一种发酵罐悬浮培养昆虫细胞产重组蛋白PCV2的方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵罐悬浮培养昆虫细胞产重组蛋白PCV2的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术对Sf9细胞进行摇瓶悬浮培养，然后在发酵罐中悬浮培养Sf9细胞，并转染S重组杆状病毒载体转染Sf9细。重组蛋白纯化及SDS‑PAGE电泳分析，特异性抗体Western Blot检测结果表明PCV2实现了表达。本发明专利技术利用Sf900无血清培养基大规模培养Sf9昆虫细胞具有细胞密度高、培养基成分明确的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种发酵罐悬浮培养昆虫细胞产重组蛋白PCV2的方法，属于生物

技术介绍
昆虫杆状病毒表达系统(insectbaculovirusexpressionvectorsystem，IBEVS)是基于昆虫杆状病毒及其宿主细胞建立起来的表达体系，是将外源基因整合到杆状病毒基因组上形成重组杆状病毒，在昆虫细胞或虫体中可表达外源蛋白的一种真核表达系统。是继大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞表达系统之后建立起来的，现已成为基因工程四大表达系统之一。利用该系统获得的重组蛋白可用于药物开发、疫苗生产、生物杀虫剂等多个领域。现在商业上的杆状病毒产品仍是通过培养昆虫幼虫感染病毒获得。这种生产方式受时间季节的制约，很难大规模生产，而最有效的办法则是大规模悬浮培养昆虫细胞来大量生产杆状病毒。
技术实现思路
本专利技术提供了一种通过发酵培养昆虫细胞来大量生产杆状病毒的方法。所述方法包括昆虫细胞的摇瓶悬浮培养、昆虫细胞的发酵罐悬浮培养。所述昆虫细胞的摇瓶悬浮培养，是将原代细胞经过静止培养复苏后，经过传代培养，传代细胞密度不低于1.0×106个/ml。所述昆虫细胞的发酵罐悬浮培养，是将种子以初始细胞密本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，通过发酵培养昆虫细胞，并转染杆状病毒来大量生产杆状病毒。

【技术特征摘要】
1.一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，通过发酵培养昆虫细胞，并转染杆状病毒来大量生产杆状病毒。2.根据权利要求1所述的一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，包括昆虫细胞的摇瓶悬浮培养、昆虫细胞的发酵罐悬浮培养、转染杆状病毒。3.根据权利要求1或2所述的一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，所述昆虫细胞的摇瓶悬浮培养，是将原代细胞经过静止培养复苏后，经过传代培养，传代细胞密度不低于1.0×106个/ml。4.根据权利要求1或2所述的一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，所述昆虫细胞的发酵罐悬浮培养，是将种子以初始细胞密度不低于10×105个/ml的接种量接入5L发酵罐中，以无血清培养基Sf-900ⅡSFM为发酵培养基，装液量为70％，采用螺旋桨式搅拌器搅拌通气，发酵温度26.5℃-27.5℃，pH6.1～pH6.4，搅拌转速100-200rpm，培养过程中溶解氧DO控制在50％-80％，通气量0.5-1vvm。5.根据权利要求1～4任一所述的一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，所述昆虫细胞是Sf9细胞。6.根据权利要求1～4任一所述的一种生产杆状病毒的方法，其特征在于，所述昆虫细...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴东升，吴家权，王峰，陈倩，缪奇微，张波，杨晓博，霍孝雨，
申请(专利权)人：无锡佰翱得生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32