抗DOG-1抗体或其抗原结合片段及其用途制造技术

本发明专利技术提供了具有改善功效的抗体、方法、组合物和制品，广泛地适用于抗体治疗和诊断领域，并且可以与能够与各种靶标反应的抗体联合使用。本发明专利技术提供了与抗DOG

【技术实现步骤摘要】
抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段及其用途。

技术介绍

[0002]DOG1(Discovered on Gastrointestinal stromal tumor
‑
1)，是一种钙离子激活的氯离子通道蛋白，又名ANO1、TAOS2、ORAOV2和 TMEM16A等，参与细胞膜电位、体液分泌、嗅觉形成、神经冲动传导与平滑肌收缩等生理过程。在肿瘤中，DOG1异常高表达。研究表明，DOG1在胃肠道间质瘤(Gastrointestinal stromal tumor，GIST) 中普遍高表达，阳性率高达99％。DOG1还高表达于多种消化道肿瘤，包括食管鳞状细胞癌、胃腺癌、肺腺癌、平滑肌瘤等，而正常组织中表达量极低。
[0003]此外，一项由1840名GIST患者组成的大样本临床实验证实， DOG1作为GIST的诊断分子靶标其准确率超过传统的c
‑
KIT靶标，目前DOG1已被广泛应用于GIST的诊断此外。
[0004]胃肠道间质瘤GIST是最常见的胃肠道间质来源肿瘤。GIST被认为起源于Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal，ICC)或者干细胞前体。大多数患者存在KIT突变，少部分患者存在PDGFRA突变。上述突变导致非配体依赖的受体酪氨酸激酶(Receptor TyrosineKinases，RTK)持续活化，导致肿瘤快速进展。也存在无上述突变的野生型肿瘤，发生与增殖机理不清。胃肠道间质瘤对化疗不敏感，手术切除是目前的首选治疗方案。近年来，随着靶向药物发展，对于体积较大难以手术患者，可使用靶向药物治疗。伊马替尼(Imatinib mesylate，Gleevec)是一种小分子抑制剂，能有效抑制KIT酪氨酸激酶受体，具有对抗KIT、PDFGFRA的活性，是目前治疗手术不可切除GIST的一线临床靶向药物。其他小分子靶向药物如苏尼替尼 (Sunitinib，Sutent)等，目前被用于经伊马替尼治疗失败后GIST患者的替代治疗药物。但上述药物在临床应用中会很快产生耐药性。综上所述，在结肠癌与间质瘤的靶向治疗过程中，肿瘤存在快速耐药现象，因此继续开发新型靶向药物具有重大意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段，编码抗DOG
‑
1抗体的核酸分子，用于表达抗DOG
‑
1抗体的载体和宿主细胞。本专利技术还提供了抗DOG
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1抗体在制备用于检测、治疗和/或预防肿瘤的药物和/或检测试剂中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种能够特异性结合DOG
‑
1 的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0007](a)下述3个重链可变区(VH)互补决定区(CDR)：
[0008](i)VH CDR1，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的CDR1 的序列，或者与所述VH中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；
[0009](ii)VH CDR2，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的CDR2 的序列，或者与所述VH中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和
[0010](iii)VH CDR3，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的 CDR3的序列，或者与所述VH中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；
[0011]和/或
[0012](b)下述3个轻链可变区(VL)CDR：
[0013](iv)VL CDR1，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR1 的序列，或者与所述VL中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；
[0014](v)VL CDR2，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR2 的序列，或者与所述VL中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和
[0015](vi)VL CDR3，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR3 的序列，或者与所述VL中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。
[0016]在某些优选的实施方案中，(i)
‑
(vi)任一项中所述的置换为保守置换。
[0017]在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(VH)中含有的3个 CDR和/或所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR，由Kabat、Chothia 或IMGT编号系统定义。
[0018]在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(VH)中含有的3个 CDR和/或所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR，由Kabat编号系统定义。
[0019]在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段或者包含：
[0020](a)下述3个重链可变区(VH)CDR：
[0021](i)VH CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO：3，或与SEQ ID NO：3相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2 个，3个或4个氨基酸的置换)的序列；
[0022](ii)VH CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO：4，或与SEQ ID NO：4相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2 个，3个，4个，5个或6个氨基酸的置换)的序列；和
[0023](iii)VH CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO：5，或与SEQ ID NO：5相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2 个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列；
[0024]和/或
[0025](b)下述3个轻链可变区(VL)CDR：
[0026](iv)VL CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO：6，或与SEQ ID NO：6相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2 个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列；
[0027](v)VL CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO：7，或与SEQ ID NO：7相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个或 2个氨基酸的置换)的序列；和
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段能够特异性结合DOG
‑
1，所述抗DOG
‑
1抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区的互补决定区：(i)VH CDR1，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的CDR1的序列，或者与所述VH中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(ii)VH CDR2，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的CDR2的序列，或者与所述VH中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(iii)VH CDR3，其具有如SEQ ID NO：1所示的VH中含有的CDR3的序列，或者与所述VH中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区的互补决定区：(iv)VL CDR1，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR1的序列，或者与所述VL中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(v)VL CDR2，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR2的序列，或者与所述VL中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(vi)VL CDR3，其具有如SEQ ID NO：2所示的VL中含有的CDR3的序列，或者与所述VL中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(i)
‑
(vi)任一项中所述置换为保守置换。2.根据权利要求1所述的抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段或者包含：(a)下述3个重链可变区(VH)互补决定区(CDR)：(i)VH CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO：3，或与SEQ ID NO：3相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(ii)VH CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO：4，或与SEQ ID NO：4相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(iii)VH CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO：5，或与SEQ ID NO：5相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)：(iv)VL CDR1，其由下述序列组成：SEQ ID NO：6，或与SEQ ID NO：6相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(v)VL CDR2，其由下述序列组成：SEQ ID NO：7，或与SEQ ID NO：7相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(vi)VL CDR3，其由下述序列组成：SEQ ID NO：8，或与SEQ ID NO：8相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；(i)
‑
(vi)任一项中所述的置换为保守置换。3.根据权利要求1所述的抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段或者包含：(a)重链可变区，其包含选自下列的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：1所示的序列；或(ii)与SEQ ID NO：1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；或(iii)与SEQ ID NOs：1所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的序列；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)SEQ ID NO：2所示的序列；或(v)与SEQ ID NO：2所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；或(vi)与SEQ ID NOs：2所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的序列；(ii)或(v)中所述置换是保守置换。4.根据权利要求1
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3任一所述的抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗DOG
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1抗体是嵌合抗体或人源化抗体。5.根据权利要求1
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3任一所述的抗DOG
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1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗DOG
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈向征，伍洋平，李文婷，杨金亮，李为民，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：