本发明专利技术属于制药技术领域。本发明专利技术公开了紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素在制备抗肿瘤药物中的应用和制备方法。紫杉醇是从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)中分离得到。冬凌草甲素和冬凌草乙素是从香茶菜属植物冬凌草(碎米桠Rabdosia rubescens[Hems1.]Hara.)干燥地上部分中分离得到。冬凌草甲素／紫杉醇组合物和冬凌草乙素／紫杉醇组合物具有显著抑制耐紫杉醇肺癌细胞的增殖作用，促进耐紫杉醇肺癌细胞的凋亡，可作为紫杉醇类药物的耐药逆转剂和化疗增敏剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于制药
，涉及二萜类化合物紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素 的制备方法，并涉及冬凌草甲素/紫杉醇组合物（冬凌草甲素组合物）以及冬凌草乙素/ 紫杉醇组合物（冬凌草乙素组合物）具有逆转紫杉醇耐药性和增加紫杉醇化疗敏感性的作 用，可用于紫杉醇耐药的肺癌等癌症的治疗。 二、
技术介绍
恶性肿瘤严重威胁人类生命及生活质量，其发病率呈逐年上升的趋势。肺癌是全 球发病率最高的恶性肿瘤之一，己成为目前人类因肿瘤死亡的主要原因，随着环境污染的 日益严重，其发病率在相当长的时间内将呈显著的上升趋势。我国是肺癌的高发国家，在致 人死亡的恶性肿瘤中，肺癌位居首位。 化疗在肿瘤的治疗中发挥着重要作用。紫杉醇（Taxol)是Wani等于1971年从美 国西部短叶红豆杉中分离提取出来的一种天然抗肿瘤药物，其主要通过与肿瘤细胞内微管 蛋白结合，破坏细胞有丝分裂期微管的正常功能，诱导细胞阻滞于G2 /M期，从而杀伤肿瘤 细胞。紫杉醇疗效确切，抗瘤谱广，目前己成为临床上治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、 前列腺癌和胃癌的一线用药。然而，耐药问题的出现是临床治疗失败的主要原因，成为制约 紫杉醇发展的一大瓶颈。 紫杉醇耐药现象的产生机制为：P-gp过度表达或功能亢进；促调亡因子基因及蛋 白表达减低，或抗凋亡因子基因及蛋白表达升高，使肿瘤多药耐药细胞抵抗和逃逸抗肿瘤 药物诱导的凋亡；微管蛋白亚型表达的改变或其与药物结合位点的基因突变，导致微管聚 合临界浓度的提高或微管与药物结合受阻；细胞周期改变及肿瘤微环境改变等等。所以，利 用体外耐药细胞系，寻找具有逆转肿瘤多药耐药作用的化合物，显得尤其重要。中医药作为 肿瘤综合治疗的重要组成部分，以其安全、有效、副作用小等特点在预防和阻断肿瘤的发生 发展中，有重要的疗效和独特的优势。 冬凌草（碎米極Rabdosiarubescens(Hemsl. )Hara.)是一种唇形科香茶菜属植 物，产于我国湖北、四川、贵州、广西、陕西、甘肃、山西、河南、河北、浙江、安徽等地。冬凌草 抗肿瘤作用良好，毒性不明显，被誉为"紫杉醇第二"，并被《中华人民共和国药典》1977年 版收载。冬凌草甲素（〇ridonin，ORI)和冬凌草乙素（Ponicidin，P0N)是冬凌草中贝壳杉 烯类的二萜成分，是冬凌草中最重要的抗癌成分。己有文献报道，ORI和PON可显著抑制多 种肿瘤细胞生长，如抑制前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、白血病细胞、多形性恶性胶 质瘤细胞的增殖。冬凌草甲素体外抗肿瘤的机制与阻遏细胞周期、下调端粒酶活性、诱导肿 瘤细胞凋亡等有关。 细胞凋亡是由基因控制的、高度有序的细胞主动死亡过程，对维持机体内环境的 稳定和生长发育有着极其重要的作用。研究证明，肿瘤的发生与细胞凋亡机制的紊乱密切 相关，如果受损细胞的凋亡机制不能正常启动，机体内细胞增殖与凋亡的平衡将被破坏，导 致细胞过度增殖，就有可能引起肿瘤的产生。 由于冬凌草甲素和冬凌草乙素具有显著的抗肿瘤作用，而紫杉醇在临床使用中具 有耐药现象。为此，探讨冬凌草甲素组合物（紫杉醇：冬凌草甲素=2 : 1)和冬凌草乙素组 合物（紫杉醇：冬凌草乙素=2 : 1)对肺癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用，这目前尚未见 报道。 三、
技术实现思路
