：6所示的LCDR3。优选的，上述抗人CD26抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。作为优选，所述抗人CD26抗体为嵌合抗体，其氨基酸序列由如SEQIDNO:7所示的重链可变区与人单抗IgG1重链恒定区融合，如SEQIDNO:8所示所述的轻链可变区与人单抗IgG1轻链恒定区融合构成。作为优选，所述抗体稀释液优选含有1％BSA和10％山羊血清的0.05MTBS。作为优选，所述抗体工作浓度为2.5-10ug/mL。作为优选，与试剂盒配套使用的组织固定液为4％多聚甲醛或10％中性缓冲福尔马林。作为优选，与试剂盒配套使用的抗原修复液为pH6.0的柠檬酸盐缓冲液。在应用本专利技术的试剂盒时，抗体和目标抗原(CD26)结合后通过显色反应呈现组织切片中的目标抗原位点，通过光学显微镜可确定目标抗原的分布和含量，其结果可以为CD26靶点抗癌药物筛选临床适用人群并提供临床用药指导。本专利技术提供的抗体特异性等相关检测性能可满足免疫组化试剂盒的性能要求，并且重组表达抗体便于大量生产，减少人抗鼠抗体反应，减少非特异性吸附，可满足大规模临床应用的需求。附图说明图1.抗人CD26鼠抗重链及轻链可变区基因电泳图。Lane1为200DNALadder，Lane1为重链可变区PCR扩增基因，Lane3为轻链可变区PCR扩增基因。图2.抗人CD26嵌合抗体重链和轻链PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图。泳道1为蛋白Marker，泳道2为重链基因PCR产物；泳道3为轻链基因PCR产物。图3抗人CD26嵌合抗体经过两步层析SDS-PAGE电泳图。其中，泳道1为10-100KD非预染蛋白Marker，泳道2为抗人CD26嵌合抗体。图4抗体特异性检测效果图(WesternBlot)。泳道1为标准蛋白质(Marker)；泳道2为重组CD26蛋白。图5本专利技术试剂盒检测CD26高表达和不(或低)表达细胞结果(显微镜下400X观察)。图5.1检测抗体在CD26高表达细胞中的染色图；5.2阴性对照抗体在CD26高表达细胞中的染色；图5.3检测抗体在CD26不(或低)表达细胞中的染色图；5.4阴性对照抗体在CD26不(或低)表达细胞中的染色。图6检测抗体在正常人体组织中的染色图(显微镜下200X观察)。图6.1检测抗体在正常人体大脑组织中的染色图；6.2阴性对照抗体在正常人体大脑组织中的染色；图6.3检测抗体在正常人体甲状腺组织中的染色；图6.4阴性对照抗体在正常人体甲状腺组织中的染色；图6.5检测抗体在正常人体肾上腺组织中的染色图；图6.6阴性对照抗体在正常人体肾上腺组织中的染色；图6.7检测抗体在正常人体小肠组织中的染色；图6.8阴性对照抗体在正常人体小肠组织中的染色；图6.9检测抗体在正常人体肝脏组织中的染色；图6.10阴性对照抗体在正常人体肝脏组织中的染色。图7本专利技术试剂盒检测肿瘤病人组织结果(显微镜下400X观察)。图7.1检测抗体在人肾癌组织中的染色图；7.2阴性对照抗体在人肾癌组织中的染色；图7.3检测抗体在人肾癌旁组织中的染色；图7.4阴性对照抗体在人肾癌旁组织中的染色。具体实施方式定义“抗体”又称免疫球蛋白，是一类由B淋巴细胞分泌的大型Y形蛋白质，能够通过Y形的其中两个分叉顶端的互补位点(抗原结结合位)特异性结合靶抗原的免疫球蛋白分子，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗人CD26抗体，其特征在于，其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。
【技术特征摘要】
1.抗人CD26抗体，其特征在于，其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：1所示的HCDR1、如序列SEQIDNO：2所示的HCDR2和如序列SEQIDNO：3所示的HCDR3；以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQIDNO：4所示的LCDR1、如序列SEQIDNO：5所示的LCDR2和如序列SEQIDNO：6所示的LCDR3。2.如权利要求1所述的抗人CD26抗体，其特征在于，其重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。3.如权利要求2所述的抗人CD26抗体，其特征在于，所述抗体为嵌合抗体，嵌合抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNO:9所示；所述抗体轻链氨基酸序列如SEQIDNO:11所示...
【专利技术属性】
技术研发人员：马永，赵利利，王安良，
申请(专利权)人：江苏众红生物工程创药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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