一种用于体外高效定向扩增的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于体外高效定向扩增的嵌合抗原受体及其应用。具体地，本发明专利技术提供一种具有体外特异选择性的CAR编码分子，该分子通过引入人源化的分选结构域，在感染目的细胞后，可以通过二次分选方法将表达CAR阳性的目的细胞进行高效分选，实现其体外的定向扩增，显著提高CAR阳性目的细胞在终产品中的比例，提高了CAR基因修饰性免疫细胞制品的工艺制备效率，为该类技术产品在临床的进一步推广和应用提供更为稳定的技术保证。

A chimeric antigen receptor for efficient directional amplification in vitro and its application

The present invention provides a chimeric antigen receptor for efficient directional amplification in vitro and its application. Specifically, the present invention provides a CAR encoding molecule with specific selectivity in vitro. By introducing a humanized sorting domain, the molecule can be successfully selected by two sorting methods after infection of the target cell to achieve the targeted amplification of the CAR positive in vitro and significantly increase the CAR positive. The proportion of target cells in the final product improves the processing efficiency of CAR gene modified immune cell products, and provides a more stable technical guarantee for the further popularization and application of this kind of technology.

【技术实现步骤摘要】
一种用于体外高效定向扩增的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术属于基因工程和免疫细胞治疗领域，涉及一种用于体外高效定向扩增的嵌合抗原受体及其应用。
技术介绍
嵌合抗原受体(Chimericantigenreceptor,CAR)是一种由抗原特异性抗体，跨膜结构域，胞内信号共刺激结构域等多个不同功能域嵌合而成的人工受体分子。该类分子的主要特点在于可以通过其表达识别相关抗原抗体的结构域直接识别靶细胞，并通过胞内信号共刺激结构域的活化，激活被该类受体修饰的免疫细胞，例如T细胞，直接通过细胞杀伤途径对靶细胞进行杀伤。与体内存在的天然T细胞杀伤途径相比，CAR介导的细胞杀伤作用突破了MHC分子限制性的制约，一方面提高了效应细胞的杀伤活性，另一方面提高了效应细胞对发生MCH分子突变的靶细胞的识别和杀伤效率。目前，CAR基因修饰主要应用于包括T细胞和NK细胞等具有直接杀伤的免疫细胞介导的靶向抗肿瘤免疫治疗中，针对的适应症主要为血液肿瘤，包括难治复发性慢性B细胞淋巴瘤(CLL)，非霍奇金淋巴瘤(NHL)，多发性骨髓瘤(MM)等；针对的靶点包括CD19，CD20，CD133等。2017年9月，诺华公司研发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式I所示：F0‑F1‑L1‑Z‑L2‑F2‑H‑TM‑C‑CD3ζ(I)其中，F0为无或信号肽序列；F1和F2两者中一个为抗人CD19的单链抗体重链可变区，另一个为抗人CD19的单链抗体轻链可变区；Z为分选结构域，所述分选结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.:8中第151‑160位、SEQ ID NO.:12中第151‑158位、或SEQ ID NO.:13中第151‑159位所示；L1和L2为无或连接肽；H为无或绞链区；TM为跨膜结构域；C为无或共刺激信号受体酪氨酸激活基序；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；其中，...

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式I所示：F0-F1-L1-Z-L2-F2-H-TM-C-CD3ζ(I)其中，F0为无或信号肽序列；F1和F2两者中一个为抗人CD19的单链抗体重链可变区，另一个为抗人CD19的单链抗体轻链可变区；Z为分选结构域，所述分选结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.:8中第151-160位、SEQIDNO.:12中第151-158位、或SEQIDNO.:13中第151-159位所示；L1和L2为无或连接肽；H为无或绞链区；TM为跨膜结构域；C为无或共刺激信号受体酪氨酸激活基序；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；其中，“-”为连接肽或肽键。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述F1和F2的氨基酸序列分别如SEQIDNO.:8中第22-145位和第166-276位所示。3.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:12或SEQIDNO.:13所示。4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的嵌合抗原受体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志国，赵宇，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：北京,11