一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用、降解玉米赤霉烯酮的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及微生物领域，公开了一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用、降解玉米赤霉烯酮的方法和试剂盒。具体地，本发明专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.13138。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌可以高效且快速地降解粮油和/或饲料中的玉米赤霉烯酮，特别是，即使粮油和/饲料中的玉米赤霉烯酮含量高达50ppm时，该枯草芽孢杆菌也可以高效且快速地降解玉米赤霉烯酮，并且对粮油和/或饲料的适口性无影响；同时，将该枯草芽孢杆菌添加至受玉米赤霉烯酮污染的粮油和/或饲料中，具有安全性。因此，该枯草芽孢杆菌具有良好的应用前景。

Bacillus subtilis, bacterial inoculum containing it and its application, degradation method and kit for zearalenone

The invention relates to the field of microorganism, and discloses a strain of Bacillus subtilis, a fungus containing the bacterium and its application, a method and a kit for degradation of zearalenone. Specifically, the invention provides a Bacillus subtilis (Bacillus subtilis), wherein the preservation number of Bacillus subtilis is CGMCC NO.13138. The Bacillus subtilis provided by the present invention can efficiently and quickly degrade cereals and / or corn Chek - ketenone in food and / or feed, especially, the Bacillus subtilis can also efficiently and quickly degrade corn Chek - ketenone even if the content of the corn Chek - ketenone is up to 50ppm in grain and / or feed. Palatability is not affected; at the same time, the Bacillus subtilis is added to the cereal oil and / or feed contaminated by zearalenone, and is safe. Therefore, the Bacillus subtilis has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用、降解玉米赤霉烯酮的方法和试剂盒
本专利技术涉及微生物领域，具体地，涉及一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用、降解玉米赤霉烯酮的方法和试剂盒。
技术介绍
玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)是由镰刀菌产生并释放到土壤环境中的真菌毒素，它是世界上污染范围最广泛的一种镰刀菌毒素。1999年，D.Mello等人研究发现，ZEN能够降低怀孕动物的胚胎成活率及新生胎儿的出生率。ZEN对人体的影响主要是引发肿瘤、诱导DNA收缩、导致染色体失常等。此外，ZEN可与17β-雌二醇受体结合，导致脂肪氧化反应、细胞凋亡并导致蛋白质和DNA合成的抑制，还可以抑制其它大分子的生物合成。玉米赤霉烯酮作为世界上污染粮油或饲料最广泛的真菌毒素之一，在欧洲、非洲、北美洲、南美洲等世界各地的谷物中以及农副产品中都检测到了ZEN的存在。ZEN可以通过污染谷类等农作物，进而进入人或动物体内，危害人和动物的健康，造成巨大的经济损失。同时，ZEN本身具有分布广、繁殖快、耐热、毒性大、残留时间长等问题，已经引起了全世界的关注。目前，大部分国家对粮油或饲料中的ZEN含量都作了十分严格的规定，例如，澳大利亚规定谷物中ZEN的含量不能超过50ng/g；意大利规定在谷物和谷类产品当中ZEN的含量不能超过100ng/g；在法国，植物油和谷类当中ZEN的含量必须低于200ng/g。目前，去除ZEN毒素的方法主要分为物理法、化学法和生物法。物理法包括机械分离处理、高温失活、放射处理或吸附剂等；化学法是通过酸碱溶液或其它化合物对毒素进行处理。然而，通过物理和化学处理以去除ZEN的方法具有局限性。例如，通过热处理，不能有效地使ZEN钝化；通过挤出和使用氧化剂进行处理，虽然可以在一定程度上降低ZEN的含量，但是在饲料和食品的制备过程中采用挤出方法和使用氧化剂(如臭氧或过氧化氢)，由于成本较高、处理样品的品质损失、效率和特异性较低而受到限制。总之，由于物理法存在着成本高、操作难、处理后的产物可能对粮油、饲料或环境造成污染等缺点，化学法可能会改变饲料的性状，产生有害残留物，从而存在食品安全问题等缺陷，从而限制了这两种方法在实际生产中的应用。生物法主要是利用微生物或其降解产物进行毒素降解的过程，具有对原料的感官性状、适口性、营养物质影响较小等优点，同时，还具有安全、环保、高效的特点，因此，利用生物法去除粮油或/饲料中ZEN的研究具有良好的应用前景。目前，研究报道表明多种真菌(例如，粉红粘帚霉、米根霉、匍枝根霉、少根根霉、黑曲霉、解毒毛孢酵母等)能够生物降解ZEN，但是关于细菌降解ZEN的报道仍较少。