对东方粘虫有杀虫活性的Bt蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供了对东方粘虫有杀虫活性的Bt蛋白及其应用，所述蛋白质来源于苏云金芽胞杆菌，该蛋白选自Cry1Ab蛋白、Cry1Bb蛋白、Cry1Be蛋白、Cry2Ab蛋白、Cry9Aa、Cry9Eb或Cry9Ee蛋白中的至少一种。本发明专利技术提供的对东方粘虫高毒力的几种Bt蛋白，将填补目前市场对东方粘虫防治资源的匮乏。此外，上述蛋白将为抗东方粘虫转基因作物的制备提供新的基因来源。可用于害虫对Cry1A产品抗药性治理，延缓抗性产生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及几种对东方粘虫具有杀虫活性的Bt蛋白及 应用。
技术介绍
东方粘虫（Mythimna separata)属于鳞翅目，夜蛾科，是一种典型的远距离迀飞害 虫，严重威胁我国粮食生产安全。其危害特点主要有三点，首先是发生范围广，危害世代多。 我国除新疆以外，全国各地均受其危害，每年可有4~5次大范围迀飞危害，在亚洲和澳洲 其它国家也常发生危害，爆发成灾。其次是危害的作物种类和组织多。东方粘虫可以危害玉 米、小麦和水稻等主要禾谷类粮食作物以及棉花、豆类、蔬菜等上百种植物，由于其可咬断 麦穗、谷穗甚至将作物的叶片吃光，因而造成严重的作物减产和绝产。再次是暴发性明显， 造成的产量损失严重。1990以来，粘虫的局部危害从未停止，至2012年全国粘虫的大发生， 2012年，3代粘虫在华北、东北的发生面积达397. 4万公顷，多数省份危害程度居历史之最。 此外，由于气候变暖、种植模式的改变导致病虫害加重，使得粘虫危害的形势非常 严峻，防治问题刻不容缓。而化学防治所需人力物力颇多，因此生物防治是解决当前问题的 最佳途径。 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis)产生的伴胞晶体蛋白是主要的杀虫 成分，已有研宄发现大多数晶体蛋白对鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、同翅目、直翅目、食 毛目多种昆虫，以及一些线虫、螨类和原生动物具有特异性的杀虫活性。 相对于使用Bt防治棉铃虫，其对粘虫防治研宄发展相对滞后，关注较少。为防治 东方粘虫对农作物带来的危害，寻找对东方粘虫高毒力的Bt蛋白可为防治东方粘虫生物 灾害提供多种杀虫资源，这对我国的生物防治有着十分重要的意义。此外，也将为我国抗虫 转基因作物的研宄提供优良的候选基因。 并且对东方粘虫有活性的Bt蛋白研宄较少，因此产生交互抗性的风险较大，对东 方粘虫有活性的Bt蛋白资源的挖掘，尤其与CrylA类蛋白氨基酸序列相似性低的蛋白，为 防治这类害虫提供丰富的候选蛋白，将对延缓抗性产生具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是针对现有技术的不足，提供了几种对东方粘虫有杀虫活性的 Bt蛋白，以克服东方粘虫防治资源的匮乏，延缓害虫抗性的产生。 为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供了对东方粘虫有杀虫活性的Bt蛋白，所述蛋白质来源于苏云金芽胞 杆菌，所述蛋白选自CrylAb蛋白、CrylBb蛋白、CrylBe蛋白、Cry2Ab蛋白、Cry9Aa蛋白、 Cry9Eb蛋白或Cry9Ee蛋白中的至少一种。 本专利技术一个优选的方面，上述的Bt蛋白选自CrylAb蛋白、CryIBb蛋白、CryIBe蛋 白、Cry2Ab蛋白的至少一种。 本专利技术的再一个优选的方面，上述的Bt蛋白中含有对东方粘虫有体重抑制作用 的Bt蛋白，所述Bt蛋白选自Cry9Aa蛋白、Cry9Eb蛋白或Cry9Ee蛋白中的至少一种。 本专利技术一个优选的方面，上述蛋白是如下序列组成的：其中，CrylAb蛋白是如下 1)或 2): 1)序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； CrylBb蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； CrylBe蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列3的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； Cry2Ab蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列4的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； Cry9Aa蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列5的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； Cry9Eb蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列6所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列6的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白； Cry9Ee蛋白是如下1)或2): 1)序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白； 2)在序列表中序列7的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸组成的且具有1)相同功能的蛋白。 本专利技术的另一个目的是提供了含有上述Bt蛋白的应用。 本专利技术一个优选的方面，上述组合物中的Bt蛋白含量为10-70%，优选30-50%， 特别优选40%。 进一步地，所述的Bt蛋白在制备东方粘虫杀虫剂上的应用。 更近进一步地，所述的Bt蛋白在制备抗东方粘虫转基因植物上的应用。 本专利技术再一个目的是提供了含有上述Bt蛋白的杀虫剂或生物制剂。 本专利技术还提供了含有上述Bt蛋白的转基因植物。 本专利技术提供的防治东方粘虫的Bt蛋白，可为防治东方粘虫的生物灾害提供多种 杀虫资源，这对我国的生物防治有着十分重要的意义。此外，也将为我国抗东方粘虫转基因 作物的研宄提供优良的候选基因，因此有望对其进行多基因转基因作物的研发，有望延缓 害虫抗药性的产生。上述蛋白也将为抗虫转基因作物的研发提供新的基因来源。【附图说明】 图 1 为 CrylAb、CrylAc、Cry2Ab、CryIAKCrylCa 蛋白的 SDS-PAGE 电泳结果图；其 中从左到右依次是分子标记物，泳道I :BSA，泳道2 :Cry IAb蛋白，泳道3 :Cry IAc蛋白，泳 道4 :Cry ICa蛋白，泳道5 :Cry 2Ab蛋白，泳道6 :空白对照无晶体突变株HD73-。 图 2 为 CrylBa、CrylBb、CrylBe、Cry9Aa、Cry9Eb、Cry9Ee、Vip3Aall 蛋白的 SDS-PAGE电泳结果图；从左到右依次是分子标记物，泳道I :BSA，泳道2 :CrylBa蛋白，泳 道3 :CryIBb蛋白，泳道4 :CryIBe蛋白，泳道5 :Cry9Aa蛋白，泳道6 :Cry9Eb蛋白，泳道7 : Cry9Ee蛋白，泳道8 :Vip3Aall蛋白，泳道9 :pEB空载体。【具体实施方式】 以下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本 专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术所作的修饰或者替换，均属于本专利技术的范畴。 本专利技术所用的菌株均来自中国农业科学院植物保护研宄所植物病虫害生物学国 家重点实验室。 本专利技术所用到的培养基： 1/2LB液体培养基：0.5 %胰蛋白胨、(λ 当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
对东方粘虫有杀虫活性的Bt蛋白，所述蛋白质来源于苏云金芽胞杆菌，其特征在于，所述蛋白选自Cry1Ab蛋白、Cry1Bb蛋白、Cry1Be蛋白、Cry2Ab蛋白、Cry9Aa蛋白、Cry9Eb蛋白或Cry9Ee蛋白中的至少一种。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，杨素娟，耿丽丽，束长龙，宋福平，彭琦，梁影屏，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11