一种具有防病和降解无机磷双重作用的枯草芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌(acillus subtilis)菌株WKBS‑26，其保藏编号为CGMCC No.14953。本发明专利技术还公开了含有该菌株的微生物菌剂。本发明专利技术菌株WKBS‑26对黄瓜白粉病防治效果好，平均防效在90.0％以上，且具有良好降解无机磷能力，能显著提高土壤中无机磷的利用率，促进作物生长，为兼具防病和降解无机磷双重作用的功能菌；本发明专利技术菌株WKBS‑26抑菌谱广，还对黄瓜白粉菌、番茄灰霉菌、番茄早疫菌、黄瓜靶斑菌和马铃薯晚疫菌等有很好的抑制作用；本发明专利技术WKBS‑26菌株对黄瓜白粉病等植物病害专化性强，药效持久性好；本发明专利技术微生物菌剂对人、畜安全，属于环境友好型。

【技术实现步骤摘要】
一种具有防病和降解无机磷双重作用的枯草芽孢杆菌
本专利技术属于农业微生物领域，具体涉及一种具有防病和降解无机磷双重作用的枯草芽孢杆菌，还涉及含有该枯草芽孢杆菌的微生物菌剂，以及它们的用途。
技术介绍
黄瓜白粉病是我国黄瓜生产上的主要病害之一，在北方温室及大棚中常见发生。该病害由棕丝单囊壳菌(Sphaerothecafuliginea)引起，具有潜育期短、流行性强及再侵染频繁等特点。黄瓜白粉病主要影响黄瓜叶片的光合作用，造成早期果实生长缓慢及植株早衰，进而影响黄瓜后期生长，给黄瓜生产造成较大损失，一般年份因黄瓜白粉病而导致的黄瓜减产约为10％，发病严重时可引起20～40％的产量损失。目前，防治黄瓜白粉病的方法主要以化学防治为主，国内用于防治黄瓜白粉病的农药主要有氟硅唑、腈菌唑、氟菌唑或戊唑醇等单剂及各种复配剂。然而，长期大量使用农药，不仅造成农产品和环境污染，危害人畜安全，而且还会面临抗药性丧失，引发新病害或发生次生病害等问题。生物防治由于具有对环境友好、以及对人畜安全等优点，受到越来越多的关注。目前，用于防治黄瓜白粉病的微生物主要有：枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，CN106172507A)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis，CN102399712A)、黄麻链霉菌(Streptomycescorchorusii，CN102870821A)和蕈状芽孢杆菌(Bacillusmycoides，CN105002120A)等，但商品化的微生物制剂并不多。长期以来，人们通过大量施用化肥来达到提高农作物产量的目的。而磷肥施用至土壤中后很快就被固定生成无效态磷，植物难以吸收利用，同时造成了磷在土壤中的大量积累。利用微生物生命活动过程中所产生的酸降解难溶性无机磷(磷酸钙、磷灰石等)，是提高农作物生长有效磷水平的有效途径。目前，用于降解无机磷的芽孢杆菌主要有解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens，CN106399177A；CN106399178A)、阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai，CN106244496A)；枯草芽孢杆菌(CN105296381A；CN104263679A；伍善东等，江苏农业科学,2015,43(12):374-376；王玉琴等，微生物学通报,2015,42(1):101-109；张云霞等，江苏农业学报,2016,32(5):1073-1080)。上述芽孢杆菌功能单一，或只有防治黄瓜白粉病的能力，或只有降解无机磷的功能，其次，生防微生物是与病原菌相互进化的产物，也是环境的产物，随着病原菌的变化或者环境条件的变化，生防微生物的功能可能会丧失；同时，多样性的生防微生物亦可延缓病原菌产生抗性的时间，增强药效持久性，因此，不断筛选新的生防微生物，是应对病原菌生理小种或/和环境的变化的最经济有效的手段，是保证农业可持续发展的基础。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种枯草芽孢杆菌菌株，该菌株具有防止植物病害和降解无机磷的双重作用。本专利技术第二目的在于提供上述枯草芽孢杆菌的用途。本专利技术第三目的在于提供一种微生物菌剂。本专利技术第四目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。本专利技术第五目的在于提供上述微生物菌剂的用途。本专利技术第六目的在于提供一种以上述菌株为受体菌的基因工程菌。本专利技术第七目的在于提供用于鉴定上述枯草芽孢杆菌的分子标记。本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术一种枯草芽孢杆菌(acillussubtilis)菌株WKBS-26，其保藏编号为CGMCCNo.14953。上述菌株WKBS-26在防治植物病害上的应用。上述应用中所述的植物病害是指黄瓜白粉病(Sphaerothecafuliginea)、番茄灰霉病(Botrytiscinerea)、番茄早疫病(Alternariasolani)、黄瓜靶斑病(Corynesporacassiicola)或马铃薯晚疫病(Phytophthorainfestans)等。优选为黄瓜白粉病(Sphaerothecafuliginea)。上述菌株WKBS-26在降解无机磷上的应用。