抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用技术

本申请涉及一种新的抗CA724抗体，所述抗体能够很好地识别CA724，并具有高亲和力和特异性。所述抗体具有良好的稳定性，能够用于制备诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品，为CA724检测提供了一种新的选择。CA724检测提供了一种新的选择。CA724检测提供了一种新的选择。

【技术实现步骤摘要】
抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用


[0001]本申请属于免疫
，尤其涉及抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CA724是近几年临床常用的一个肿瘤指标，主要用于消化道肿瘤的早期筛查，属于非特异性肿瘤标志物。其本质是细胞表面黏蛋白类的高分子糖蛋白，广泛分布于上皮细胞和恶性肿瘤的细胞质内，相对分子质量为(220
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400)
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103，可被cc49和B72.3两种单克隆抗体识别。CA724是构成肿瘤细胞骨架成分的重要分子结构，分子结构中含有磷酸化的氨基酸序列，随着肿瘤细胞的异常增殖，可通过外分泌的方式释放入血液循环，正常人体血清中CA724<6U/mL，当组织发生癌变，则可迅速入血，血清检测水平急剧升高。因此，CA724又属于癌胚抗原性质肿瘤标志物。
[0003]目前，研究中所提供的有关CA724的检测方法主要是电化学发光法，检测仪器多源自罗氏Elecsys1010、2010、170和601免疫测定分析仪。目前多采用cc49和B72.3两种单克隆抗体检测CA724，后者是 CA724的特异性抗体，利用抗原抗体夹心法的原理，对CA724水平进行检测。
[0004]胃癌的检测目前没有一个特异性的肿瘤指标，需依靠病理和手术进行诊断。CA724是现有与胃癌相关性最高的一个指标。CA724在胃癌患者中血清水平远远大于胃部良性病变患者和健康人群，对胃癌有较大的诊断参考价值。CA724对胃癌诊断特异度优于其他指标，如 CA199和CEA等。CA724在卵巢癌、非小细胞肺癌患者血清中水平也呈明显升高，同时对于肝癌和结直肠癌份的分级诊断有较大的参考价值。因此，对CA724的检测有较大的临床意义。
[0005]目前国内用于检测CA724的单克隆抗体基本自外国采购，灵敏度、特异性上都存在缺陷，因此，有需要提供更多的CA724单克隆抗体。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中CA724抗体可选择性不够、灵敏度和特异性上存在缺陷的问题，本专利技术提供一方面提供了一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段具有至少一个选自SEQ ID NO：1、2、3的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQID NO：4、5、6的轻链CDR结构域。
[0007]在一个实施方案中，本专利技术的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR： SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2，和SEQ ID NO:3 所示的CDR3；所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR： SEQ ID NO:4所示的CDR1'，SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和SEQ ID NO: 6所示的CDR3'。
[0008]在一个实施方案中，本专利技术所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，
所述抗体的重链包含4个FR区，其中至少一个FR 区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：7、8、9或10所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：7、8、9或10具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同源性的序列；所述抗体的轻链包含4个FR区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：11、12、13或 14所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：11、12、13或14具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同源性的序列。
[0009]在一个实施方案中，本专利技术的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
[0010]在一个实施方案中，所述结合蛋白还包含抗体恒定区序列；优选的，所述恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、 IgD任何其中之一，恒定区的序列；优选的，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人；优选的，所述恒定区来源于小鼠。
[0011]在一个实施方案中，本专利技术的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链氨基酸序列为SEQ ID NO:19。
[0012]在一个实施方案中，本专利技术的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:20。
[0013]本专利技术另一方面提供一种分离的核酸，其编码前述任一项的抗 CA724抗体或其抗原结合片段。
[0014]本专利技术另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码前述任一项的抗体重链可变区。
[0015]本专利技术另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码前述任一项的抗体轻链可变区。
[0016]本专利技术另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 17所示的核苷酸序列。
[0017]本专利技术另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 18所示的核苷酸序列。
[0018]本专利技术另一方面提供一种载体，其包含本专利技术所述的核酸，优选地所述载体是表达载体。
[0019]在一个实施方案中，载体是表达载体，例如真核表达载体。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
[0020]本专利技术另一方面提供一种宿主细胞，其包含本专利技术所述的载体或核酸，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的酵母细胞或哺乳动物细胞。
[0021]本专利技术另一方面提供制备前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码前述任一项的抗 CA724抗体或其抗原结合片段的核酸的条件下培养前述任一项所述的宿主细胞，任选地分离所述抗体或其抗原结合片段，任选地所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗724抗体或其抗原结合片段。
[0022]本专利技术另一方面提供经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段。
[0023]本专利技术另一方面提供前述任一项抗体或其抗原结合片段与固体介质或半固体介
质偶联制得的偶联物。
[0024]本专利技术另一方面提供前述任一项所述的抗体或其抗原结合片段、经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段和前述任一项偶联物在制备用于诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品中的应用。
[0025]本专利技术另一方面提供一种用于检测CA724蛋白的试剂盒，其特征在于包含前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段或前述任一项所述的偶联物。
[0026]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种新的抗CA724抗体，所述抗体能够很好地识别CA724，并具有高亲和力和特异性。所述抗体具有良好的稳定性和批间差，能够用于制备诊断癌症的诊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。2.一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链具有如SEQ ID NO: 19所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链具有如SEQ ID NO: 20所示的氨基酸序列。3.一种分离的核酸，其编码权利要求1
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2任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段。4.一种载体，其包含权利要求3的核酸。5.一种宿主细胞，其包含权利要求3的核酸或权利要求4的载体。6.制备权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：廉倩倩，徐海伟，常立峻，简，
申请(专利权)人：苏州长光华医生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：