特异性结合CCSP-2的单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及与结肠癌分泌蛋白2(CCSP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合CCSP
‑
2的单克隆抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及与人结肠癌分泌蛋白
‑
2(CCSP
‑
2)的EGF2结构域特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。

技术介绍

[0002]大肠属于消化系统并且是位于小肠和肛门之间的器官。全长平均约1.5米，自右侧起分为盲肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠。结直肠癌是发生在结肠和直肠中的恶性肿瘤，并且恶性肿瘤细胞(癌细胞) 主要来源于上皮细胞。根据癌症发生的区域，发生在结肠的癌症称为结肠癌，发生在直肠的癌症称为直肠癌，并且这些统称为结直肠癌。
[0003]据全国癌症登记统计，2011年结直肠癌共发生28,112例，占癌症总发病率(21,8017例)的12.9％，位居癌症发病率第3位，癌症死亡率第4 位。
[0004]结直肠癌死亡率持续上升的另一个原因是结直肠癌的初期症状很少，因此韩国结直肠癌的早期发现率低至小于10％。许多结直肠癌患者在第3和第4阶段，当开始转移到其他器官时才被诊断为转移性结直肠癌。3 期结直肠癌的存活率相当低，为28％，4期大肠癌的存活率为6％，低于3期大肠癌的存活率。因此，结直肠癌的早期诊断非常重要。
[0005]目前，最普遍使用的结直肠癌诊断方法是双重对比钡灌肠和结肠镜检查。双重对比钡灌肠是一种检查方法，在清洗大肠后，通过肛门插入小管以注入被称为钡的造影剂，在大肠壁上涂覆钡的薄层，同时通过注入空气使大肠膨胀，并使用X射线荧光镜拍摄图像。这种方法的优点是识别大肠的整体轮廓和形状，容易识别结直肠癌的整体位置，容易检测大肠壁(诸如炎症或缺血变化)和小肠远端中的变化。然而存在不能够利用检测获得组织以及小息肉的准确性不如结肠镜检查的缺点。
[0006]作为一种用光和软管直接检查大肠的检查方法，结肠镜检查是诊断大肠疾病最准确的方法，这是因为医生可直接观察出血区域和病变表面，并确定组织的状况。活检也可与内窥镜检查同时进行，并且当患者在睡觉时通过静脉注射仅短时间起作用的镇静剂进行有意识的镇静内窥镜检查时，可在没有不适的情况下进行检查。
[0007]结肠镜检查是发现结肠直肠癌的最佳诊断工具，但是在检查中漏检的息肉在患者的下一次测试中被检测为已发展为癌症的频率较高。由于大于1cm的息肉随时间的推移进展为癌症的可能性相对显著增加，因此有必要改进技术以便不在内窥镜检查中遗漏小息肉，并试图避免在退出检查期间遗漏弯曲和粘膜皱襞后面的病变并留有足够的余量。作为这些尝试中的一种，正在对用于分子成像的生物标志物和标志物的开发进行研究，以改善肿瘤检测率。
[0008]同时，结肠癌分泌蛋白(例如，CCSP
‑
2)是一种结直肠癌特异性标志物(biomarker)，关于编码其的基因的信息在相关领域中是众所周知的。例如，CCSP
‑
2可以为人CCSP
‑
2，关于人CCSP
‑
2蛋白的信息以登录号 AAT77225.1在国家生物技术信息中心(NCBI)注册，关于编码其的基因的信息同样以登录号AY572972.1在NCBI注册。CCSP
‑
2的功能和作用尚不清楚，但在RNA水平上，已知其在结直癌细胞和/或组织中的平均表达水平是
NO：23表示的 CDR2区和由SEQ ID NO：24表示的CDR3区的轻链可变区。
[0022]在本专利技术的一个实施方案中，抗原结合片段可选自Fab、Fab'、 F(ab')2、scFv、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd'。
[0023]在本专利技术的一个实施方案中，单克隆抗体或其抗原结合片段可以包括重链可变区和轻链可变区，其选自包括由SEQ ID NO：25表示的多肽序列的重链可变区和包括SEQ ID NO：26表示的多肽序列的轻链可变区；包括由SEQ ID NO：27表示的多肽序列的重链可变区和包括由SEQ ID NO：28 表示的多肽序列的轻链可变区；包括由SEQ ID NO：29表示的多肽序列的重链可变区和包括由SEQ ID NO：30表示的多肽序列的轻链可变区；以及包括由SEQ ID NO：31表示的多肽序列的重链可变区和包括由SEQ ID NO：32 表示的多肽序列的轻链可变区。
