本发明专利技术公开了一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，试剂R1含有：缓冲液0.01mol/L～0.12mol/L，氯化钠0.1mol/L～0.2mol/L，稳定剂0.01％～0.15％，防腐剂0.004％～0.10％，反应促进剂2％～4％；试剂R2含有：缓冲液0.01mol/L～0.12mol/L，氯化钠0.1mol/L～0.2mol/L，稳定剂0.01％～0.15％，防腐剂0.004％～0.10％，CCP致敏胶乳液2.0～4％，抗人Ig-G抗体0.003％～0.010％。本发明专利技术的试剂盒，融合了双抗体法和PEG法的优点，同时减少了第二抗体和PEG的用量，节约了成本，提高了灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学免疫体外诊断试剂领域，具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试 剂盒。
技术介绍
抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗 体，对类风湿性关节炎（RA)具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破 坏较抗CCP抗体阴性者严重。 类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis,RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾 病。在全世界大约有1%的人罹患此病。RA能引起关节的疼痛、僵直及肿胀。在发病2年 内即可能出现不可逆的骨关节损伤，并可引起多种并发症，如神经系统疾病、心包炎、淋巴 腺炎等。因此，及早诊断RA及给予缓解病情的药物治疗，对控制病情非常重要。1998年， 国外首次报道的抗环瓜氨酸肽抗体（anti-cycliccirullinatedpeptideantibodies,抗 CCP抗体）的检测，对RA具有较高的敏感性和特异性，是RA新的血清标志物。 1998 年Schellekens和GirbalNeuhause等根据filaggrin的cDNA序列合成的 多肽证实瓜氨酸残基是类风湿关节炎特异的抗中间丝相关蛋白（filaggrin)抗体识别表 位的必需组成。通过对基因文库中各个序列号的filggrin氨基酸序列进行分析，合成了一 条以瓜氨酸代替精氨酸的20个左右氨基酸残基的肽链。并通过一定的试验显示了瓜氨酸 是RA患者血清中抗filaggrin相关抗体识别的主要组成性抗原决定簇成分。抗环瓜氨酸 肽抗体（CCP)ELISA法是1998年Schellkens等建立起来辅助诊断RA的检测方法。应用 ELISA法可定性或定量检测患者血清中抗CCP抗体。JansenAL等通过不同类型的多关节 疾病患者血清中抗CCP抗体的测定，预测了抗CCP抗体大于50AU/ml即可对早期类风湿性 关节炎有较高的敏感性和特异性。BizzaroN等检测了RA患者抗CCP抗体的水平，结果也 同样显示了抗CCP抗体的临界值为50AU/ml。并且RA患者清血清中抗CCP抗体的平均水 平为1100AU/ml(范围为：57~3419AU/ml。而对照组抗CCP抗体的平均水平仅为6. 8AU/ ml(范围为~39AU/ml)。进一步证实了抗CCP抗体对RA患者的诊断价值。 目前检测抗环瓜氨酸肽抗体的方法主要有三种：1、酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-linkedTmmunoSorbentAssay,ELISA) ;2、免疫胶体金技术（Immunecolloidal goldtechnique) ;3、胶乳增强免疫透射比浊法（PETIA)。ELISA虽然在临床上用了将近20 年，但在使用上仍然存在不少缺陷，它定量准确定差，操作时间长，样本量不大，自动化程度 低，单批次测定费用较高，一般只能用于定性检测；胶体金法只能测较小的样本量，并且只 能定性检测；胶乳免疫比浊法是近些年出现的能准确、迅速、稳定、批量测定抗环瓜氨酸肽 抗体的方法。其测定时间短，特异性好，精密度高，准确度好，适用于急门诊的检测。但是 使用胶乳免疫比浊法检测抗环瓜氨酸肽抗体时，仍然存在一些弊端：在抗环瓜氨酸肽抗体 Anti-CCP的含量极少或极高时，形成的沉淀物Anti-CCP的致敏的胶乳微球复合物很少，甚 至无沉淀形成，检测试剂将不能准确检测定Anti-CCP的含量。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种检测灵敏度 高、检测时间短，即使在抗环瓜氨酸肽抗体的含量极少或极高时也能准确检测的抗环瓜氨 酸肽抗体检测试剂盒。 为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是： -种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，包含试剂R1、试剂R2,所述试剂Rl中含有：【主权项】1. 一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，包含试剂RU试剂R2,其特征在于所述试剂Rl 中含有：所述试剂R2中含有：2. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述抗人Ig-G抗 体为驴抗人、羊抗人、兔抗人抗体中的至少一种。3. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为三 羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种。4. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述反应促进剂 选自 PEG-6000、PEG-4000、PEG-2000、PEG-8000 中的至少一种。5. 如权利要求4所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述反应促进剂 为 PEG-6000。6. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为 Tween-20, TritonX-lOO、海藻糖、EDTA 中的至少一种。7. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为叠 氮钠、硫柳汞、大环内酯类抗生素中的至少一种。8. 如权利要求1至7任一权利要求所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于 所述CCP致敏胶乳液的制备方法包括以下步骤： (1) 羧基聚苯乙烯胶乳的活化及偶联：取0. 5ml羧化聚苯乙烯胶乳置于离心管中，用 I. 5mlMES缓冲液洗涤3次，在13000r/min离心20min，取沉淀物，在所述沉淀物中加入碳 化二亚胺〇. 5mg和N-羟基琥珀酰亚胺8mg，在IOOHz超声10s，室温搅拌30min，然后在 13000r/min离心，弃上清，用ImlMES缓冲液重悬，得到所述羧基聚苯乙稀胶乳； (2) 向所述羧基聚苯乙烯胶乳中加入0.2ml的抗环瓜氨酸肽抗体，室温搅拌2小时， 加入在胶乳体系中质量浓度为0. 05 %的牛血清白蛋白做终止剂，继续反应2小时后，在 13000r/min离心，然后弃上清，用PBS重悬，得到所述CCP致敏胶乳液。9. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述CCP致敏胶 乳液的粒径为100~300nm。10. 如权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：其特征在于所述 试剂Rl中含有：所述试剂R2中含有·【专利摘要】本专利技术公开了一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，试剂R1含有：缓冲液0.01mol/L～0.12mol/L，氯化钠0.1mol/L～0.2mol/L，稳定剂0.01％～0.15％，防腐剂0.004％～0.10％，反应促进剂2％～4％；试剂R2含有：缓冲液0.01mol/L～0.12mol/L，氯化钠0.1mol/L～0.2mol/L，稳定剂0.01％～0.15％，防腐剂0.004％～0.10％，CCP致敏胶乳液2.0～4％，抗人Ig-G抗体0.003％～0.010％。本专利技术的试剂盒，融合了双抗体法和PEG法的优点，同时减少了第二抗体和PEG的用量，节约了成本，提高了灵敏度。【IPC分类】G01N33-68【公开号】CN104764888【申请号】CN201510221084【专利技术人】杨帆, 王好玉, 胡学亭, 马金环, 于刚 【申请人】潍坊市康华生物技术有限公司【公开日】2015年7月8日【申请日】2015年5月4日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，包含试剂R1、试剂R2，其特征在于所述试剂R1中含有：所述试剂R2中含有：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，王好玉，胡学亭，马金环，于刚，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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