【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种根瘤土壤杆菌、其培养方法及利用根瘤土壤杆菌发酵降低的雪茄烟叶烟碱含量的发酵方法。
技术介绍
1、雪茄是一种特殊的烟草，新鲜的雪茄烟叶收获后具有强烈的刺激性气味，其主要原因来自于烟里面的尼古丁和其他有害化学物质。这些化学物质在烟叶燃烧时会产生刺激性气味，这种气味对人体的呼吸系统有着潜在的危害；如果要控制这种刺激性气味的产生，最重要的方法是利用微生物发酵减少烟叶中尼古丁和其他有害化学物质的含量。
2、雪茄通过发酵过程制成成品。发酵过程对雪茄的口味和香气的形成有极大的影响。发酵过程是由微生物驱动的，包括细菌和酵母等。在这个过程中，这些微生物将烟草叶中的糖分解成酒精和其他化合物，这些化合物提供了雪茄的独特口感，例如：焦糖和香草；发酵过程还降低了烟草叶中可能有害的物质，如尼古丁，使其更为温和。
3、目前我国这个方面的研究相对薄弱，筛选能够在雪茄发酵过程中降解烟碱的微生物，利用发酵验证其对刺激性气味的消除以及增强雪茄味和协调性，对丰富我国国产雪茄烟叶多样性，提升我国雪茄烟叶品质具有重要的意义。
4、为此提出本专利技术。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、针对我国缺少发酵过程中控制烟碱含量的菌株，筛选能够降解雪茄烟碱的菌株，将得到的菌株用于雪茄烟叶的发酵，维持雪茄的协调性和雪茄味。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术第一方面公开了一种微生物，其为根瘤土壤杆菌，其16s rdna
4、本专利技术第二方面公开了所述微生物的筛选方法，包括如下步骤：
5、(1)烟碱培养基制备：每升烟碱培养基中，加入13.3g的k2hpo4·3h2o，4g的kh2po4，0.2g的mgso4·7h2o，0.5ml微量元素，和1g烟碱；其中微量元素为：0.05gcacl2·2h2o，0.05gcucl2·2h2o，0.008gmnso4·h2o，0.004gfeso4·7h2o，0.1gznso4·h2o，0.1gna2moo4·2h2o，0.05gna2wo4·2h2o；
6、烟碱培养基制备：1.5t％的琼脂；
7、lb培养基制备：每升lb培养基中，蛋白胨为10g，nacl为10g，酵母提取物5g；
8、(2)菌株的筛选：取混样5g加入到步骤(1)得到的含100ml烟碱培养基、中，在37℃、200r/min的恒温摇床中培养；48h后吸取1ml菌液进行10倍梯度稀释，分别得到10-1、10-2、10-3、10-4稀释液；分别取上述溶液100μl涂布在烟碱固体培养基中，在37℃的恒温箱中培养48h，挑取不同形态类型的菌株划线纯化48h；
9、(3)菌株的复筛：先将筛选到的菌株在lb培养基上划线分为34株，经过进一步将相同菌株合并挑选后，得到18株菌株；将得到的18株菌株分别划线至1g/、2g/l、3g/l、4g/l的烟碱固体培养基几种，培养48h后进行进一步筛选；得到16株；将剩余的菌株进行液态发酵实验，测算48h的烟碱降解率：将分离纯化的菌株接种到3ml的lb培养基中过夜，1％的接种量取1ml加入到含100ml含2g/l烟碱液体培养基中，在37℃、200r/min的恒温摇床中培养2d，使用紫外分光光度计测定259nm处的吸光值，通过标准曲线换算其浓度；取培养48h培养液2ml，10000r/min离心5min，上清液用0.05mol/l的hcl稀释到标准曲线的吸光度范围内，用0.05mol/l的hcl作为参比液调节至零，通过吸光值计算烟碱含量；确定菌株对烟碱的降解率；取降解效果较好的三株菌株，即为所述的微生物菌株；其中，烟碱降解率＝((初始烟碱含量-发酵液中的烟碱含量)/初始烟碱含量)*100％。
10、本专利技术第三方面公开了所述微生物的用于雪茄发酵的应用。
11、优选地，所述微生物的用于雪茄发酵的步骤如下：
12、(1)将雪茄烟叶置于35～45℃的温度和85～95％的相对湿度下直至雪茄烟叶含水量约为25-30％；
13、(2)将微生物菌株添加至步骤(1)得到雪茄烟叶中，通过“堆垛-翻堆-重新码堆”进行不少于四次翻堆，队雪茄烟叶进行发酵；
14、(3)将步骤(2)的发酵雪茄烟叶的含水量降低值16-17wt％停止发酵，即得到所述的成品发酵雪茄烟叶。
15、本专利技术的有益效果：
16、1、本专利技术首次筛选出新的微生物菌种，其微生物学分类命名为根瘤土壤杆菌，拉丁文学名为agrobacterium tumefaciens；微生物保藏编号为cgmcc no.28669。
17、2、本专利技术针对目前国产雪茄烟叶发酵中辛刺激性气味突出的问题，使用新的菌种根瘤土壤杆菌发酵雪茄烟叶，可以明显降低雪茄烟叶刺激性气味，使雪茄烟叶的气味更加柔和，进一步提升了国产雪茄烟叶的质量。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种微生物，其特征在于，其为根瘤土壤杆菌，其16S rDNA部分序列如序列表SEQ IDNO.1所示；其保藏编号为CGMCC No.28669。
2.根据权利要求1所述微生物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述微生物用于雪茄发酵的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述微生物的用于雪茄发酵的步骤如下：
【技术特征摘要】
1.一种微生物，其特征在于，其为根瘤土壤杆菌，其16s rdna部分序列如序列表seq idno.1所示；其保藏编号为cgmcc no.28669。
2.根据权利要求1所述微生物的...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽君，刘馨芮彤，王磊，邓帅军，吴萍乐，王帆，白晓莉，李赓，刘晶，刘晓敏，黄本荣，张海波，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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