本发明专利技术公开了属于生物防治领域的一种用于防治作物立枯病的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株HMB27756，其保藏编号为CGMCC No.11459。本发明专利技术还公开了含有该菌株菌体的微生物菌剂，以及它们在防治作物立枯病上的应用。本发明专利技术为防治作物立枯病提供了一个高效的微生物，平均防效在80.0％以上，且针对性强；其次，本发明专利技术微生物菌剂对人、畜安全，属于环境友好型；此外，利用本发明专利技术防治棉花立枯病不易产生抗药性；本发明专利技术微生物菌剂制备方法简单、成本低、使用简单。
【技术实现步骤摘要】
一种用于防治作物立枯病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于农业微生物领域，具体涉及一种用于防治作物立枯病的解淀粉芽孢杆菌，以及含有该解淀粉芽孢杆菌的微生物菌剂，还涉及它们在防治作物立枯病上的应用。
技术介绍
由立枯丝核菌(RhizoctoniasolaniKühn)引起的棉花、番茄、黄瓜等作物苗期立枯病严重影响作物的正常生长，甚至造成缺苗断垄。低温多雨年份作物立枯病发生尤为严重。作物立枯病的防治方法主要以化学药剂拌种或包衣防治为主，但防效欠佳，而且存在环境污染问题，不符合农业生态可持续发展的需要。其次，由于缺乏有效的抗病基因，还未发现抗立枯病的棉花、番茄和黄瓜品种。因此生产上对作物立枯病仍缺乏有效、环保的防治措施。此外，生物防治方法由于具有药效高、专化性强、持续有效期长、不易产生抗药性和生产简单、成本低等优点，日益受到重要。利用活体微生物农药是防治作物土传病害行之有效的措施，而筛选有效防治作物立枯病的生防细菌是开发微生物源农药的基础。芽孢杆菌(Bacilliussp)是一种受到广泛关注的生防细菌。以其分布广、易分离培养、能产生抗逆性较强的芽胞、贮藏期长和使用方便等特点，成为一种理想的生防微生物。因芽孢杆菌能产生内生芽胞，有极强的抗逆能力，相比其他类型的生防因子，更有利于菌剂的生产，在剂型加工环境中存活、定殖与繁殖。因此，筛选对病原菌具有抑制作用的芽孢杆菌是防治有关植物病害的最有效方法之一。目前，用于防治作物立枯病的芽孢杆菌主要有：解淀粉芽孢杆菌SZ－60(申请号：2014100170816)、枯草芽孢杆菌G68(申请号：2014102479010)、枯草芽孢杆菌DPPG-26(申请号：2014103868726)、萎缩芽孢杆菌DPPG-28(2014104612134)、多粘类芽孢杆菌HY96-2(专利号：021510199)、枯草芽孢杆菌HL259(专利号：2005101048723)、枯草芽孢杆菌B579(专利号：2008101531801)、枯草芽孢杆菌NJN43(专利号：2009101833581)、枯草芽孢杆菌NB12(专利号：2011104234353)和巨大芽孢杆菌SJ-7(专利号：2013102557034)等。由于病原菌的多样性和同步进化，因此需要不断寻找新的菌株。经检索，没有发现有关本专利技术解淀粉芽孢杆菌菌株HMB27756的报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种用于防治作物立枯病的解淀粉芽孢杆菌菌株，该菌株具有高效、杀菌谱广等优点。本专利技术另一目的在于提供利用上述解淀粉芽孢杆菌生产的微生物菌剂。本专利技术第三目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。本专利技术第四目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌在防治作物立枯病上的用途。本专利技术第五目的在于提供上述微生物菌剂在防治作物立枯病上的用途。本专利技术第六目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌的鉴定方法。本专利技术第七目的在于提供上述微生物菌剂的鉴定方法。本专利技术通过以下技术方案实现：一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株HMB27756，己于2015年9月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.11459。利用上述解淀粉芽孢杆菌HMB27756生产的微生物菌剂，其活性成分为解淀粉芽孢杆菌HMB27756菌体。上述微生物菌剂可以为液体制剂或粉剂。上述微生物菌剂，其所含解淀粉芽孢杆菌HMB27756的活菌数大于12.0×108cfu/mL。