一种改善记忆的五肽及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种改善记忆的五肽及其用途，该五肽的氨基酸序列为Pro‑Ala‑Try‑Cys‑Ser。本发明专利技术的改善记忆肽采用固相化学合成方法制得，对乙酰胆碱酯酶具有较好的抑制活性，并且在痴呆鼠模型中具有明显的记忆改善效果，既能够单独用于制备改善记忆药物或改善记忆保健品，也能够与现有技术的改善记忆相关物质复配使用，以便取得更好的协同改善记忆的效果。

A Pentapeptide for Improving Memory and Its Application

The invention discloses a pentapeptide for improving memory and its use. The amino acid sequence of the pentapeptide is Pro Ala Try Cys Ser. The improved memory peptide of the invention is prepared by solid-phase chemical synthesis method and has good inhibitory activity to acetylcholinesterase, and has obvious memory improvement effect in dementia rat model. The improved memory peptide can be used not only to prepare memory-improving drugs or memory-improving health products, but also to compound with memory-improving related substances of the existing technology, so as to achieve better synergistic modification. The effect of good memory.

【技术实现步骤摘要】
一种改善记忆的五肽及其用途
本专利技术属于保健品领域，具体涉及一种具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性、体内改善痴呆鼠记忆能力的五肽及其应用。
技术介绍
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是维持胆碱能系统功能的一个关键酶。它能够将乙酰胆碱水解为胆碱与乙酸。作为神经递质的乙酰胆碱如果被乙酰胆碱酯酶过度降解，会使其无法与突触后膜上的受体正常结合，引发神经信号在突触间传递出现紊乱，最终导致记忆力下降。由此可见，适度的乙酰胆碱酯酶可保证胆碱和乙酰辅酶A的正常循环，使得乙酰胆碱在神经系统中保持最佳水平，从而表现出较好的记忆力。然而随着年龄的增长，大脑中部分神经元难以再生，胆碱含量降低，直接导致乙酰胆碱合成减少；与此同时，乙酰胆碱酯酶进一步加速乙酰胆碱的降解进程，致使中枢神经系统中乙酰胆碱含量快速减少，使得神经冲动功能下降及信号传导不足，最终导致记忆障碍。临床研究表明，有效抑制乙酰胆碱酯酶活性可维持胆碱能系统信息传递，改善记忆损伤状态。塔克林(tacrine)、多奈哌齐(donepezil)、利斯的明(rivastigmine)和加兰他敏(galantamine)等乙酰胆碱酯酶抑制剂已作为临床用药用于老年痴呆等记忆衰退等疾病的治疗。然而，这些药物难以从根本上消除疾病，且具有一定的毒副作用，例如塔克林具有较强的肝毒性，已被美国FDA勒令禁止使用。因此，目前急需探索安全无副作用、改善记忆功效显著的天然活性物质，以此来取代传统药物。根据乙酰胆碱酯酶X-ray单晶衍射结果来看，乙酰胆碱酯酶的活性位点是由14个高度复杂的芳香残基组成的一个狭长口袋。该位点中间窄，两端开放。在该狭长口袋的底部有一个重要的子位点，催化位点，包括三个残基，Ser203，His447，Glu202，该位点与乙酰胆碱的催化乙酰化有关。乙酰胆碱酯酶的外周阴离子位点(peripheralanionicsite，PAS)位于活性位点之上的位置，接近峡谷口，以Trp286为活性中心，能够通过静电场吸引底物分子。疏水性位点包括一些芳香族残基，例如Trp86和Phe338，他们位于峡谷的中间，在芳香族或者是铵盐抑制剂的结合中起着重要的作用。东莨菪碱作为毒蕈碱受体拮抗剂，会影响人体和动物的短时程记忆和学习获取过程。因此，东莨菪碱多用于构建老年痴呆症病理模型。有研究表明，东莨菪碱会导致小鼠大脑皮层和海马区AChE活性及丙二醛(MDA)含量升高，进而导致记忆损伤。有研究表明，知母皂苷B-II能够通过抑制小鼠大脑皮层和海马区中乙酰胆碱酯酶活性，提升脑内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和超氧化物酶(SOD)活性以及降低MDA含量等改善小鼠记忆损伤。由此可知，东莨菪碱诱导小鼠痴呆模型可用于评价通过抗氧化，抑制AChE活性以及神经细胞保护等作用来实现改善小鼠记忆损伤的活性物质的相关功效。