穴位埋线疗法治疗肥胖的血清蛋白标志物及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种穴位埋线疗法治疗肥胖的血清蛋白标志物及其检测方法。应用iTRAQ差异蛋白组学技术，分析正常人、单纯性肥胖患者穴位埋线治疗前后的血清，得到48个差异蛋白。然后进一步收集25个单纯性肥胖患者进行穴位埋线治疗前后，血清的PRM蛋白定量分析，验证得到6个差异蛋白，A7L3A3|A7L3A3_HUMAN、E1B4S9|E1B4S9_HUMAN、E9PFZ2|E9PFZ2_HUMAN、K7ERI9|K7ERI9_HUMAN、P68871|HBB_HUMAN、P00738|HPT_HUMAN蛋白，作为评价穴位埋线有效性的客观指标；以及作为开发治疗单纯性肥胖的潜在药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
穴位埋线疗法治疗肥胖的血清蛋白标志物及其检测方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及用于治疗肥胖的穴位埋线疗法、穴位埋线疗法治疗肥胖的血清蛋白标志物及其检测方法，所述血清蛋白标志物作为肥胖的生物标记物以及药物研究的潜在靶点。
技术介绍
肥胖，作为一种与生活方式密切相关的多因素、多基因遗传性的慢性代谢性疾病，随着现代物质文明的丰富和生活方式的改变，已成为一种日趋流行的全球性疾病。超重和肥胖会导致各种与糖脂代谢紊乱相关的并发症的增加，不仅会大大加重患者的医疗及生活负担，也会严重影响患者的日常生活，而且随着近年来肥胖人口数量在的迅猛增长，己逐渐成为威胁人类健康的世界性公共卫生问题。对于肥胖饮食运动控制无效或合并糖脂代谢异常等内分泌代谢相关疾病的患者，最新“肥胖治疗指南”中建议应使用药物或外科手术的方式进行治疗。然而，药物在控制体重的同时，也会产生包括恶心、呕吐、腹泻、头晕、乏力、口干、焦虑、兴奋、失眠等在内的诸多不良反应。长期服用还会使得人体的肠胃功能紊乱，有些减肥药甚至会对心肝肾等重要脏器功能有所损伤，从而引发各种疾病。而减肥手术，包括胃束带术、胃内水球术、胃切除术以及胃旁路术等，患者接受度差，费用昂贵。通过对中医药疗法的系统评价，针灸是目前控制体重应用最广泛且疗效最确切的方法，这其中既有单纯针灸治疗，也有穴位埋线、电针等各种以针灸为主的手段联合治疗。埋线疗法用于治疗单纯性肥胖、糖尿病前期等疾病均收到较好的疗效，其针对腹型肥胖，中医针灸埋线疗法效果更加突出。我们观察到埋线疗法利用其特殊的针具与所埋之药线，产生较一般针刺方法更为强烈的针刺效应，有“制其神，令其易行”和通其经脉，调其气血的作用。针具埋线时可以进行手法补泻，另一方面，埋置线的粗细也能进行虚实的调节，植入的线体可诱导人体变态反应，使淋巴组织反应增强，配合抗体、巨噬细胞来破坏、分解、液化线体，加快肌肉的代谢，提高机体的代谢水平。
技术实现思路
本专利技术目的在于发现蛋白tr|A7L3A3|A7L3A3_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白tr|A7L3A3|A7L3A3_HUMAN包括肽段序列QPFVQGLALYTPVVLPR(SEQIDNO.1)和SLDFTELDVAAEK(SEQIDNO.2)。本专利技术的另一个目的在于提供一种蛋白tr|E1B4S9|E1B4S9_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白tr|E1B4S9|E1B4S9_HUMAN包括肽段序列HLIDSLIDFLNFPR(SEQIDNO.3)和EVGTVLSQVYSK(SEQIDNO.4)。本专利技术的另一个目的在于提供一种蛋白tr|E9PFZ2|E9PFZ2_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白tr|E9PFZ2|E9PFZ2_HUMAN包括肽段序列EYTDASFTNR(SEQIDNO.5)、GAYPLSIEPIGVR(SEQIDNO.6)、NNEGTYYSPNYNPQSR(SEQIDNO.7)和GEFYIGSK(SEQIDNO.8)。本专利技术的另一个目的在于提供一种蛋白tr|K7ERI9|K7ERI9_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白tr|K7ERI9|K7ERI9_HUMAN包括肽段序列EFGNTLEDK(SEQIDNO.9)和EWFSETFQK(SEQIDNO.10)。