条件活性抗EPCAM抗体、抗体片段、其免疫缀合物以及其用途制造技术

提供了具有重链可变区和/或轻链可变区且与EpCAM蛋白特异性地结合的分离的多肽，以及含有所述重链可变区和/或所述轻链可变区且与EpCAM蛋白结合的抗体和抗体片段。还提供了包括所述多肽和含有所述多肽的所述抗体和抗体片段的药物组合物和试剂盒。片段的药物组合物和试剂盒。片段的药物组合物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】条件活性抗EPCAM抗体、抗体片段、其免疫缀合物以及其用途


[0001]本公开涉及抗EpCAM抗体、抗体片段以及此类抗体和抗体片段的免疫缀合物以及抗体、抗体片段和免疫缀合物在诊断方法和治疗方法中的用途。

技术介绍

[0002]上皮细胞粘附/激活分子(EpCAM，还称为CD326、HEA125、MK
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1、EGP
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2、EGP34、GA733
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2、KSA、TROP
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1、KS1/4和ESA)是癌症疗法中的第一且最重要的免疫治疗靶标之一，因为其对大多数不同来源的癌有高水平且频繁的表达(赫林(Herlyn)等人,美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA),76:1438
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1442,1979；温特(Went)等人,人体病理学(Hum Pathol),35:122
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128,2004)。此分子是在进化期间高度保守的长度为314个氨基酸(aa)的相对较小的I型跨膜糖蛋白。据报道，所述分子介导非钙依赖性同型细胞到细胞粘附(李维诺夫(Litvinov)等人,细胞生物学杂志(J Cell Biology),125:437
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446,1994)。所述分子由26个aa的短细胞内结构域组成，其中存在两个α
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辅肌动蛋白结合位点用于与肌动蛋白细胞骨架(巴尔萨尔(Balzar)等人,分子与细胞生物学(Mol Cell Biol),18(8):4833
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4843,1998)、23
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aa跨膜结构域、242
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aa细胞外结构域(ECD)和从其成熟形式裂解的23
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aa信号肽相互作用。EpCAM的细胞外结构域具有三个N连接的糖基化位点。在某些类型的癌症中，已经报道了正常组织与恶性组织之间的有差别的糖基化状态(泡利(Pauli)等人,癌症快报(Cancer Lett),193:25
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32,2003)。
[0003]细胞外结构域含有3个结构域。前两个结构域被认为类似于表皮生长因子(EGF)样重复，其中存在十二个半胱氨酸残基(巴尔萨尔等人,分子与细胞生物学,21:2570
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2580,2001)。然而，一些研究表明，EpCAM的第二EGF样重复实际上是甲状腺球蛋白(TY)结构域(林南巴赫(Linnenbach)等人,美国国家科学院院刊,86:27
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31,1989；庄(Chong)和斯佩泽尔(Speicher),生物化学杂志(J Biol Chem),276:5804
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5813,2001)。第三结构域是与任何已知分子都无关的独特的半胱氨酸稀少区(CPR)(博伊尔勒(Baeuerle)和吉莱(Gires),英国癌症杂志(Br J Cancer),96:417
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423,2007)。EpCAM在防止细胞到细胞粘附、细胞信号传导、迁移、增殖和分化中起重要作用(图1)。
[0004]EpCAM在人体中的表达是上皮特异性的。除了鳞状上皮和如表皮角质细胞、肝细胞、胃壁细胞和肌上皮细胞等一些特异性上皮细胞类型外，大多数人类上皮细胞表达EpCAM(巴尔萨尔等人,分子医学杂志(J Mol Med),77:699
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712,1999；蒙堡(Momburg)等人,癌症研究(Cancer Res),47:2883
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2891,1987)。在上皮来源的肿瘤中，通常观察到较高的表达水平(巴尔萨尔等人,分子医学杂志,77:699
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712,1999；温特等人,美国病理学杂志(Am J Pathol),163:2139
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2148,2003；温特等人,人体病理学,35:122
