CD147嵌合抗原受体和使用方法技术

提供了特异性结合CD147的经修饰的单链可变片段(scFv)。还提供了包含所述经修饰的CD147scFv的嵌合抗原受体(CAR)、编码所述CAR的核酸、包含编码所述CAR的所述核酸的载体以及表达所述CAR的免疫细胞。还提供了治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用表达所公开的CD147

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD147嵌合抗原受体和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年3月15日提交的美国临时专利申请第62/819,403号的权益，所述申请通过引用整体并入本文。


[0003]本公开涉及免疫疗法，特别是靶向CD147的嵌合抗原受体和其用于治疗癌症的用途。
[0004]政府支持声明
[0005]本专利技术是根据美国国立卫生研究院授予的基金号AI130197、HL125018、AI124769
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01和AI129594在政府支持下进行的。政府享有本专利技术的某些权利。

技术介绍

[0006]肝癌是全球癌症相关死亡的第二大常见原因。预计到2030年，肝癌的负担将超过100万例。肝癌在全球病例中排名第五并且在男性死亡病例中排名第二。每年有50多万患者死于肝细胞癌(HCC)。
[0007]原发性肝癌包括肝细胞癌(HCC)、肝内胆管癌(iCCA)、纤维层癌和肝母细胞瘤。HCC和iCCA是最常见的原发性肝癌，占原发性肝癌病例的99％以上。仅HCC(每年近800,000新病例)就占所有原发性肝癌病例的90％。目前，没有有效疗法可用于治疗HCC。索拉非尼(CheckMate
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040，一种广泛用于晚期HCC患者的功效低且副作用严重的多激酶抑制剂)是HCC的一线标准全身药剂。目前，PD
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1阻断欧狄沃(Opdivo)(纳武单抗(Nivolumab))已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准作为二线治疗策略，用于先前用索拉非尼治疗的HCC患者。测试PD
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1阻断作为HCC的一线治疗的临床试验正在进行中。同时，使用PD
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1或PD
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L1阻断与其它干预相组合的各种临床试验也正在进行中。例如，在HCC可切除和潜在可切除的患者中评估抗PD
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1抗体联合抗CTLA
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4抗体的研究正在临床试验中进行测试(NCT03222076)。
[0008]嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞疗法已经成为用于治疗各种血癌的有前景的免疫治疗性策略。尽管CAR修饰的T细胞免疫疗法最近在血癌中取得了进展，但高成本和严重的毒性阻碍了其广泛使用。同时，CAR
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T细胞在靶向实体瘤期间面临着如在肿瘤微环境中维持持久的增殖和持久性等另外的挑战。CAR介导的肝癌免疫疗法的另外的挑战是寻找有效的靶标。

