一种抗CLD18A2单域抗体及其抗肿瘤用途制造技术

本发明专利技术涉及生物领域，特别是涉及一种抗CLD18A2单域抗体。本发明专利技术提供一种抗CLD18A2单域抗体，所述抗CLD18A2单域抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQ ID NO.4～11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.19～26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.33～39其中之一所示的CDR3。本发明专利技术所提供的抗CLD18A2单域抗体能够与CLD18A2上存在的表位特异性结合的单域抗体，其对应的融合蛋白对CLD18A2具有良好的特异性和亲和力，且具有明显的肿瘤抑制作用。制作用。

【技术实现步骤摘要】
一种抗CLD18A2单域抗体及其抗肿瘤用途
[0001]本申请是2019年1月15日提交的、申请号为2019100339954、名称为“抗CLD18A2纳米抗体及其应用”的中国专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物领域，特别是涉及抗CLD18A2单域抗体及其应用。

技术介绍

[0003]密蛋白18(Claudin 18，CLD18)是分子量约为28kD，位于上皮和内皮的紧密连接中的跨膜蛋白，紧密连接在相邻细胞之间。正常上皮组织中，由于细胞间隙紧密导致细胞表面的密蛋白难以被接触，而肿瘤细胞的间隙却较为疏松，因此肿瘤细胞上的密蛋白成为胞外抗体及免疫疗法的潜在靶点。CLD18具有四个疏水区，其作为跨膜区形成两个胞外域，其中疏水区1和疏水区2环绕形成胞外域1，疏水区3和疏水区4环绕形成胞外域2。由于基因不同剪切，CLD18形成两种剪切体：CLD18A1和CLD18A2。CLD18A1在正常肺部表达，而CLD18A2仅在胃细胞中表达；更重要的是，CLD18A2局限在已分化的胃上皮短寿细胞中，但在胃干细胞中不存在(Niimi T,et al.Biol.2001；21(21):7380
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7390.)。这些特性显示CLD18A2是一个用于治疗胃癌和其他CLD18A2阳性肿瘤的有临床价值的治疗靶点。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗CLD18A2单域抗体，用于解决现有技术中的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种抗CLD18A2单域抗体，所述抗CLD18A2单域抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQ ID NO.4～11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.19～26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.33～39其中之一所示的CDR3。
[0006]在本专利技术一些实施方式中，所述抗CLD18A2单域抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：
[0007](1)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.33所示的CDR3；或者
[0008](2)氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.34所示的CDR3；或者
[0009](3)氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.21所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.35所示的CDR3；或者
[0010](4)氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.36所示的CDR3；或者
[0011](5)氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.23所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.37所示的CDR3；或者
[0012](6)氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.24所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.38所示的CDR3；或者
[0013](7)氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.36所示的CDR3；或者
[0014](8)氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.26所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.39所示的CDR3。
[0015]在本专利技术一些实施方式中，所述抗CLD18A2单域抗体包括框架区FR，所述框架区FR包括氨基酸序列如下所示的FR1～FR4：
[0016](1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.27所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.40所示的FR4；或者
[0017](2)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.28所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0018](3)氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.29所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0019](4)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0020](5)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0021](6)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0022](7)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4；或者
[0023](8)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.32所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4。
[0024]在本专利技术一些实施方式中，，所述抗CLD18A2单域抗体的氨基酸序列包括：
[0025]a)如SEQ ID NO.42～49其中之一所示的氨基酸序列；或
[0026]b)与SEQ ID NO.42～49其中之一具有80％以上序列相同性的氨基酸序列、且具有a)
[0027]所限定的氨基酸序列的功能。
[0028]在本专利技术一些实施方式中，所述抗CLD18A2单域抗体为人源化抗体，优选的，所述CLD18A2单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.67～90所示的。
[0029]本专利技术另一方面提供一种抗CLD18A2单域抗体的融合蛋白，包括所述的单域抗体的第一结构域，还包括用于延长体内半衰期和/或对效应细胞具有结合作用的第二结构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CLD18A2单域抗体，所述抗CLD18A2单域抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.36所示的CDR3。2.如权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CLD18A2单域抗体包括框架区FR，所述框架区FR包括氨基酸序列如下所示的FR1～FR4：氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示的FR4。3.如权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CLD18A2单域抗体的氨基酸序列包括：a)如SEQ ID NO.45所示的氨基酸序列；或b)与SEQ ID NO.45具有80％以上序列相同性的氨基酸序列、且具有a)所限定的氨基酸序列的功能。4.如权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CLD18A2单域抗体为人源化抗体，优选的，所述CLD18A2单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.70、78或86所示。5.一种抗CLD18A2单域抗体的融合蛋白，包括如权利要求1～4任一权利要求所述的单域抗体的第一结构域，还包括用于延长体内半衰期和/或对效应细胞具有结合作用的第二结构域。6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述第二结构域包括血清白蛋白片段、聚乙二醇片段、结合HSA的单域抗体中的一种或多种的组合；和/或，所述第二结构域包括免疫球蛋白Fc区，优选选自人免疫球蛋白Fc区；和/或，所述第二结构域包括对T细胞上存在的CD3具有亲和力和/或能够与T细胞上存在的CD3结合的分子。7.如权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述人免疫球蛋白Fc区中包括用于改变Fc介导的效应功能的突变，所述效应功能包括CDC活性、ADCC活性、ADCP活性中的一种或多种的组合；和/或，所述免疫球蛋白选自IgG、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgM中的一种或多种的组合，所述IgG选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型中的一种或多种的组合；和/或，所述免疫球蛋白Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO.91～95其中之一；和/或，所述第一结构域和第二结构域之间设有连接肽，所述连接肽选自由丙...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚高锋，陆亚丽，周振兴，方艺琳，朱丽娜，黎常魁，章宏塔，温晓芳，董佳里，黄岩山，
申请(专利权)人：浙江道尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：