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128,2004；温特等人,英国癌症杂志,94:128
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135,2006)。例如，已经发现EpCAM蛋白在多种人类腺癌和鳞状细胞癌上表达(温特等人,人体病理学,35:122
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128,2004)。使用免疫组织化学(IHC)染色连同微阵列技术的最近研究已经在来自乳腺癌、卵巢癌、肾癌、食道癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌和肺癌患者的相当大量的样本中发现了EpCAM表达(斯皮佐(Spizzo)等人,癌症研究和治疗
(Cancer Res Treat),86:207
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213,2004；斯皮佐等人,妇科肿瘤学(Gynecol Oncol),103:483
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488,2006；斯托克莱(Stoecklein)等人,BMC癌症(BMC Cancer),6:165,2006；基穆拉(Kimura)等人,国际肿瘤学杂志(Int J Oncol),30:171
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179,2007；温特等人,美国外科病理学杂志(Am J Surg Pathol),29:83
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88,2005；温特等人,英国癌症杂志,94:128
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135,2006)。数据强调了EpCAM作为用于人类癌症治疗的免疫治疗靶标的潜在效用。
[0005]由于已知上皮细胞是人类恶性肿瘤开发中最重要的细胞类型，并且所有恶性肿瘤中90％以上都是上皮来源的(比尔什梅爱尔(Birchmeiera)等人,解刨学报(Acta Anatomica),156(3):217
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226,1996)，因此EpCAM现在被认为是最频繁且强烈地表达的肿瘤相关抗原之一。所述分子已经被多次独立地发现为用于单克隆抗体开发的免疫原性肿瘤相关抗原(哥特林格(Gottlinger)等人,国际癌症杂志(Int JCancer),38:47
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53,1986；爱德华兹(Edwards)等人,癌症研究,46:1306
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1317,1986；斯珀尔(Spurr)等人,国际癌症杂志,38:631
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636,1986；蒙堡等人,癌症研究,47:2883
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2891,1987；舍恩等人,研究皮肤病学杂志(J Investig Dermatol),102:987
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991,1994；鲍莫尔(Bumol)等人,杂交瘤(Hybridoma),7:407
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415,1988；夸克(Quak)等人,杂交瘤,9:377
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387,1990)。
[0006]事实上，曾经应用于人类癌症治疗的第一种单克隆抗体实际上是靶向EpCAM的鼠类IgG2a抗体，称为mAb 17
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1A(稍后命名为依决洛单抗(edrecolomab)和派诺雷克斯单抗(Panorexs))(西尔斯(Sears)等人,柳叶刀(Lancet),1(8275):762
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765,1982；西尔斯等人,生物反应调节剂杂志(J Biol Respons本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的多肽，其包括重链可变区和轻链可变区且与人EpCAM特异性地结合，其中所述重链可变区包含具有序列H1、H2和H3的三个互补决定区，其中：所述H1序列是GYTFTSYWMH(SEQ ID NO:1)；所述H2序列是X1IRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:2)；并且所述H3序列是GDNWVGFAN(SEQ ID NO:3)；其中X1是Y或D；并且所述轻链可变区包含具有序列L1、L2和L3的三个互补决定区，其中：所述L1序列是SASSSISYMH(SEQ ID NO:4)；所述L2序列是STSNLX2S(SEQ ID NO:5)；并且所述L3序列是X3QWSTYX4T(SEQ ID NO:6)；其中X2是A或H；X3是H或E；并且X4是H或E；并且前提是X1、X2、X3和X4不能同时是Y、A、H和H。2.根据权利要求1所述的分离的多肽，其中所述H2序列是YIRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:22)。3.根据权利要求1所述的分离的多肽，其中所述H2序列是DIRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:23)。4.根据权利要求1所述的分离的多肽，其中所述重链可变区具有选自SEQ ID NO:7
