一种重组户尘螨1类变应原蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种重组户尘螨I型变应原及其编码基因和制备方法，发明专利技术人将proDer p1基因在毕赤酵母表达系统中进行了优化，并在分子设计时加入了提高proDer p1表达的作用原件。经过基因优化后proDer p1与现有技术相比具有更高的表达量，且经过纯化工艺纯化获得的重组Der p1与天然蛋白相比具有相似的生物学活性。

Recombined 1 kinds of allergen protein of household dust mites and preparation method and application thereof

The invention relates to a recombinant family dust mites I type allergen and its encoding gene and preparation methods. The inventor optimizes the proDer P1 gene in Pichia pastoris expression system and added the original part to improve the expression of proDer P1 in the molecular design. After gene optimization, proDer P1 has a higher expression compared with the existing technology, and the recombinant Der P1 obtained by purification process has similar biological activity compared with natural protein.

【技术实现步骤摘要】
一种重组户尘螨1类变应原蛋白及其制备方法和应用
本专利技术属于生物工程基因领域，涉及一种重组户尘螨1类变应原及其编码基因和表达纯化方法。
技术介绍
尘螨种类繁多，广泛存在于人类生活和工作环境中，其排泄物、代谢物及螨体均具有较强的变应原型，据统计全球约10％的人口尘螨过敏，约80％的外源性哮喘由尘螨引起。目前，临床上主要采用尘螨变应原粗提液治疗尘螨引起的变态反应性疾病，例如2006年上市的浙江我武生物的“畅迪”粉尘螨滴剂即为粉尘螨代谢培养物的提取液。尘螨变应原主要存在于排泄物和螨体中，采用提取方法耗时长，过程繁琐，成本较高；此外天然变应原提取液的组成非常复杂，恒定其组分非常困难，且容易受到外源性有毒物质、病原体微生物的污染。长期使用尘螨变应原粗提液易导致红晕、肿胀、硬结、坏死等局部反应和休克、水肿、支气管痉挛、荨麻疹、血管性水肿、全身性红斑等全身反应，此外，采用粗提液进行诊断，无法明确患者对变应原各组分的反应程度，易致误诊。变应原的质量对变态反应疾病的诊断和治疗至关重要，用于免疫诊治的变应原应该是纯品而不宜为粗提取液。重组变应原与粗提液相比具有以下优势：(1)重组变应原具有更高的纯度，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码proDer p1蛋白的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
2016.12.31 CN 20161127041221.编码proDerp1蛋白的DNA序列，其碱基序列如SEQIDNO:1所示。2.重组proDerp1蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。3.重组Derp1蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。4.含有权利要求1所述编码proDerp1基因的载体，所述的载体为pAO815，pPIC9，pPIC9K，pPIC3.5，pPIC3.5K，pPICZαA、B、C或pGAPZαA、B、C。5.包含权利要求1所述载体的毕赤酵母菌株，所述毕赤酵母菌株为SMD1168、GS115、KM71、X33或KM71H。6.如权利要求4所述毕赤酵母菌株，其特征是编码proDerp1蛋白的DNA序列与毕赤酵母上AOX1的ATG相差242bp；编码proDerp1蛋白的DNA序列前有alpha-factor信号肽和Kozak序列GCCACCATGG。7.重组proDerp1蛋白的表达方法，所述方法包含下述步骤：A.构建含有如权利要求1所述的编码proDerp1基因的载体；B.将步骤A的载体线性化后转入毕赤酵母菌株中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马永，范宇，王安良，王俊，
申请(专利权)人：江苏众红生物工程创药研究院有限公司，常州京森生物医药研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32