主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，本发明专利技术公开了一种主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及方法，所述的引物探针的序列包括：野生探针P+1序列如SEQ ID NO.1所示；突变探针P‑1序列如SEQ ID NO.2所示；上游引物F1序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.4所示；或包括：野生探针P+2序列如SEQ ID NO.5所示；突变探针P‑2序列如SEQ ID NO.6所示；上游引物F2序列如SEQ ID NO.7所示；下游引物R2序列如SEQ ID NO.8所示；或包括：野生探针P+3序列如SEQ ID NO.9所示；突变探针P‑3序列如SEQ ID NO.10所示；上游引物F3序列如SEQ ID NO.11所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.12所示。本发明专利技术的引物探针可以精准地检测主动脉基因位点的突变。

【技术实现步骤摘要】
主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及方法。
技术介绍
本专利技术对于
技术介绍
的描述属于与本专利技术相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本专利技术的内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本专利技术在首次提出申请的申请日的现有技术。主动脉疾病主要包括主动脉瘤及急性主动脉综合征(AcuteAorticSyndrome，AAS)。主动脉瘤是指主动脉病理性的扩张，超过正常血管直径的50％。急性主动脉综合征包括主动脉壁内血肿(intramuralhemorrhageandhematoma，IMH)、主动脉夹层(aorticdissection，AD)及主动脉穿透性溃疡(penetratingulcer，PAU)。三者临床表现均为胸痛等症状，均以动脉中层破坏为特征。主动脉疾病的发病机理尚不清楚，近年来，分子生物学技术有了长足的发展，人们开始从基因及蛋白质水平探索主动脉壁疾病的病因，然而对于主动脉基因突变的检测尚无有效的手段。
技术实现思路
本专利技术的实施例的目的是提供一种主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及制备方法，本专利技术的引物探针和试剂盒可以有效检测主动脉基因突变。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的：第一方面，本专利技术实施例提供了一种主动脉基因突变检测用引物探针，所述的引物探针的序列包括：野生探针P+1序列如SEQIDNO.1所示；突变探针P-1序列如SEQIDNO.2所示；上游引物F1序列如SEQIDNO.3所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.4所示；或包括：野生探针P+2序列如SEQIDNO.5所示；突变探针P-2序列如SEQIDNO.6所示；上游引物F2序列如SEQIDNO.7所示；下游引物R2序列如SEQIDNO.8所示；或包括：野生探针P+3序列如SEQIDNO.9所示；突变探针P-3序列如SEQIDNO.10所示；上游引物F3序列如SEQIDNO.11所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.12所示。第二方面，本专利技术实施例提供一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，包括如下步骤：(1)配反应液：所述的反应液包括：所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；(2)分装，扩增；(3)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。进一步的，一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，包括如下步骤：(1)配反应液：2xBuffer：12.5ul；上游引物：4ul；下游引物：4ul；野生探针：2ul；突变探针：2ul；Taq酶：0.5ul；H2O：4ul；DNA模板：5ul；所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；(2)分装，扩增：将反应液按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中后加5μlDNA模板进行扩增；扩增条件：37℃3min→95℃3min→(95℃10s→59℃40s)35cycles；(4)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。第三方面，本专利技术实施例提供了一种主动脉基因突变检测用试剂盒，包括上述的引物探针。第四方面，本专利技术实施例提供的一种主动脉基因突变检测用试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)引物探针稀释(2)配制反应液：所述的反应液包括上述的引物探针；(3)分装、组装：将配制好的反应液、灭菌水、质粒按照分别装入冷冻管中：将所述的冷冻管标记后组装入试剂盒。进一步的，主动脉基因突变检测用试剂盒的制备方法包括如下步骤：(1)引物探针稀释(2)配制反应液：按照配方将原料依次混合后，放在摇床摇1h得到反应液；所述的配方为：2xBuffer：12.5ul；上游引物：1.0ul；上游引物：1.0ul；野生探针：0.3ul；突变探针：0.5ul；DEPC水：4.7ul；(3)分装、组装：将配制好的反应液、灭菌水、质粒按照分别装入冷冻管中：将所述的冷冻管标记后组装入试剂盒。