酪蛋白抗炎小分子肽及其制备方法和在改善睡眠中的应用技术

本发明专利技术公开酪蛋白抗炎小分子肽及其制备方法和在改善睡眠中的应用，该酪蛋白小分子肽N端酪氨酸Tyr的特征肽段占总肽段丰度的15.83％～21.75％，分子量＜1000Da的组分占79％以上。所述酪蛋白小分子肽的制备方法包括以下步骤：将酪蛋白与蒸馏水混合后，加入蛋白酶酶解，然后灭酶，离心，取上清液，得到含有富含N

【技术实现步骤摘要】
酪蛋白抗炎小分子肽及其制备方法和在改善睡眠中的应用


[0001]本专利技术涉及用于预防或辅助治疗神经炎症及睡眠问题的乳制品及食源性活性肽药物开发
，具体涉及酪蛋白抗炎小分子肽及其制备方法和在改善睡眠中的应用。

技术介绍

[0002]酪蛋白是牛奶中含量最多的一种蛋白，高达80％，其资源丰富、来源广泛、营养价值高，对产品开发极具优势。酪蛋白氨基酸组成特殊，其中含有较多的脯氨酸，因其良好的生物特性，已开发多种生物活性肽，如降血压、抗氧化肽以及降血糖活性肽等。炎症是机体对外界刺激的一种防御反应，但过度的炎症反应会导致一些与细胞因子大量产生及组织破坏等相关的免疫系统疾病。并且，神经炎症可引发多种神经退行性疾病，包括阿尔茨海默症(AD)，帕金森病(PD)和多发性硬化症等。已有研究表明慢性压力应激会导致小鼠中神经炎症因子显著上调，包括一氧化氮(NO)和促炎细胞因子，例如白介素
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1β(IL
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1β)，白介素
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6(IL
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6)和肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)以及其他一些具有潜在神经毒性的化合物。这些因子在中枢神经系统中的过度产生会触发炎症反应，并最终导致神经变性。重要的是，持续进行性压力带来的神经炎症会加速脑组织损伤和行为病理学的发展，引发焦虑、失眠等问题。
[0003]现有技术公开了一种含有具有抗炎性质的肽组分的营养组合物及其用途，该专利指出对牛乳采用蛋白酶N酶解后得到一系列摩尔质量分布在500
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2000Da的酪蛋白肽具有抗炎活性。但其只关注了有效肽段的结构特征，并从肽的相对丰度即含量的差异层面进行研究。然而近年来，人们逐步认识到蛋白质水解物的生物活性不仅与鉴定肽的强活性有关，而且与它们的含量息息相关。由于受到蛋白质本身结构，氨基酸组成以及酶解条件的限制，在整个酶解物中靠提高某条或某几条生物活性肽的含量，很难从根本上提高整个酶解物的生物活性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述不足，提出了酪蛋白抗炎小分子肽及其制备方法和在改善睡眠中的应用。
[0005]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0006]一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽，所述具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽显著降低小鼠炎症因子水平达到51.37％～75.75％。
[0007]优选的，所述具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽含N端酪氨酸Tyr的特征肽段占总肽段丰度的15.83％～21.75％，分子量<1000Da的肽组分占79.45％～87.62％；所述含N端酪氨酸Tyr特征肽段是特指在序列的氮末端为酪氨酸的多肽。
[0008]以上任一项所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽的制备方法，包括如下步骤：
[0009](1)加入酪蛋白和水，搅拌溶解，调节pH，制得酪蛋白分散液；
[0010](2)向步骤(1)的酪蛋白分散液加入半胱氨酸蛋白酶和外肽酶，协同酶解，灭酶，并
冷却；
[0011](3)加入丝氨酸蛋白酶酶解，灭酶，并冷却；
[0012](4)离心，取上清液，为具有抗炎功效、富含N末端Tyr特征肽段的酪蛋白小分子肽溶液。
[0013]优选的，步骤(1)中，所述酪蛋白的来源，包括但不限于牛乳、水牛乳、山羊乳或绵羊乳中的一种以上；所述酪蛋白和水按照的质量比为1:6～1:15；所述酪蛋白分散液的pH为7.0～8.0。
[0014]优选的，步骤(2)中，所述半胱氨酸蛋白酶为木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶中的一种以上。
[0015]更优选的，所述半胱氨酸蛋白酶来源于番木瓜乳汁或菠萝果实中。
[0016]优选的，所述的外肽酶为风味蛋白酶或氨肽酶A中的一种以上。
[0017]更优选的，所述外肽酶来源于米曲霉或黑曲霉。
[0018]优选的，步骤(2)中，所述协同酶解的温度是40
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55℃；所述协同酶解的时间是1
‑
6h。
[0019]优选的，步骤(3)中，所述丝氨酸蛋白酶为碱性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或羧肽酶中的一种以上。
[0020]更优选的，所述碱性蛋白酶来源于芽孢杆菌或曲霉。