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13的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的分离的多肽，其中所述L2序列是STSNLAS(SEQ ID NO:24)。6.根据权利要求1所述的分离的多肽，其中所述L2序列是STSNLHS(SEQ ID NO:25)。7.根据权利要求2到6中任一权利要求所述的分离的多肽，其中所述L3序列是HQWSTYHT(SEQ ID NO:26)。8.根据权利要求2到6中任一权利要求所述的分离的多肽，其中所述L3序列是HQWSTYET(SEQ ID NO:27)。9.根据权利要求2到6中任一权利要求所述的分离的多肽，其中所述L3序列是EQWSTYHT(SEQ ID NO:28)。10.根据权利要求1或4所述的分离的多肽，其中所述轻链可变区具有选自SEQ ID NO:14
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21的氨基酸序列。11.一种抗EpCAM抗体或抗体片段，其包括一或多个根据权利要求1到10中任一权利要求所述的分离的多肽。12.一种抗体或抗体片段，其与人EpCAM蛋白特异性地结合且包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含三个互补决定区，所述区具有序列H1、H2和H3，其中：所述H1序列是GYTFTSYWMH(SEQ ID NO:1)；所述H2序列是X1IRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:2)；并且所述H3序列是GDNWVGFAN(SEQ ID NO:3)；其中X1是Y或D，并且所述轻链可变区包含三个互补决定区，所述区具有序列L1、L2和L3，其中：所述L1序列是SASSSISYMH(SEQ ID NO:4)；所述L2序列是STSNLX2S(SEQ ID NO:5)；并且所述L3序列是X3QWSTYX4T(SEQ ID NO:6)；其中X2是A或H；X3是H或E；并且X4是H或E；并且前提是X1、X2、X3和X4分别不能同时是Y、A、H
和H。13.根据权利要求12所述的抗体或抗体片段，其中所述H2序列是YIRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:22)。14.根据权利要求12所述的抗体或抗体片段，其中所述H2序列是DIRPSTGYTEYNQKFKD(SEQ ID NO:23)。15.根据权利要求12所述的抗体或抗体片段，其中所述重链可变区具有选自SEQ ID NO:7
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13的氨基酸序列。16.根据权利要求13到15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述L2序列是STSNLAS(SEQ ID NO:24)。17.根据权利要求13到15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述L2序列是STSNLHS(SEQ ID NO:25)。18.根据权利要求13到15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述L3序列是HQWSTYHT(SEQ ID NO:26)。19.根据权利要求13到15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述L3序列是HQWSTYET(SEQ ID NO:27)。20.根据权利要求13到15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述L3序列是EQWSTYHT(SEQ ID NO:28)。21.根据权利要求12和15中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中所述轻链可变区具有选自SEQ ID NO:14
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21的氨基酸序列。22.一种抗体或抗体片段，其包括重链可变区和轻链可变区，每个区分别独立地与选自以下的氨基酸序列对具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％一致性：SEQ ID NO:8和14、SEQ ID NO:9和14、SEQ ID NO:7和15、SEQ ID NO:7和16、SEQ ID NO:7和17、SEQ ID NO:11和20、SEQ ID NO:12和21、SEQ ID NO:11和18、SEQ ID NO:13和18以及SEQ ID NO:10和19；所述抗体或抗体片段与人EpCAM蛋白特异性地结合。23.根据权利要求22所述的抗体或抗体片段，其中所述重链可变区和所述轻链可变区具有选自以下对的任何一对序列：SEQ ID NO:8和14、SEQ ID NO:9和14、SEQ ID NO:7和15、SEQ ID NO:7和16、SEQ ID NO:7和17、SEQ ID NO:11和20、SEQ ID NO:12和21、SEQ ID NO:11和18、SEQ ID NO:13和18、SEQ ID NO:10和19。24.根据权利要求12到15、22和23中任一权利要求所述的抗体或抗体片段，其中与发生在非肿瘤微环境中的相同条件的不同值相比，所述抗体或抗体片段在肿瘤微环境中的条件的值下对EpCAM蛋白具有更高的结合亲和力。25.根据权利要求24所述的抗体或抗体片段，其中所述条件是pH。26.根据权利要求25所述的抗体或抗体片段，其中所述肿瘤微环境中的pH在5.0到6.8的范围内并且所述非肿瘤微环境中的pH在7.0到7.6的范围内。27.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰，
申请(专利权)人：生物蛋白有限公司，
类型：发明
国别省市：