一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株WKPHY‑54，其保藏编号为CGMCC No.14951。还公开了含有该菌株的微生物菌剂。本发明专利技术菌株WKPHY‑54具有降解有机磷和防病双重作用，既可提高磷肥或土壤中有机磷的利用率，促进作物生长，减少肥料投入，降低生产成本；同时还对茄子黄萎病等植物病害有较高的防效，平均防效在70.0％以上；其次，本发明专利技术菌株WKPHY‑54抑菌谱广，对茄子黄萎菌、黄瓜枯萎菌、棉花枯萎菌及马铃薯黑痣菌等都具有较好的抑制作用；此外，本发明专利技术WKPHY‑54菌株对茄子黄萎病等植物病害专化性强；不易产生抗药性，药效持久性好。

A Bacillus subtilis with dual functions of degrading organic phosphorus and preventing disease

The invention discloses a Bacillus subtilis Bacillus strain subtilis WKPHY 54, whose preservation number is CGMCC No.14951. Microbiological agents containing the strain were also disclosed. The strain WKPHY 54 has the dual functions of organophosphorus degradation and disease prevention, which can not only improve the utilization of organophosphorus in phosphate fertilizer or soil, promote crop growth, reduce fertilizer input and reduce production costs, but also have high control efficiency for plant diseases such as Verticillium Wilt of Eggplant and even more than 70%. Secondly, the invention The strain WKPHY 54 has a wide antimicrobial spectrum, which has a good inhibitory effect on Verticillium wilt, cucumber fusarium wilt, cotton Fusarium Wilt and potato black nevus. In addition, this invention has strong specificity on plant disease such as Verticillium Wilt of eggplant, and it is not easy to produce resistance and has good efficacy.