因此，可采用该模型评价生物活性多肽对痴呆鼠的记忆改善作用。改善老年痴呆症记忆力下降的药物常见的有：①作用于胆碱能系统的AChE抑制剂药物：代表药物有利斯的明(Rivastigmine)、他克林(Tacrine)、多奈哌齐(Donepezil)和加兰他敏(Galanthamine)。②β淀粉样蛋白合成抑制剂药物：代表药物有氟布洛芬(Flurbiprofen)、抗聚结剂(Tramiprosate)等。③Tau蛋白聚集抑制剂TRx0014。④兴奋性氨基酸谷氨酸调控相关药物美金刚(Memantine)。⑤神经保护调控剂物脑活素(Cerebrolysin)、二十二碳六烯酸(DHA)、异黄酮素(Novasoy)等。现报道药物中，除中草药提取物及DHA外，仅脑活素是天然活性物质。脑活素其具有制备工艺简单，无毒副作用等特点，它是由猪脑水解得来的水解产物，作为临床用药用于治疗脑损伤等神经退化类疾病的药物，具有神经营养活性。然而，人们对于脑活素中起作用的具体多肽序列的研究并不深入，且该药物采用注射方式进入体内，无法日常补充。中国专利申请CN107325154A公开了一种具有改善记忆功效的多肽，其氨基酸序列为Tyr-Ser-Gly-Val-Cys。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供一种新的、改善记忆的五肽。本专利技术的另一目的在于提供上述五肽的用途。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种五肽，其氨基酸序列为Pro-Ala-Try-Cys-Ser。上述的五肽PAYCS可通过现有技术固相化学合成方法获得。本专利技术的五肽PAYCS针对AchE抑制和痴呆鼠记忆提升两个靶标均具有活性，从而表现出具有改善记忆的功能，可以用于制备改善记忆的药物和保健品。图1是本专利技术的五肽PAYCS与乙酰胆碱酯酶分子的对接图，该图采用MOEDock计算机软件模拟多肽与乙酰胆碱酯酶晶体结构之间的分子对接情况并预测他们之间的结合亲和力。乙酰胆碱酯酶蛋白3D结构来源于RCSB蛋白数据库(PDBcode:4M0F,http://www.rcsb.org/pdb)。由图1可知，PAYCS的C-末端(丝氨酸一端)羧基作为一种氢键供体，与乙酰胆碱酯酶侧链的Asn87形成一个氢键。PAYCS吡咯环上的氮原子作为氢键供体，与乙酰胆碱酯酶骨架上的Ser293及Arg296形成氢键。另一方面，PAYCS的氮端(脯氨酸一端)吡咯杂环与乙酰胆碱酯酶侧链上的Trp286形成π-π堆叠；同时，PAYCS中酪氨酸中的苯环与乙酰胆碱酯酶侧脸上的Phe338形成π-π堆叠。由此可知，PAYCS与乙酰胆碱酯酶之间形成了氢键与π-π堆叠，从而增强了其与乙酰胆碱酯酶的结合能力。所述的药物和保健品还含有其他具有改善记忆功效的活性成分和/或可接受的辅料；所述的药物和保健品可以是现有技术的各种剂型，比如口服液、胶囊剂、片剂、粉剂或颗粒剂。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术的改善记忆肽采用固相化学合成方法制得，对乙酰胆碱酯酶具有较好的抑制活性，并且在痴呆鼠模型中具有明显的记忆改善效果，既能够单独用于制备改善记忆药物或改善记忆保健品，也能够与现有技术的改善记忆相关物质复配使用，以便取得更好的协同改善记忆的效果。附图说明图1是PAYCS与乙酰胆碱酯酶分子对接图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1：五肽PAYCS对乙酰胆碱酯酶的抑制活性乙酰胆碱酯酶抑制活性的测定方法如下：将30μL乙酰胆碱(7.5mM)、125μLDTNB(3mM)、40μLHEPES(pH8.0,50mM，含有0.1％牛血清蛋白)以及50μL样品分别加入96孔板中，混匀后在37℃下孵育15min。孵育结束后加入30μLAChE(0.055U/mL)开始测定。测定过程在酶标仪中进行。测定波长为412nm，测定时间为15min。样品对乙酰胆碱酯酶抑制活性的计算公式为：乙酰胆碱酯酶抑制活性(％)＝[1-(A样品-A样品空白)/(A对照-A对照空白)]×100％其中，A样品为样品组吸光值，A样品空白为不加酶样品组，A对照为不加酶不加样品组，A对照空白为加酶不加样品组。经检测得知，2.5mM的PAYCS的乙酰胆碱酯酶抑制活性为17.47±1.34％。检测结果表明，该五肽PAYCS具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性。实施例2：五肽PAYCS对东莨菪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种五肽，其特征在于：氨基酸序列为Pro‑Ala‑Try‑Cys‑Ser。

【技术特征摘要】
1.一种五肽，其特征在于：氨基酸序列为Pro-Ala-Try-Cys-Ser。2.权利要求2所述的五肽在制备改善记忆的药物和保健品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，赵甜甜，苏国万，赵翊君，
申请(专利权)人：广东华肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44