本专利技术包括了两部分内容，第一部分：紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素的制备方 法；第二部分：冬凌草甲素组合物以及冬凌草乙素组合物具有逆转紫杉醇耐药性和增加紫 杉醇化疗敏感性的作用，可用于紫杉醇耐药的肺癌等癌症的治疗。 1、紫杉醇的制备方法 将新鲜的南方红豆杉（Taxuschinensisvar.mairei，人工栽培，三至五年生）粉 碎成粗粉，用80%乙醇提取3次，合并提取液，过滤后减压回收乙醇后，所得浸膏用氯仿萃 取3次，合并萃取液，减压回收有机溶剂，及减压干燥得浸膏。上述浸膏用石油醚进行固液 萃取，余下的固形物溶适量氯仿中，经氧化铝柱层析去杂后，再用C_18硅胶柱层析，用乙腈/ 水溶剂系统进行梯度洗脱，含紫杉醇的洗脱液经减压浓缩至干得紫杉醇粗品；再分别用适 量甲醇/水混合溶剂进行两次重结晶，经真空干燥得紫杉醇。 其结构如下图所示：【主权项】1. 冬凌草甲素/紫杉醇组合物和冬凌草乙素/紫杉醇组合物在制备紫杉醇类药物的 耐药逆转剂和化疗增敏剂中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用中冬凌草甲素/紫杉醇组合物和 冬凌草乙素/紫杉醇组合物通过显著抑制耐紫杉醇肺癌细胞的增殖，促进耐紫杉醇肺癌细 胞的凋亡来发挥作用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于其中的冬凌草甲素和冬凌草乙素的制备方 法是：（1)将香茶菜属植物冬凌草（碎米極Rabdosia Rubescens (Hemsl.) Hara)干燥地上 部分，用80%乙醇回流提取3次，减压浓缩提取液至含醇量约60%，静置过夜，过滤； (2) 滤液减压浓缩至无醇，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚萃取液、乙酸乙酯萃 取液，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩为浸膏； (3) 将步骤（2)中的浸膏通过多次硅胶柱层析（氯仿-丙酮、氯仿-甲醇梯度洗脱）和 重结晶，得到冬凌草乙素和冬凌草甲素。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于其中的紫杉醇的制备方法是： (1) 将新鲜的南方红豆杉（Taxuschinensisvar.mairei，人工栽培，三至五年生）粉 碎成粗粉，用80%乙醇提取3次，合并提取液，过滤后减压回收乙醇后，所得浸膏用氯仿萃 取3次，合并萃取液，减压回收有机溶剂，及减压干燥得浸膏。 (2) 上述浸膏用石油醚进行固液萃取，余下的固形物溶适量氯仿中，经氧化铝柱层析去 杂质后，再用C_18硅胶柱层析，用乙腈/水溶剂系统进行梯度洗脱，含紫杉醇的洗脱液经减 压浓缩至干得紫杉醇粗品； (3) 上述紫杉醇粗品分别用适量甲醇/水混合溶剂进行两次重结晶，经真空干燥得紫 杉醇。5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述冬凌草甲素/紫杉醇组合物和冬凌草 乙素/紫杉醇组合物与常规辅助剂混合制成药学上可以接受的剂型。6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于剂型为冻干纳米乳注射剂、脂质体等。【专利摘要】本专利技术属于制药
本专利技术公开了紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素在制备抗肿瘤药物中的应用和制备方法。紫杉醇是从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)中分离得到。冬凌草甲素和冬凌草乙素是从香茶菜属植物冬凌草(碎米桠Rabdosia rubescensHara.)干燥地上部分中分离得到。冬凌草甲素／紫杉醇组合物和冬凌草乙素／紫杉醇组合物具有显著抑制耐紫杉醇肺癌细胞的增殖作用，促进耐紫杉醇肺癌细胞的凋亡，可作为紫杉醇类药物的耐药逆转剂和化疗增敏剂。【IPC分类】A61P35-00, A61K31-337, A61K31-357, A61K31-352【公开号】CN104758279【申请号】CN201410000104【专利技术人】梁敬钰, 吴斐华, 张雪芹, 王孟华, 王立英, 周志红, 卢海英, 付菊琴 【申请人】中国药科大学【公开日】2015年7月8日【申请日】2014年1月2日本文档来自技高网...
【技术保护点】
冬凌草甲素／紫杉醇组合物和冬凌草乙素／紫杉醇组合物在制备紫杉醇类药物的耐药逆转剂和化疗增敏剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁敬钰，吴斐华，张雪芹，王孟华，王立英，周志红，卢海英，付菊琴，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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