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活性UL36-480-GST蛋白及其制备方法和应用技术

技术编号:17900619 阅读:32 留言:0更新日期:2018-05-10 12:05
本发明专利技术提供了一种活性UL36‑480‑GST蛋白及其制备方法,以MDV病毒编码的UL36‑480去泛素化酶作为靶点,并在其C端融合一个促进蛋白溶解便于纯化的GST标签、Thrombin蛋白酶切位点、Gly‑ Gly‑ Gly‑Ser柔性连接肽段,并利用杆状病毒‑昆虫细胞表达系统表达纯化获取UL36‑480‑GST。利用此酶体外筛选特异性抑制剂,用于抗肿瘤、抗病毒的治疗的方法;建立了一种新的获取活性病毒编码去泛素化酶UL36‑480‑GST的制备方法,为有效防控MDV病毒提供一种新的特异性药物靶点。

Active UL36-480-GST protein and its preparation and Application

The present invention provides an active UL36 480 protein GST protein and its preparation method. The target is UL36 encoded by MDV virus, and a GST label, Thrombin protease cutting site and Gly Ser flexible connection peptide, which can promote protein dissolution and easy purification at its C end, and use baculovirus for baculiform disease. The insect cell expression system was expressed and purified to obtain UL36 480 GST. Using this enzyme in vitro screening specific inhibitors for antitumor and antiviral therapy, a new method for obtaining active virus encoded ubiquitination enzyme UL36 480 GST is established to provide a new specific drug target for the effective prevention and control of MDV virus.

【技术实现步骤摘要】
活性UL36-480-GST蛋白及其制备方法和应用
本专利技术提供一种活性UL36-480-GST蛋白及其制备方法,是一种可以作为抗病毒药物靶点的蛋白。同时还公开了该蛋白的制备方法,并应用多种化合物对该蛋白进行活性抑制作用,属于生物工程

技术介绍
许多动物细胞编码的去泛素化酶,包括病毒编码的具有去泛素化酶活性的蛋白,在病毒对宿主细胞的感染及病毒的致病过程中发挥着重要的作用。因此这些具有去泛素化酶活性的蛋白可作为抗肿瘤、抗病毒药物筛选的靶点。通过调节宿主细胞的泛素化修饰系统,调控宿主的免疫系统,进而发挥抗肿瘤、抗病毒病的作用。UL36-480蛋白是由MDV病毒编码的一段具有去泛素化酶活性的蛋白。破坏其去泛素化酶活性可抑制MDV在鸡细胞内的复制、包装,以及MDV的传播,从而阻止MDV所致的鸡的MD肿瘤病。本专利技术通过
技术实现思路
:本专利技术提供一种去泛素化酶融合蛋白UL36-480-GST的基因序列。本专利技术进一步提供UL36-480-GST蛋白基因的获取方法。本专利技术进一步提供了上述蛋白的表达方法,将UL36-480与GST标签融合,制备了一种可溶的、具有去泛素化酶活性本文档来自技高网...
活性UL36-480-GST蛋白及其制备方法和应用

【技术保护点】
一种活性UL36‑480‑GST蛋白,其基因序列如下所示:SEQ no.1。

【技术特征摘要】
1.一种活性UL36-480-GST蛋白,其基因序列如下所示:SEQno.1。2.根据权利要求1所述的UL36-480-GST基因的获取方法,包括以下步骤:1)优化UL36-480基因,通过蛋白酶Trombin识别序列和linker序列与GST标签的基因连接成UL36-480-GST基因;UL36-480相关引物:P1:5’-ATACGCGTCGACATGACTGACAGCACTGAC-3’;P2:5’-ATTCCCAAGCTTGCTCTGGGGGGTCCAGAG-3’;GST标签相关引物:P3:5’-ATTCCCAAGCTTCTGGTTCCGCGTGGATCCATG-3’;P4:5’-AGTGCACTGCAGCTGGTTCCGCGTGGATCCATG-3’;2)以优化后的UL36-480基因序列为模板,用上游引物P1和下游引物P2组合,PCR扩增出带有指定酶切位点的UL36-480基因;3)用上游引物P3和下游引物P4组合,PCR扩增出带有指定酶切位点的GST标签基因;4)应...

【专利技术属性】
技术研发人员:艾永兴王梦涵许佳翠吕岩周小露吴山力王铁东于浩王梦云周宏达周文杰
申请(专利权)人:吉林大学
类型:发明
国别省市:吉林,22

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