一种雪胆甲素和乙素的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种雪胆甲素和乙素的测定方法，包括①样品提取和②采用UPLC‑MS/MS进行测定步骤。本发明专利技术的测定方法能够有效提取雪胆中的雪胆甲素和乙素，并且首次实现甲素和乙素含量的测定。方法快速、准确，灵敏度高，重现性好。

【技术实现步骤摘要】
一种雪胆甲素和乙素的测定方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种雪胆甲素和乙素的测定方法。
技术介绍
雪胆甲素和乙素是雪胆属植物的主要成分，为葫芦烷型三萜。属于葫芦科，其块根性寒、味苦，具有清热解毒、抗菌消炎的功效，广泛用于治疗肝炎、菌痢、冠心病、气管炎、慢性子宫颈炎、肿瘤等疾病。雪胆甲素性寒，味苦，具有清热解毒、抗菌消炎、消肿止痛的功能。临床上，雪胆甲素和乙素的混合物适用于菌痢、肠炎、支气管炎、急性扁桃体炎等症的治疗。由于雪胆甲素和乙素只有较弱的紫外吸收，难以使用普通的高效液相法对其定量分析。雪胆甲素和乙素的结构式如说明书附图的图1和图2所示。目前，尚无有效的雪胆甲素和乙素含量测定方法。准确测定雪胆甲素和乙素的含量，对于雪胆的质量控制、应用研究具有指导意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种雪胆中甲素和乙素含量的测定方法。该方法首次利用超高压液相色谱-质谱联用仪，通过优化质谱条件和流动相，实现雪胆植物中甲素和乙素的提取和快速检出。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的。一种雪胆甲素和乙素的测定方法，包括如下步骤：①样品提取：将雪胆植物粉末用甲醇溶液超声提取，离心分离得上层清液；超声提取三次，合并上层清液，以色谱甲醇定溶，以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品；②测定：采用UPLC-MS/MS进行测定，仪器条件如下：液相色谱条件为，色谱柱：C18柱(1.7μm，2.1mm×100mm)；流速：0.2～0.3mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～4min，60wt％甲醇溶液；4～5min，100wt％甲醇；5min，60wt％甲醇溶液；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：110℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms。优选地，步骤②的质谱分析仪器为电喷雾质谱ESIMS。优选地，雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示。本专利技术的有益效果：本专利技术的测定方法能够有效提取雪胆植物中的雪胆甲素和乙素，首次利用超高压液相色谱-质谱联用仪，通过优化质谱条件和流动相，实现雪胆植物中甲素和乙素的提取和快速检出，方法快速、准确，灵敏度高，重现性好。附图说明图1为雪胆甲素的结构式；图2为雪胆乙素的结构式；图3为本专利技术雪胆甲素标准品超高液相质谱图；图4为本专利技术雪胆乙素标准品超高液相质谱图。图5为本专利技术实施例1雪胆甲素测定的超高液相质谱图；图6为本专利技术实施例1雪胆乙素测定的超高液相质谱图。具体实施方式本专利技术以下将结合实施例作进一步描述，但并不限制本专利技术：实施例1①样品提取：将峨眉山雪胆植物粉末0.5g用15mL甲醇溶液在700KW下超声提取30min，以4000转/分离心分离得上层清液；超声提取三次，合并上层清液至50mL的容量瓶中，以色谱甲醇定溶，以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品；②测定：采用UPLC-MS/MS法进行测定，仪器条件如下：液相色谱条件为，色谱柱：C18柱(1.7μm，2.1mm×100mm)；流速：0.2～0.3mL/min；柱温：25～35℃；进样量：2μL；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～4min，60wt％甲醇溶液；4～5min，100wt％甲醇；5min，60wt％甲醇溶液；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：110℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms；质谱分析仪器为电喷雾质谱ESIMS；雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示；测定结果如图5和图6所示；干燥的峨眉山雪胆中甲素和乙素的含量分别是57.05mg/g和92.54mg/g。实施例2①样品提取：将罗锅底植物粉末0.5g用15mL甲醇溶液在700KW下超声提取30min，以4000转/分离心分离得上层清液；超声提取三次，合并上层清液至50mL的容量瓶中，以色谱甲醇定溶，以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品；②测定：采用UPLC-MS/MS法进行测定，仪器条件如下：液相色谱条件为，色谱柱：C18柱(1.7μm，2.1mm×100mm)；流速：0.2～0.3mL/min；柱温：25～35℃；进样量：3μL；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～4min，60wt％甲醇溶液；4～5min，100wt％甲醇；5min，60wt％甲醇溶液；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：110℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms；质谱分析仪器为电喷雾质谱ESIMS；雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示；测定结果如图5和图6所示；干燥的峨眉山雪胆中甲素和乙素的含量分别是65.70mg/g和73.21mg/g。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雪胆甲素和乙素的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：①样品提取：将雪胆植物粉末用甲醇溶液超声提取，离心分离得上层清液；超声提取三次，合并上层清液，以色谱甲醇定溶，以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品；②测定：采用UPLC‑MS/MS进行测定，仪器条件如下：液相色谱条件为，色谱柱：C18柱(1.7μm，2.1mm×100mm)；流速：0.2～0.3mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～4min，60wt％甲醇溶液；4～5min，100wt％甲醇；5min，60wt％甲醇溶液；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：110℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms。

【技术特征摘要】
1.一种雪胆甲素和乙素的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：①样品提取：将雪胆植物粉末用甲醇溶液超声提取，离心分离得上层清液；超声提取三次，合并上层清液，以色谱甲醇定溶，以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品；②测定：采用UPLC-MS/MS进行测定，仪器条件如下：液相色谱条件为，色谱柱：C18柱(1.7μm，2.1mm×100mm)；流速：0.2～0.3mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～4min，60wt％甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振杰，刘春波，刘志华，朱瑞芝，邱明华，何沛，王昆淼，张凤梅，王文元，王凯，唐石云，司晓喜，申钦鹏，蒋薇，尤俊衡，张玲，杨光宇，苏钟璧，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53