第五方面，本专利技术实施例提供了一种非疾病诊断用主动脉基因突变检测方法，其特征在于，采用上述的引物探针进行检测。与现有技术相比，本专利技术借由上述方案至少具备如下有益效果：通过本专利技术申请提供的引物探针和试剂盒可以有效检测主动脉基因的突变，为主动脉疾病的研究奠定了基础。附图说明图1为本专利技术申请中野生型样本扩增结果曲线图；图2：突变型样本扩增结果曲线图；图3：杂合型样本扩增结果曲线图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进行进一步的详细介绍，应当理解，附图和实施例是为了本领域技术人员更容易理解本专利技术的技术方案，而不能作为本专利技术保护范围的限定。在下述介绍中，术语“第一”、“第二”仅为用于描述的目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。下述介绍提供了本专利技术的多个实施例，不同实施例之间可以替换或者合并组合，因此本专利技术也可认为包含所记载的相同和/或不同实施例的所有可能组合。因而，如果一个实施例包含特征A、B、C，另一个实施例包含特征B、D，那么本专利技术也应视为包括含有A、B、C、D的一个或多个所有其他可能的组合的实施例，尽管该实施例可能并未在以下内容中有明确的文字记载。本专利技术实施例提供了一种主动脉基因突变检测用引物探针，所述的引物探针的序列包括：野生探针P+1序列如SEQIDNO.1所示；突变探针P-1序列如SEQIDNO.2所示；上游引物F1序列如SEQIDNO.3所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.4所示；本专利技术的另一些实施例提供的引物探针为：野生探针P+2序列如SEQIDNO.5所示；突变探针P-2序列如SEQIDNO.6所示；上游引物F2序列如SEQIDNO.7所示；下游引物R2序列如SEQIDNO.8所示；本专利技术的另一些实施例提供的引物探针为：野生探针P+3序列如SEQIDNO.9所示；突变探针P-3序列如SEQIDNO.10所示；上游引物F3序列如SEQIDNO.11所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.12所示。本专利技术实施例提供一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，包括如下步骤：(1)配反应液：所述的反应液包括：所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；(2)分装，扩增；(3)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。优选的，一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，包括如下步骤：(1)配反应液：2xBuffer：12.5ul；上游引物：4ul；下游引物：4ul；野生探针：2ul；突变探本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种主动脉基因突变检测用引物探针，其特征在于，所述的引物探针的序列包括：野生探针P+1序列如SEQ ID NO.1所示；突变探针P‑1序列如SEQ ID NO.2所示；上游引物F1序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.4所示；或包括：野生探针P+2序列如SEQ ID NO.5所示；突变探针P‑2序列如SEQ ID NO.6所示；上游引物F2序列如SEQ ID NO.7所示；下游引物R2序列如SEQ ID NO.8所示；或包括：野生探针P+3序列如SEQ ID NO.9所示；突变探针P‑3序列如SEQ ID NO.10所示；上游引物F3序列如SEQ ID NO.11所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.12所示。

【技术特征摘要】
1.一种主动脉基因突变检测用引物探针，其特征在于，所述的引物探针的序列包括：野生探针P+1序列如SEQIDNO.1所示；突变探针P-1序列如SEQIDNO.2所示；上游引物F1序列如SEQIDNO.3所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.4所示；或包括：野生探针P+2序列如SEQIDNO.5所示；突变探针P-2序列如SEQIDNO.6所示；上游引物F2序列如SEQIDNO.7所示；下游引物R2序列如SEQIDNO.8所示；或包括：野生探针P+3序列如SEQIDNO.9所示；突变探针P-3序列如SEQIDNO.10所示；上游引物F3序列如SEQIDNO.11所示；下游引物R1序列如SEQIDNO.12所示。2.一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配反应液：所述的反应液包括：所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；(2)分装，扩增；(3)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。3.根据权利要求2所述的主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配反应液：2xBuffer：12.5ul；上游引物：4ul；下游引物：4ul；野生探针：2ul；突变探针：2ul；Taq酶：0.5ul；H2O：4ul；DNA模板：5ul；所述的野生探针为权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：中绿益佳北京健康管理有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11