酮还原酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酮还原酶突变体及其应用。该酮还原酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列，突变至少包括如下突变位点之一：第6位、第94位、第96位、第117位、第144位、第156位、第193位、第205位、第224位、第176位、第85位和第108位；或者酮还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点，且与发生突变的氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列。本发明专利技术酮还原酶突变体的稳定性高，尤其是对于丙酮和异丙醇的耐受性，使得它们在手性羟基杂环类物质的制备中，反应体系成分简化，成本降低，制备的手性醇ee值甚至高达99.8％。

Ketone reductase mutant and its application

The invention discloses a ketone reductase mutant and its application. The amino acid sequence of the mutants of the ketone reductase is an amino acid sequence obtained by the mutation of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO:1. The mutation includes at least one of the following mutation sites: sixth, ninety-fourth, ninety-sixth, 117th, 144th, 156th, 193rd, 205th, 224th, 176th, eighty-fifth. The amino acid sequences of 108th or ketone reductase mutants have mutation sites in the sequence of mutated amino acids, and the amino acid sequences with more than 80% homology with the mutation of the amino acid sequence. The stability of the ketone reductase mutant is high, especially for the tolerance of acetone and isopropanol, so that in the preparation of the chiral hydroxyl heterocyclic substances, the composition of the reaction system is simplified, the cost is reduced, and the EE value of the prepared chiral alcohol is even up to 99.8%.

【技术实现步骤摘要】
酮还原酶突变体及其应用
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种酮还原酶突变体及其应用。
技术介绍
手性醇是一类手性碳上连有羟基的旋光性化合物，广泛用于手性药物和其他手性精细化学品的合成。传统的化学合成方法存在环境污染大、产物纯度不高、催化条件苛刻或催化剂价格昂贵等诸多问题。酮还原酶因其高效、高立体选择性、条件温和及绿色环保等众多优点而广泛用于光学活性醇的合成。酮还原酶(Ketoreductase)也称羰基还原酶或醇脱氢酶，是一种普遍存在于自然界中的氧化还原酶，它能将可逆地催化酮或者醛还原为醇。酮还原酶催化酮类的还原需要辅因子向羰基转移氢，常用的辅因子是还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。微生物细胞或者微生物来源的酮还原酶可以高效地催化前手性酮的还原，是制备手性醇分子的重要方法之一。然而天然酶对非天然底物的催化时，其反应选择性，催化活性和稳定性并不是很理想，不能很好地满足工业应用的要求。借助蛋白质工程的方法对野生酶进行改造是提高其对非天然底物的酶学性能的有效手段。R-3-羟基杂环化合物，如R-3-羟基四氢呋喃和R-3-羟基四氢噻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酮还原酶突变体，其特征在于，所述酮还原酶突变体的氨基酸序列是与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列，且至少包括如下突变位点之一：第6位、第94位、第96位、第117位、第144位、第156位、第193位、第205位、第224位、第176位、第85位和第108位，且所述第6位的甘氨酸突变为丝氨酸；第94位的丙氨酸突变为丝氨酸或苏氨酸；第96位的丝氨酸突变为脯氨酸、天冬酰胺、精氨酸或甲硫氨酸；第117位的甘氨酸突变为丝氨酸；第144位的谷氨酸突变为丝氨酸，第156位的天冬酰胺突变为苏氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、缬氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸，第193位的脯氨酸突变为甘氨...

【技术特征摘要】
1.一种酮还原酶突变体，其特征在于，所述酮还原酶突变体的氨基酸序列是与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列，且至少包括如下突变位点之一：第6位、第94位、第96位、第117位、第144位、第156位、第193位、第205位、第224位、第176位、第85位和第108位，且所述第6位的甘氨酸突变为丝氨酸；第94位的丙氨酸突变为丝氨酸或苏氨酸；第96位的丝氨酸突变为脯氨酸、天冬酰胺、精氨酸或甲硫氨酸；第117位的甘氨酸突变为丝氨酸；第144位的谷氨酸突变为丝氨酸，第156位的天冬酰胺突变为苏氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、缬氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸，第193位的脯氨酸突变为甘氨酸，第205位的丙氨酸突变为谷氨酰胺，第224位的异亮氨酸突变为缬氨酸，第96位的丝氨酸突变为脯氨酸，第176位的丝氨酸突变为脯氨酸，第85位的天冬氨酸突变为谷氨酸和第108位的精氨酸突变为组氨酸。2.根据权利要求1所述的酮还原酶突变体，其特征在于，所述酮还原酶突变体的氨基酸序列为与SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11、SEQIDNO：12、SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15、SEQIDNO：16、SEQIDNO：17、SEQIDNO：18、SEQIDNO：19、SEQIDNO：20、SEQIDNO：21、SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：24、SEQIDNO：25、SEQIDNO：26、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29、SEQIDNO：30、SEQIDNO：31、SEQIDNO：32、SEQIDNO：33、SEQIDNO：34、SEQIDNO：35、SEQIDNO：36、SEQIDNO：37、SEQIDNO：38、SEQIDNO：39、SEQIDNO：40、SEQIDNO：41、SEQIDNO：42或者SEQIDNO：43所示的氨基酸序列具有95％以上同源性，优选为96％的同源性,更优选为97％，98％，99％或100％的同源性的氨基酸序列。3.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1或2所述的酮还原酶突变体。4.根据权利要求3所述的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子的序列为与SEQIDNO：44、SEQIDNO：45、SEQIDNO：46、SEQIDNO：47、SEQIDNO：48、SEQIDNO：49、SEQIDNO：50、SEQIDNO：51、SEQIDNO：52、SEQIDNO：53、SEQIDNO：54、SEQIDNO：55、SEQIDNO：56、SEQIDNO：57、SEQIDNO：58、SEQIDNO：59、SEQIDNO：60、SEQIDNO：61、SEQIDNO：62、SEQIDNO：63、SEQIDNO：64、SEQIDNO：65、SEQIDNO：66、SEQIDNO：67、SEQIDNO：68、SEQIDNO：69、SEQIDNO：70、SEQIDNO：71、SEQIDNO：72、SEQIDNO：73、SEQIDNO：74、SEQIDNO：75、SEQIDNO：76、SEQIDNO：77、SEQIDNO：78、SEQIDNO：79、SEQIDNO：80、SEQIDNO：81、SEQIDNO：82、SEQIDNO：83、SEQIDNO：84、SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪浩，詹姆斯·盖吉，卢江平，徐幸福，于文燕，张娜，马玉磊，程逸冰，牟慧艳，
申请(专利权)人：吉林凯莱英医药化学有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22