在现有技术中，CN103937681A公开了一株食品级黑曲霉及其在玉米赤霉烯酮降解中的应用，将该黑曲霉在适宜的条件(28℃，菌液接种量2％)与终浓度为2ppm的ZEN共培养48h，ZEN的降解率为89.56％。CN103981134A公开了一株枯草芽孢杆菌及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用，将该枯草芽孢杆菌在适宜的条件(28℃)下与终浓度为2ppm的ZEN共培养72h，ZEN的降解率为92.75％。CN103981133A公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用，将该株解淀粉芽孢杆菌在适宜的条件(28℃)下与终浓度为5ppm的ZEN共培养72h，ZEN的降解率为95.99％。可见，现有的微生物降解ZEN的方法降解时间均较长，且降解率尚有待提高。另外，现有的降解ZEN的微生物大多是在温和的条件(如28℃，pH为7左右)下进行，然而，在较高的温度负荷下(如在容器中进行运输期间或在饲料粒化期间的情况下)或苛刻的酸碱性条件下尚无较好的解决办法，这就限制了生物法在降解ZEN中的应用范围。因此，有必要寻找一种高效的且安全性高的，并且在较高的温度负荷或苛刻的酸碱条件下可以快速降解ZEN毒素的微生物。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有的玉米赤霉烯酮降解过程中存在的上述缺陷，提供了一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用和降解玉米赤霉烯酮的方法。为了实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.13138。第二方面，本专利技术还提供了一种菌剂，其中，该菌剂含有上述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。第三方面，本专利技术还提供了上述枯草芽孢杆菌和/或菌剂在降解玉米赤霉烯酮毒素中的应用。第四方面，本专利技术还提供了一种降解玉米赤霉烯酮的方法，其中，该方法包括：将上述枯草芽孢杆菌和/或上述菌剂与玉米赤霉烯酮污染的样品接触，以降解样品中的玉米赤霉烯酮。第五方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述枯草芽孢杆菌和/或上述菌剂。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌可以高效且快速地降解粮油和/或饲料中的ZEN，特别是，即使粮油和/饲料中的ZEN含量高达50ppm时，该枯草芽孢杆菌也可以高效且快速地降解ZEN，并且对粮油和/或饲料的适口性无影响(即处理前后口味基本无差异)；同时，将该枯草芽孢杆菌添加至受ZEN污染的粮油和/或饲料中，具有安全性。因此，该枯草芽孢杆菌具有良好的应用前景。此外，本专利技术提供的枯草芽孢杆菌还具有高温和酸碱稳定性，这进一步扩大了其应用的范围。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。生物保藏本专利技术提供的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，并于2016年10月24日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCCNO.13138。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。第一方面，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.13138。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌分离自受ZEN污染的土壤样本(例如，采集地为北京)。所述枯草芽孢杆菌的分离可以采用本领域常规的用于新菌株分离的方法，例如可以为液相富集法或土壤环流法。液相富集法具体可以包括：称取适量受ZEN污染土壤样品加入到装有LB液体培养基的三角瓶中，加入适量玻璃珠。将三角瓶在28-37℃，160-180rpm下振荡；将土壤混合液转入离心管，取离心后的上清液作为ZEN钝化微生物的来源。将所述上清液接种到含有ZEN的LB液体培养基中，在28-37℃，160-180rpm下振荡培养。用无菌吸管吸取1-2mL，移入另一个富集培养三角瓶中。如此转移三次后，将上清液分别稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7或10-8倍，吸取适量涂布于含有50、1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.13138。

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.13138。2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。3.根据权利要求2所述的菌剂，其中，所述菌剂含有所述枯草芽孢杆菌的的活菌体和/或死菌体，优选为活菌体。4.根据权利要求2或3所述的菌剂，其中，所述菌剂为液态菌剂和/或固态菌剂，优选为固态菌剂。5.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和/或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂在降解玉米赤霉烯酮毒素中的应用，优选为在降解粮油和/或饲料中的玉米赤霉烯酮中的应用。6.一种降解玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和/或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂与玉米赤霉烯酮污染的样品接触，以降解样品中的玉米...

【专利技术属性】
技术研发人员：林海龙，苏会波，张子剑，黄锦，唐堂，谭剑，陈博，李凡，
申请(专利权)人：中粮营养健康研究院有限公司，中粮集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11