上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)菌种活化：将低温保存的HMB27756菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上、在25～35℃下培养10～16小时，得活化的菌株；(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mLLB液体培养基中，在25～35℃、转速为150～220rpm的条件下培养10～16小时，得种子液；(3)发酵培养：按照体积比为1～3％的比例将步骤(2)的种子液接入到玉米粉黄豆粉培养基中，在温度为25～35℃、摇床转速为150～220rpm的条件下发酵培养40～50h，得发酵液；(4)检测发酵液中菌体和芽胞数量，待发酵液中成熟芽胞占到芽胞和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为HMB27756菌株的液体制剂。上述制备方法中所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。上述制备方法步骤(1)中所述的LB平板培养基或LB斜面培养基，其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，琼脂粉12～18g，水1000mL。上述制备方法步骤(2)所述的LB液体培养基，其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠4～6g，水1000mL。上述制备方法步骤(3)所述的玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：玉米粉1.0～3.0％，黄豆粉1.0～3.0％，NaCl0.1～0.8％，MnSO4·H2O0.5～1.0％，其余为水；pH值为7.0。所述玉米粉黄豆粉培养基的制备方法，按照重量百分比将玉米粉、黄豆粉、NaCl和MnSO4·H2O混合，再加水，调节pH搅拌均匀即可。所述的解淀粉芽孢杆菌HMB27756在防治作物立枯病上的应用。上述微生物菌剂在防治作物立枯病上的应用。上述应用中所述的作物是指棉花、番茄或黄瓜等。上述微生物菌剂的使用方法：将上述所得微生物菌剂用水稀释至活菌体数为108cfu/mL，于棉花播种前将种子浸种半小时；或将上述所得微生物菌剂用碳酸钙吸附，制作成解淀粉芽孢杆菌HMB27756粉剂，于番茄、黄瓜移栽时按照1棵苗1克粉剂的用量穴施，均可达到预防棉花、番茄、黄瓜等作物立枯病发生的目的。HMB27756菌株的筛选分离过程：HMB27756菌株是从西藏自治区浪卡子洋湖湿地土壤中分离得到。2013年6月从西藏自治区浪卡子洋湖湿地中采集土样，带回实验室后称取5g土样放到250mL的灭菌三角瓶中，加入100mL无菌水，放到摇床上，170r/min振荡30min，静置2h，取上清液10mL加入50mL灭菌离心管中，在80℃恒温水浴30分钟，然后取1mL加无菌水9mL，即成10mL10-3倍土壤微生物悬液，继而将土壤悬液稀释成10-4、10-5、10-6倍稀释液，取各浓度微生物悬液200μL涂于LB培养基平板上，每个浓度重复3次，在30℃恒温培养1d-3d，进行细菌的分离和纯化。并以棉花立枯病、番茄立枯病、黄瓜立枯病为靶标，通过平板对峙法、盆栽试验法或田间小区试验进行生防菌的筛选。结果从中筛选出一个对棉花立枯病具有明显防治效果的菌株，定名为HMB27756。HMB27756菌株的分类鉴定：(1)形态特征鉴定在LB培养基上培养菌体为杆状，培养10h后产生芽胞，芽胞中生，椭圆形，胞囊不膨大，抗酸染色阴性，无伴胞晶体，能运动，鞭毛周生。在营养琼脂平板上，培养初期菌落淡乳白色，脓状，圆形，边缘整齐，菌落隆起呈馒头状，表面湿润；培养后期菌落淡黄色，边缘不整齐，表面干燥有褶皱；在营养琼脂斜面上划线培养，呈直线形；在液体培养基中静止培养，表面形成白色菌膜。这本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株HMB27756，己于2015年9月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11459。
【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株HMB27756，己于2015年9月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11459。2.利用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌HMB27756生产的微生...
【专利技术属性】
技术研发人员：李社增，鹿秀云，郭庆港，张晓云，
申请(专利权)人：保定微控生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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