技术实现思路

[0009]CD147在不同的细胞类型(例如造血细胞、上皮细胞和内皮细胞)上以不同水平表达。然而，CD147在如在HCC、乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、卵巢癌、黑色素瘤和骨肉瘤等疾病状态下显著上调。提供了特异性靶向表达CD147的细胞的CAR。这些CAR可以用于表达或过表达CD147的癌症的免疫疗法。
[0010]本文公开了特异性结合CD147的经修饰的单链可变片段(scFv)。在一些实施方案
中，所述scFv具有氨基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQ ID NO:8的可变重链(VH)结构域互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3氨基酸序列和SEQ ID NO:9的可变轻链(VL)结构域CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列。在一些实例中，所述scFv与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％的序列相同性，或者包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。还提供了编码所述经修饰的CD147 scFv的核酸，如与SEQ ID NO:1的核酸分子具有至少90％的序列相同性的核酸，或者包括SEQ ID NO:1的核酸序列或由SEQ ID NO:1的核酸序列组成的核酸；以及包括所述核酸序列的载体。在另外的实施方案中，提供了编码所述经修饰的CD147 scFv(如SEQ ID NO:1)的载体，所述载体进一步包含与所述CD147 scFv核酸分子可操作地连接的诱导型启动子或增强子核酸分子。在一些实例中，所述增强子核酸是与编码所述CD147 scFv的核酸可操作地连接的Gal4上游激活序列(UAS)。在另一实例中，所述载体是synNotch构建体，例如包括与synNotch和Gal4
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VP64编码序列(例如SEQ ID NO:17)连接的经修饰的CD147 scFv核酸分子(例如SEQ ID NO:1)的核酸序列的载体。
[0011]还提供了CAR，所述CAR包括本文提供的经修饰的CD147 scFv、铰链结构域、跨膜结构域、包含一个或多个共刺激分子细胞内结构域以及细胞内信号传导结构域的细胞内结构域。在一个实施方案中，所述CD147
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CAR包括本文提供的经修饰的CD147 scFv、IgG1铰链结构域、CD28跨膜结构域、CD28和4
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1BB共刺激结构域以及CD3ζ信号传导结构域。在一些实例中，所述CD147
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CAR包括与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％相同性的氨基酸序列，或者包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成。
[0012]在一些实施方案中，所述CD147
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CAR进一步包括如胱天蛋白酶9等的诱导型自杀分子。在一些实例中，所述自杀分子的表达由四环素、多西环素或雷帕霉素诱导。在一个实例中，所述具有诱导型自杀基因的CD147
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CAR包括与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％相同性的氨基酸序列或者包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。所述CD147
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CAR可以进一步包括细胞因子受体细胞内结构域，如白介素
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15受体细胞内结构域(例如SEQ ID NO:12)、白介素
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12受体细胞内结构域或白介素18受体细胞内结构域。
[0013]还提供了编码本文公开的CD147
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CAR的核酸以及包括所述核酸的载体(如病毒载体)。在一些实例中，所述CD147
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CAR由与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6的核酸序列具有至少90％相同性的核酸序列编码。在其它实例中，所述CD147
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CAR由包括SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6的核酸序列或由SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6的核酸序列组成的核酸编码。
[0014]在另外的实施方案中，提供了编码CD147
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CAR(如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6)的载体，所述载体进一步包含与CD147
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CAR核酸分子可操作地连接的诱导型启动子或增强子核酸分子。在一些实例中，所述增强子核酸是与编码CD147
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CAR的核酸可操作地连接的Gal4上游激活序列(UAS)(例如SEQ ID NO:14)。在一个实例中，所述载体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体，其包含：(a)包含特异性结合CD147的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含分别为SEQ ID NO:2的氨基酸位置26
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32、52
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59和101
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104的可变重链(VH)结构域互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3氨基酸序列以及分别为SEQ ID NO:2的氨基酸位置155
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165、181
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187和220
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228的可变轻链(VL)结构域CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列；(b)铰链结构域；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内结构域，所述细胞内结构域包含一个或多个共刺激分子细胞内结构域以及细胞内信号传导结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合结构域与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少90％的序列相同性。3.根据权利要求2所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。4.根据权利要求1到3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合结构域与表达高水平的表面CD147的细胞结合。5.根据权利要求1到4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述一个或多个共刺激分子细胞内结构域包含CD28和4
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1BB的细胞内结构域。6.根据权利要求1到5中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3ζ的信号传导结构域。7.根据权利要求1到6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述铰链结构域包含IgG1铰链结构域。8.根据权利要求1到7中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域是CD28跨膜结构域或CD8a跨膜结构域。9.根据权利要求1到8中任一项所述的嵌合抗原受体，其包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％相同性的氨基酸序列。10.根据权利要求9所述的嵌合抗原受体，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。11.根据权利要求1到10中任一项所述的嵌合抗原受体，其进一步包含一个或多个另外的抗原结合结构域。12.根据权利要求11所述的嵌合抗原受体，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域与磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、甲胎蛋白或粘蛋白
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1特异性结合。13.根据1到12中任一项所述的嵌合抗原受体，其进一步包含诱导型自杀分子。14.根据权利要求13所述的嵌合抗原受体，其中所述自杀分子包含胱天蛋白酶9。15.根据权利要求13或权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述自杀分子的表达可由四环素、多西环素或雷帕霉素诱导。16.根据权利要求13或权利要求14所述的嵌合抗原受体，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％相同性的氨基酸序列。17.根据权利要求16所述的嵌合抗原受体，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。18.根据权利要求1到17中任一项所述的嵌合抗原受体，其进一步包含细胞因子受体细胞内结构域。
19.根据权利要求18所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞因子受体细胞内结构域是白介素
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15受体细胞内结构域、白介素
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12受体细胞内结构域或白介素18受体细胞内结构域。20.一种核酸分子，其编码根据权利要求1到19中任一项所述的嵌合抗原受体。21.根据权利要求20所述的核酸分子，其包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:14的核酸序列。22.一种载体，其包含根据权利要求20或权利要求21所述的核酸分子。23.根据权利要求22所述的载体，其进一步包含编码靶向乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的第二嵌合抗原受体的核酸分子。24.根据权利要求22所述的载体，其进一步包含诱导型启动子或增强子核酸分子，所述诱导型启动子或增强子核酸分子与所述嵌合抗原受体核酸分子可操作地连接。25.根据权利要求24所述的载体，其中所述增强子核酸分子是Gal4上游激活序列。26.根据权利要求25所述的载体，其中所述载体包含SEQ ID NO:15的核酸序列。27.根据权利要求22到26中任一项所述的载体，其中所述载体是病毒载体。28.根据权利要求27所述的载体，其中所述病毒载体是慢病毒载体或逆转录病毒载体。29.一种单链可变片段(scFv)，其特异性结合CD1...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：罗格斯新泽西州立大学，
类型：发明
国别省市：