[0024]本专利技术还提供编码该单克隆抗体的多核苷酸，或其抗原结合片段。
[0025]本专利技术还提供了一种包含该多核苷酸的表达载体。
[0026]本专利技术还提供了一种转化体，其中引入了表达载体，不包括人。
[0027]本专利技术还提供了一种用于诊断癌症的组合物，其包括单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0028]在本专利技术的一个实施方案中，所述癌症选自：食管癌、胃癌、结直肠癌、直肠癌、口腔癌、咽癌、喉癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、骨癌、结缔组织癌、皮肤癌、脑癌、甲状腺癌、白血病、霍奇金病、软组织肉瘤、淋巴瘤和多发性骨髓瘤血液癌。
[0029]本专利技术还提供了一种用于诊断癌症的试剂盒，其包括该组合物。
[0030]本专利技术还提供了一种提供用于癌症诊断的信息的方法，其包括使用该单克隆抗体或其抗原结合片段通过抗原抗体反应检测从怀疑患有癌症的受试者分离的生物样品中的CCSP
‑
2蛋白。有益效果
[0031]因为本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合到 CCSP
‑
2的EGF2结构域，与特异性结合到CCSP
‑
2的常规肽相比，亲和力可显著改善，并且与抗CCSP
‑
2的常规抗体相比，特异性可更加改善。因此， CCSP
‑
2在蛋白质水平被特异性检测到，从而在未来实现准确诊断。
附图说明
[0032]图1是示出根据本专利技术的一个实施方案克隆scFv抗体的可变区的策略的示意图。
[0033]图2是示出CCSP
‑
2的抗原CCSP
‑2‑
NT、CCSP
‑2‑
CT和CCSP
‑ꢀ2‑
EGF2位点的示意图。
[0034]图3是示出CCSP
‑2‑
CT和CCSP
‑2‑
EGF2抗原的各自表达载体的示意图。
[0035]图4A和4B分别示出了通过对由第三次和第四次生物淘选产生的噬菌体(输出)的48个克隆体进行ELISA获得的噬菌体ELISA结果。
[0036]图5是根据本专利技术一个实施方案的表达载体的遗传图谱。
[0037]图6是示出由本专利技术制备的scFv的HN
‑
1的分子量的SDS
‑ꢀ
PAGE凝胶图像。
[0038]图7示出了用于确认本专利技术的scFv中HN
‑
1的每个抗原(CCSP
‑ꢀ
2)结构域的结合能力的蛋白质印迹结果。
[0039]图8是示出通过分析本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异性结合到结肠癌分泌蛋白
‑
2(CCSP
‑
2)的EGF2结构域的单克隆抗体，其包含选自如下所示的1)至4)的重链可变区和轻链可变区，或其抗原结合片段：1)包括由SEQ ID NO：1表示的CDR1区、由SEQ ID NO：2表示的CDR2区和由SEQ ID NO：3表示的CDR3区的重链可变区，以及包括由SEQ ID NO：4表示的CDR1区、由SEQ ID NO：5表示的CDR2区和由SEQ ID NO：6表示的CDR3区的轻链可变区；2)包括由SEQ ID NO：7表示的CDR1区、由SEQ ID NO：8表示的CDR2区和由SEQ ID NO：9表示的CDR3区的重链可变区，以及包括由SEQ ID NO：10表示的CDR1区、由SEQ ID NO：11表示的CDR2区和由SEQ ID NO：12表示的CDR3区的轻链可变区；3)包括由SEQ ID NO：13表示的CDR1区、由SEQ ID NO：14表示的CDR2区和由SEQ ID NO：15表示的CDR3区的重链可变区，以及包括由SEQ ID NO：16表示的CDR1区、由SEQ ID NO：17表示的CDR2区和由SEQ ID NO：18表示的CDR3区的轻链可变区；以及4)包括由SEQ ID NO：19表示的CDR1区、由SEQ ID NO：20表示的CDR2区和由SEQ ID NO：21表示的CDR3区的重链可变区，以及包括由SEQ ID NO：22表示的CDR1区、由SEQ ID NO：23表示的CDR2区和由SEQ ID NO：24表示的CDR3区的轻链可变区。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd'。...

【专利技术属性】
技术研发人员：明承在，都恩珠，姜自英，孙徯男，金孝悧，阿内乌姆，
申请(专利权)人：医帝思生物科技有限公司蔚山大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：