发酵乳杆菌CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了保藏编号为CGMCC NO.14493的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用，不仅扩大了发酵乳杆菌CQPC04的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给溃疡性结肠炎的改善带来了新的希望。

【技术实现步骤摘要】
发酵乳杆菌CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种发酵乳杆菌在制备食品或药品中的应用。
技术介绍
四川泡菜的生产过程是将新鲜的泡菜洗净，密封于坛内，在盐水中厌氧发酵浸泡的泡菜。泡菜水中含有丰富的天然乳酸菌，对泡菜风味和品质的形成起着关键作用。其使用可溶性成分(主要是糖和含氮物质)进行增殖，产生酸性物质并代谢出风味成分，使泡菜产生独特的酸脆口味。泡菜水中含有的乳酸菌主要包括发酵乳杆菌、L.短杆菌、干酪乳杆菌、发酵酵母菌、嗜酸乳杆菌等。乳酸菌种类的差异可能是由于地域、气候和生产工艺习惯等因素造成的。某些乳酸菌也被用作益生菌，对人体健康有多种益处，包括维持肠道菌群的微生态平衡、加强机体免疫功能、预防和抑制肿瘤发生、降低胆固醇、延缓机体衰老等。为了更好的利用这些微生物资源，应开展更广泛的分离和鉴定工作，积累丰富的菌种资源，开发出丰富的工业用益生菌种类。溃疡性结肠炎是一种炎症性肠病，主要表现为腹痛、腹泻和血便，其发病机制至今尚未完全阐明。研究发现，溃疡性结肠炎患者肠黏膜上皮细胞调亡增加、肠上皮细胞间紧密连接缺损、肠上皮黏液层变薄或缺失、肠道菌群失调或易位、固有层肠黏膜免疫系统异常激活，从而导致肠道上皮黏膜通透性增加、屏障功能受损。
技术实现思路
本专利技术的目的在于考察从泡菜水中分离得到的乳酸菌对溃疡性结肠炎的作用效果，以开发功能保健制品。经研究，本专利技术提供如下技术方案：保藏编号为CGMCCNO.14493的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用。优选的，所述食品为发酵食品。优选的，所述发酵食品为乳酸菌奶饮料、发酵乳、乳粉或乳粉胶囊。发酵乳杆菌CQPC04是从重庆农家自然发酵泡菜水中分离得到，于2017年8月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNO.14493。本专利技术的发酵乳杆菌CQPC04具有较强的抗胃酸能力，经pH3.0人工胃液处理3h后的存活率达到84.14％；同时该菌具有很好的耐胆盐能力，在0.30％胆盐中的生长效率达到无胆盐培养的66.38％。葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠模型实验结果显示，发酵乳杆菌CQPC04能够显著增加小鼠结肠长度，对结肠粘膜具有较好的保护作用，而且随着浓度的增加，保护效果越好；能够增加小鼠血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力，减少血清中丙二醛(MDA)的含量，从而减少氧自由基对结肠炎小鼠的损伤作用；能够显著降低小鼠血清中促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12的水平，显著升高抑炎因子IL-10的水平；能够减少小鼠结肠组织中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、NFKB-p65、COX-2和iNOS的mRNA表达，增加IL-10和IKB-α的mRNA表达。由此可见，发酵乳杆菌CQPC04可以有效地改善溃疡性结肠炎。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了发酵乳杆菌CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用，不仅扩大了发酵乳杆菌CQPC04的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给溃疡性结肠炎的改善带来了新的希望。附图说明图1为发酵乳杆菌CQPC04的菌落形态。图2为发酵乳杆菌CQPC04的革兰氏染色结果。图3为发酵乳杆菌CQPC04的16SrDNAPCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中M为DNA分子量标准，0为阴性对照，1为发酵乳杆菌CQPC04。图4为小鼠的结肠长度。图5为小鼠结肠组织形态学观察。图6为小鼠血清中MDA、T-SOD和CAT的水平。图7为小鼠血清中炎症相关细胞因子的水平。图8为小鼠结肠组织中TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-10的mRNA表达水平。图9为小鼠结肠组织中NFKB-p65、IKB-α、COX-2和iNOS的mRNA表达水平。图4、图6至图9中，#与##表示与正常组比较存在显著(p<0.05)和极显著(p<0.01)差异；*与**分别表示与模型组比较存在显著(p<0.05)和极显著(p<0.01)差异。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。一、发酵乳杆菌CQPC04的分离与鉴定1、实验材料采自重庆市南岸区农家自然发酵泡菜水6份，分别吸取40mL泡菜水放入无菌离心管中，置于食品采样箱内，放于实验室4℃冰箱保存备用。2、乳酸菌的分离纯化分别取1mL泡菜水样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6，然后分别取10-4、10-5、10-63个梯度的稀释液100μL进行平板涂布，37℃培养24-48h，观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离，如此重复2至3次，直至得到形态一致的纯的单菌落。编号为CQPC04的菌株菌落形态如图1所示，菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑。3、乳酸菌的初步鉴定挑取平板上的纯菌落接种于5mLMRS液体培养基中，37℃培养24h。取上述含菌培养基1mL于无菌离心管中，4000r/min离心10min后弃去上层培养基，菌体沉淀重悬于无菌生理盐水并进行革兰氏染色镜检，革兰氏染色镜检为阳性的初步鉴定为乳酸菌。编号为CQPC04的菌株革兰氏染色呈现阳性，在100倍油镜下，菌株细胞形态如图2所示，细胞形态有长杆、短杆，且不存在出芽生殖。4、乳酸菌DNA提取将已纯化的疑似目标菌株接种于MRS肉汤中，37℃培养18-24h后，采用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。提取的DNA放于-20℃冰柜保藏备用。5、基因组DNAPCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测取提取的DNA，PCR扩增16SrDNA，其中上游引物27F(5'－AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3'，SEQIDNo.1)1μL、下游引物1495R(5'－CTACGGCTACCTTGTTACGA－3'，SEQIDNo.2)1μL，2×TaqplusBuffer12.5μL、模板DNA1μL，用无菌ddH2O将体系补足至25μL。以无菌超纯水替代模板DNA作为阴性对照。扩增条件为：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共29个循环；最后72℃延伸5min。然后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖浓度为1.5％，电泳条件为110V，45min。编号为CQPC04的菌株16SrDNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果如图3所示，阴性对照组的泳道无条带，表明PCR扩增过程中未受到污染；编号为CQPC04的菌株的泳道有一条长度约为1500bp的条带，符合预期扩增片段的长度。将编号为CQPC04的菌株的16SrDNA扩增产物委托北京擎科生物技术有限公司进行测序，测得序列如SEQIDNo.3所示。使用NCBI中的BLAST(BasicLocalAlignmentSearchTool)程序对测得序列进行同源性比对分析，结果显示，编号为CQPC04的菌株为乳酸菌中的发酵乳杆菌(La本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.保藏编号为CGMCC NO.14493的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用。

【技术特征摘要】
1.保藏编号为CGMCCNO.14493的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CQPC04在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用。2.如权利要求1所述的发酵乳杆菌CQPC04在制备改善溃疡...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，杜木英，周先容，
申请(专利权)人：重庆第二师范学院，
类型：发明
国别省市：重庆,50