上述菌株WKBS-26在降解土壤无机磷上的应用。上述菌株WKBS-26在防治黄瓜白粉病和和降解土壤无机磷上的应用。本专利技术还提供了一种微生物菌剂，所述的微生物菌剂含有上述菌株WKBS-26。上述微生物菌剂，其剂型可以为液体制剂或固体制剂。上述微生物菌剂，其菌株WKBS-26的活菌数为50.0×106～50.0×108cfu/mL；或50.0×106～50.0×108cfu/g。上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)菌种活化：将低温保存的枯草芽孢杆菌菌株WKBS-26在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上25～35℃培养10～16小时，得活化的菌株；(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)所得的活化菌株，然后接种到100mLLB液体培养基中，在25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下培养10～16小时，得种子液；(3)发酵培养：按照体积比为1～3％的比例将步骤(2)所得的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基(pH值为7.2)中，在温度为25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下发酵培养36～40h，得发酵液；(4)检测发酵液中菌体和芽孢数量，待发酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为WKBS-26的液体制剂。上述制备方法步骤(1)中所述LB平板培养基或LB斜面培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，琼脂粉12～18g，水1000mL。上述制备方法步骤(2)中所述LB液体培养基的组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，水1000mL。所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。上述制备方法步骤(3)中所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0～3.0％，黄豆粉1.0～3.0％，NaCl0.1～1.0％，MnSO4·H2O0.5～1.0％，其余为水。所述的玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO4·H2O混合，再加水，调节pH搅拌均匀即可。上述微生物菌剂在防治植物病害上的应用。上述应用中所述的植物病害是指黄瓜白粉病(Sphaerothecafuliginea)、番茄灰霉病(Botrytiscinerea)、番茄早疫病(Alternariasolani)、黄瓜靶斑病(Corynesporacassiicola)或马铃薯晚疫病(Phytophthorainfestans)等。优选为黄瓜白粉病(Sphaerothecafuliginea)。上述微生物菌剂在降解无机磷上的应用。上述微生物菌剂在降解土壤无机磷上的应用。上述微生物菌剂在防治黄瓜白粉病和和降解土壤无机磷上的应用。上述微生物菌剂的使用方法：将上述所得微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/mL，于黄瓜白粉病发病前进行叶面喷雾即可。或待黄瓜子叶完全展开，刚露出第一片真叶时，将上述所得微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/mL进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌(acillus subtilis)菌株WKBS‑26，其保藏编号为CGMCC No.14953。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌(acillussubtilis)菌株WKBS-26，其保藏编号为CGMCCNo.14953。2.权利要求1所述菌株WKBS-26在防治植物病害上的应用；其特征在于所述的植物病害是指黄瓜白粉病(Sphaerothecafuliginea)、番茄灰霉病(Botrytiscinerea)、番茄早疫病(Alternariasolani)、黄瓜靶斑病(Corynesporacassiicola)或马铃薯晚疫病(Phytophthorainfestans)。3.权利要求1所述菌株WKBS-26在降解土壤无机磷上的应用。4.权利要求1所述菌株WKBS-26在防治黄瓜白粉病和和降解土壤无机磷上的应用。5.一种微生物菌剂，其特征在于所述的微生物菌剂含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌株WKBS-26。6.权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：李博超，马毅楠，孔令佳，
申请(专利权)人：保定微控生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13