一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制备方法，本发明专利技术通过将SchS10糖基转移酶基因失活，再使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomyces sp.SCC‑2136/ΔschS10菌株，再对菌株的培养物进行提取和分离得到新化合物OZK1和OZK2；OZK1和OZK2化合物与Angucycline类抗生物同源，具有抗病毒、抗细菌、抗肿瘤、抗真菌的能力，具有巨大的市场价值。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制备方法
本专利技术涉及抗生物领域，特别是Angucycline类抗生物的结构和制备方法。
技术介绍
Angucycline类抗生物是一类由II型聚酮糖合成酶通过一系列连续反应合成的具有生物活性的天然产物。Angucyclines具有多种生物活性，例如抗病毒、抗细菌、抗肿瘤、抗真菌等。Sch47554和Sch47555是由Streptomycessp.SCC-2136(ATCC55186)产生的，具有抗酵母及皮肤癣菌等多种真菌的能力。对于其完整生物合成的基因信息已有科学家进行研究报道(D.B.Basnet,T.-J.Oh,T.T.H.Vu,B.Sthapit,K.Liou,H.C.Lee,J.-C.Yoo,J.K.Sohng,Mol.Cells2006,22,154–162)。其生物合成关键基因簇信息(NCBIaccession号码为AJ628018)可以借助NCBI、UCSC、Ensembl等科研工具进行查询，使得我们能够分析这两种化合物在合成过程中各阶段关键酶的作用。Sch47554和Sch47555的合成过程包含酶SchP6-8用于聚酮糖核心骨架的搭建、酶SchS1-6用于糖基的核苷酸活化。还包括一些剪切修饰酶，例如SchP4(芳香酶)、SchP5(酮还原酶)、SchP9(环化酶)、SchP10(氧合酶)以及剩余三种SchS7、SchS9和SchS10均为糖基转移酶。糖基转移酶能够将活化的糖基转移到受体分子上，通常是一些具有重要药用价值天然产物的合成和修饰步骤。区域和立体特异性连接的糖基在药物与生物靶标的结合以及许多天然产物的生物活性中起重要作用。例如，与具有三糖侧链的衍生物地霉素E相比，具有六糖侧链的地洛霉素A显示出强得多的抗肿瘤活性。糖基转移酶在药物与化学酶结合法或体内转化方面具有重要作用。在利用组合生物学方式研究解析基因功能的过程中，通过使schS9和schS10失活的方式，发现了两种新化合物OZK1和OZK2。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制备方法，该化合物是在研究schS9及schS10基因功能时，发现的新化合物；与Angucycline类抗生物同源，具有抗病毒、抗细菌、抗肿瘤、抗真菌的能力，具有巨大的市场价值。为了实现所述目标，本专利技术采用如下的技术方案：一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物，OZK1化合物的结构式为：OZK1化合物的结构式为：前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，包括如下步骤：步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomycessp.SCC-2136或ATCC55186产生的抗生物；步骤二，对成功被失活的SchS10糖基转移酶基因使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株；步骤三，对链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；步骤四，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物。步骤五，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，包括如下步骤：步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomycessp.SCC-2136或ATCC55186产生的抗生物；步骤二，对成功被失活的SchS10糖基转移酶基因使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株；步骤三，对链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；步骤四，提取链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株的培养物中的各类基因片段进行PCR扩增，采用的引物如下所示：步骤五，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物。步骤六，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤四中的基因提取采用艾德科技-真菌/细菌DNA微量提取试剂盒。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤一，通过同源重组的方式，在SchS10的原始基因序列中选取一个763bp的片段，利用DNA连接酶与限制性内切酶将其与大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒相结合，最终导入链霉菌Streptomycessp.SCC-2136中，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomycessp.SCC-2136或ATCC55186产生的抗生物。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤二中的干扰质粒为pRY10，所述pRY10携带有抗阿伯拉霉素基因；pRY10干扰质粒的制备过程为：aac为抗阿伯拉霉素基因，将目标片段schS10插入到原质粒的表达启动区域lacZ的插入位点之间，插入位点为HindIII和XbaI。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤三，对链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；所述具体培养过程为：将链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株在YM平板上进行培养，添加阿伯拉霉素，28℃，10天；再将链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10在YM平板上培养5天，用于基因提取。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤四中的提取剂的质量百分比的组份为：89％乙酸乙酯、10％甲醇，1％乙酸。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，步骤五中的初步分离采用的方法为：使用硅胶柱在不同比例的氯仿/甲醇溶液处理下进行分离。前述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，包括如下步骤：步骤一，将UMW6经过拜耳-维立格氧化反应得到SHUNT步骤二，将SHUNT经过还原反应得到步骤三，将步骤二得到的产物在酸性环境下经过质子化作用得到步骤四，将步骤三得到的产物经过6-还原，5、6-脱水，12-氧化，得到步骤五，将步骤四得到的产物经过SchS7糖基转移酶将通过糖基化作用连接至其结构上，得到3'-Deoxyaquayamycin步骤六，将步骤五得到的产物经过SchS9糖基转移酶将通过糖基化作用连接至其结构上，得到：OZK1和OZK2本专利技术的有益之处在于：本专利技术发现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物，其特征在于，OZK1化合物的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物，其特征在于，OZK1化合物的结构式为：OZK1化合物的结构式为：2.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；所述SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，所述Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomycessp.SCC-2136或ATCC55186产生的抗生物；步骤二，对成功被失活的SchS10糖基转移酶基因使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株；步骤三，对链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；步骤四，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物；步骤五，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物。3.根据权利要求2所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；所述SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，所述Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomycessp.SCC-2136或ATCC55186产生的抗生物；步骤二，对成功被失活的SchS10糖基转移酶基因使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株；步骤三，对链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；步骤四，提取链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10菌株的培养物中的各类基因片段进行PCR扩增，采用的引物如下所示：步骤五，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物；步骤六，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物。4.根据权利要求3所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中的基因提取采用真菌/细菌DNA微量提取试剂盒。5.根据权利要求2所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：占纪勋，张炜，
申请(专利权)人：杭州唯铂莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33