【技术实现步骤摘要】
一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌
本专利技术属于农业微生物领域，具体涉及一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌，还涉及含有该枯草芽孢杆菌的微生物菌剂，以及它们在降解有机磷和防治作物病害方面的应用。
技术介绍
磷是维持植物正常生长所必需的矿质元素之一，是植物体内核酸及多种酶、辅酶、ATP等的重要组分。植物生长发育所需要的磷主要来自肥料和土壤的供应。施入土壤中的磷肥易形成难溶性的磷酸盐而难以被作物吸收利用，因此改善植物的磷营养关键在于转化利用土壤中的难溶性磷。而土壤中磷的转化离不开解磷菌的参与，解磷菌分为解无机磷细菌和解有机磷细菌两种。有机磷降解细菌主要分解有机磷化合物，包括植酸盐、磷脂、有机磷酸盐等，其作用机理主要是借助于细菌生命活动中所产生的酶降解有机磷为无机形式，从而被植物吸收利用。目前，土壤中降解有机磷的细菌主要有芽孢杆菌(Bacillussp.，CN106978347A)、泛菌(Pantoeasp.，CN104498403A，CN104962500A)、不动杆菌(Acinetobactersp.，CN106544303A，CN104974962A)及假单胞菌(Pseudomonassp.，CN105112319A)等。其中芽孢杆菌有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，CN106244504A)、解淀粉芽孢杆菌(CN106434455A、CN105420156A)等。这些菌株的作用主要降解有机磷方面，针对防治植物病害方面未见报道。茄子黄萎病是由大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)引起的一种土传病害，主要为害叶片,在茄子各个生长期均可发病,以结果期发病最重。随着设施栽培的发展，茄子连作栽培越来越普遍，导致茄子黄萎病逐年加重，大幅降低茄子的产量和品质。生产上主要依靠大量使用化学农药来防治茄子黄萎病，不仅增强病原菌的抗药性、破坏土壤微生物间的平衡，并造成蔬菜上的农药残留和环境污染。因此，生物防治作为植物病害防治的一项重要措施，已引起人们的高度重视。目前防治茄子黄萎病的芽胞杆菌主要有侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus，CN107151641A)、解淀粉芽孢杆菌(CN105238723A)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，CN102925394A；CN102154186A；鲁红学等，湖北农业科学，2013，52(21)：5199-5202；程磊等，长江大学学报，自然科学版，2012年06期；孙义等，江苏农业学报，2008，24(4)：425-430；林玲等，中国生物防治学报，2010(s1)：40-46)、类芽孢杆菌(Paenibacilluselgii，CN102086444B)、蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus，杨威等，微生物学通报2011年05期)等。上述已知的芽孢杆菌功能相对单一，或仅具有解磷作用，或仅具有防治病害作用；其次，随着环境条件的改变，或者病原菌的进化，芽孢杆菌的功能也可能随之进化，发生改变，因此，持续地从土壤中分离、筛选具有高效溶磷功能，且抑菌谱广的芽孢杆菌，对于调节土壤磷素的供需矛盾，提高对植物病害防效，降低生产成本、保护生态环境，促进农业的可持续发展具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种枯草芽孢杆菌菌株，该菌株具有降解有机磷和防治病害的双重功能。本专利技术第二目的在于提供上述枯草芽孢杆菌的用途。本专利技术第三目的在于提供一种含有上述枯草芽孢杆菌的微生物菌剂。本专利技术第四目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。本专利技术第五目的在于提供上述微生物菌剂的用途。本专利技术通过以下技术方案实现：一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌株WKPHY-54，其保藏编号为CGMCCNo.14951。上述菌株WKPHY-54在降解有机磷上的应用。上述菌株WKPHY-54在降解土壤中有机磷上的应用上述菌株WKPHY-54在促进作物生长上的应用。上述菌株WKPHY-54在防治植物病害上的应用。上述应用中所述的植物病害是指茄子黄萎病(Verticilliumdahliae)、黄瓜枯萎病(F.oxysporumf.sp.cucumebrium)、棉花枯萎病(F.oxysporumf.sp.vasinfectum)或马铃薯黑痣病(R.solani)等。上述菌株WKPHY-54在降解有机磷和防治茄子黄萎病上的应用。本专利技术还提供了一种含有上述菌株WKPHY-54的微生物菌剂。上述微生物菌剂可以为液体制剂或固体制剂。上述微生物菌剂中含有菌株WKPHY-54的活菌数为2.0×106～2.0×108cfu/mL或2.0×106～2.0×108cfu/g。上述微生物菌剂的液体制剂的制备方法，包括如下步骤：(1)菌种活化：将低温保存的WKPHY-54菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上25～35℃培养10～16小时，得活化的菌株；(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)中活化的菌株，然后接种到100mLLB液体培养基中，在25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下培养10～16小时，得种子液；(3)发酵培养：按照体积比为1～3％的比例将步骤(2)的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基(pH值为7.2)中，在温度为25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下发酵培养36～40h，得发酵液；每隔30min检测发酵液中菌体和芽孢数量，待发酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为WKPHY-54菌株的液体制剂。上述制备方法步骤(1)中所述LB平板培养基或LB斜面培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，琼脂粉12～18g，水1000mL。上述制备方法步骤(2)中所述LB液体培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，水1000mL。所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。上述制备方法步骤(3)中所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0～3.0％，黄豆粉1.0～3.0％，NaCl0.1～1.0％，MnSO4·H2O0.5～1.0％，其余为水。所述的玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO4·H2O混合，再加水，调节pH搅拌均匀即可。上述微生物菌剂在在降解有机磷上的应用。上述微生物菌剂在在降解土壤中有机磷上的应用。上述微生物菌剂在促进作物生长上的应用。上述微生物菌剂在在防治植物病害上的应用。上述应用中所述的植物病害是指茄子黄萎病(Verticilliumdahliae)、黄瓜枯萎病(F.oxysporumf.sp.cucumebrium)、棉花枯萎病(F.oxysporumf.sp.vasinfectum)或马铃薯黑痣病(R.solani)等。上述微生物菌剂在降解有机磷和防治茄子黄萎病上的应用。上述微生物菌剂的使用方法：将上述所得微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/mL，于茄子播种前浸种半小时或将上述所得微生物菌剂用碳酸钙吸附，制作成解淀粉芽孢杆菌WKPHY-54粉剂，于茄本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株WKPHY‑54，其保藏编号为CGMCC No.14951。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌株WKPHY-54，其保藏编号为CGMCCNo.14951。2.权利要求1所述的菌株WKPHY-54在降解有机磷上的应用。3.权利要求1所述的菌株WKPHY-54在防治植物病害上的应用；其中所述的植物病害是指茄子黄萎病(Verticilliumdahliae)、黄瓜枯萎病(F.oxysporumf.sp.cucumebrium)、棉花枯萎病(F.oxysporumf.sp.vasinfectum)或马铃薯黑痣病(R.solani)。4.权利要求1所述的菌株WKPHY-54在降解有机磷和防治茄子黄萎病上的应用。5.一种含有权利要求1所述菌株WKPHY-54的微生物菌剂。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李博超，马毅楠，孔令佳，
申请(专利权)人：保定微控生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13