[0021]更优选的，所述胰凝乳蛋白酶来源于牛或猪的胰脏。
[0022]更优选的，所述羧肽酶的来源包括但不限于牛或猪的胰脏、酵母或曲霉。
[0023]优选的，所述酶解的温度是40
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50℃；所述酶解的时间是1
‑
6h。
[0024]优选的，步骤(2)所述半胱氨酸蛋白酶和外肽酶及步骤(3)所述丝氨酸蛋白酶的总蛋白酶添加量是酪蛋白质量的0.5％～2.0％；半胱氨酸蛋白酶、外肽酶和丝氨酸蛋白酶的质量比为(0.5～1.0):(0.5～1.0):(1.0～2.0)。
[0025]优选的，步骤(2)所述灭酶、步骤(3)所述灭酶均是将酶解液升温至85～100℃保温15～30min。
[0026]优选的，步骤(4)中，所述离心是8000～10000rpm、4℃离心15～20min。
[0027]优选的，步骤(4)所述上清液浓缩后，进行喷雾干燥，得到富含N端酪氨酸Tyr特征肽段的酪蛋白小分子肽粉。
[0028]以上任一项所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽在制备改善睡眠的药物和保健品中的应用。
[0029]优选的，所述酪蛋白小分子肽可延长睡眠时间1.7倍以上。
[0030]优选的，所述的改善睡眠是指缓解由焦虑、压力引发的脑部神经炎症从而改善失眠问题。
[0031]优选的，所述药物和保健品的形式是粉末冲剂、功能饮料、压片糖果、凝胶软糖、口服液中的一种以上。
[0032]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0033]本专利技术具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽对慢性压力应激诱导的小鼠神经炎症具有良好的改善作用，表明具有潜在的缓解情绪、失眠问题的功效，可用于制备改善睡眠类药物或保健品，也可与其他保健品或食品添加剂复配使用。
[0034]本专利技术采用特定的半胱氨酸蛋白酶协同外肽酶与丝氨酸蛋白酶分步水解并控制含N
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Tyr
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特征肽段的定向释放，避免过度酶解对特征肽段的破坏，从而显著提高酪蛋白肽中目标肽段含量，同时又能提高<1000Da小分子肽组分的含量。
[0035]本专利技术所制备的酪蛋白小分子肽其中含N
‑
Tyr
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特征肽段含量高，可达15.83％～21.75％，且分子量小，<1000Da组分占79％以上，能够显著降低炎症因子水平，同时显著改善睡眠。
附图说明
[0036]图1为实施例和对比例所得酪蛋白小分子肽对慢性压力应激诱导的炎症小鼠中TNF
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α因子释放量的影响图。
[0037]图2为实施例和对比例所得酪蛋白小分子肽对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽，其特征在于，所述具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽显著降低小鼠炎症因子水平达到51.37％～75.75％。2.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽，其特征在于，所述具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽含N端酪氨酸Tyr的特征肽段占总肽段丰度的15.83％～21.75％，分子量<1000Da的肽组分占79.45％～87.62％；所述含N端酪氨酸Tyr特征肽段是特指在序列的氮末端为酪氨酸的多肽。3.权利要求1
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2任一项所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)加入酪蛋白和水，搅拌溶解，调节pH，制得酪蛋白分散液；(2)向步骤(1)的酪蛋白分散液加入半胱氨酸蛋白酶和外肽酶，协同酶解，灭酶，并冷却；(3)加入丝氨酸蛋白酶酶解，灭酶，并冷却；(4)离心，取上清液，为具有抗炎功效、富含N末端Tyr特征肽段的酪蛋白小分子肽溶液。4.根据权利要求3所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酪蛋白的来源，包括但不限于牛乳、水牛乳、山羊乳或绵羊乳中的一种；所述酪蛋白和水的质量比为1:6～1:15；所述酪蛋白分散液的pH为7.0～8.0。5.根据权利要求3所述的一种具有抗炎功效的酪蛋白小分子肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述半胱氨酸蛋白酶为木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶中的一种；所述外肽酶为风味蛋白酶或氨肽酶A中的一种；所述协同酶解的温度是40
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5...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，钱兢菁，郑淋，赵翊君，朱启源，
申请(专利权)人：广东华肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：