本专利技术的另一个目的在于提供一种蛋白sp|P68871|HBB_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白sp|P68871|HBB_HUMAN包括肽段序列SAVTALWGK(SEQIDNO.11)、VNVDEVGGEALGR(SEQIDNO.12)和EFTPPVQAAYQK(SEQIDNO.13)。本专利技术的另一个目的在于提供一种蛋白sp|P00738|HPT_HUMAN在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。本专利技术提供的蛋白sp|P00738|HPT_HUMAN包括肽段序列TEGDGVYTLNNEK(SEQIDNO.14)、HYEGSTVPEK(SEQIDNO.15)和VTSIQDWVQK(SEQIDNO.16)。本专利技术提供了在穴位埋线疗法治疗肥胖过程中一些蛋白表达水平的变化，作为生物标记物，用于临床评估疗效，作为药物治疗研究的潜在靶点。附图说明图1是样品的SDS-PAGE电泳图；图2是样品ESI质谱basepeak图；图3是目标肽段相对表达量与体重相关性散点图具体实施方式这些实施例应理解为仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围。在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等效变化和修改同样落入本专利技术权利要求所限定的范围。本专利技术以下实施例中，未特别标示的实验方法均为本领域通用的实验方法。一、项目样品基本信息：选择符合单纯性肥胖诊断标准的患者，进行治疗前后的血清差异蛋白组学研究。1.肥胖或超重的诊断标准：参照2013年中华医学会发布的最新诊断标准，BMI≥24kg/m2为超重；BMI≥28kg/m2为肥胖。2.受试人群：符合肥胖或超重的诊断标准，知情同意者可纳入观察范围。3.排除标准：年龄在18岁以下或70岁以上者，妊娠或哺乳妇女；患严重心、肝、肾功能不全，肿瘤和其他严重脑血管疾病患者；因各种情况自动放弃或不能配合治疗、观察、检查患者。样品数量：9例样品(共3组样品，分别为对照组(3例)、单纯性肥胖治疗前组(3例)和单纯性肥胖治疗后组(3例))4.治疗方案：选择7号一次性埋线针，将2cm的胶原蛋白线泡于生理盐水中备用。常规皮肤消毒，将无菌药线置于针头内，快速垂直进针，一般深度达到1.5-2.0cm，得气后推入药线，一般埋于皮下组织与肌肉之间，将针拔出，无菌棉球按压针孔以防止出血，贴埋线贴。每2周进行1次埋线，4次为1个疗程，共治疗2个月。二、iTRAQ差异蛋白组学分析1.项目样品基本信息样品数量：5组正常对照组，治疗前1组，治疗前2组，治疗后1组，治疗后2组2.实验技术路线：样品制备→各取约10μg样品SDSPAGE电泳→FASP酶解(Trypsin)→ESI质谱→软件分析数据→鉴定蛋白质3实验方法3.1样品处理及SDS-PAGE将每组样品使用AgilentH-14依次去除各组高丰度蛋白质，低丰度蛋白质组分浓缩后，Bradford法蛋白质浓度测定。两组样品分别进样10μg进行一次SDS-PAGE实验。3.2FASP酶解各样品各取200μg，分别加入SDT(含100mMDTT)，沸水浴5min，冷却至室温。加入200μLUAbuffer(8MUrea，150mMTrisHClpH8.0)混匀，转入30kd超滤离心管，离心14000g15min。加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种评估穴位埋线治疗单纯性肥胖有效性的血清蛋白标志物，所述的血清蛋白标志物为：1)蛋白tr|A7L3A3|A7L3A3_HUMAN目标肽段序列QPFVQGLALYTPVVLPR和SLDFTELDVAAEK表达水平的变化；和/或2)蛋白tr|E1B4S9|E1B4S9_HUMAN目标肽段序列HLIDSLIDFLNFPR和EVGTVLSQVYSK表达水平的变化；和/或3)蛋白tr|E9PFZ2|E9PFZ2_HUMAN目标肽段序列EYTDASFTNR、GAYPLSIEPIGVR、NNEGTYYSPNYNPQSR和GEFYIGSK表达水平的变化；和/或4)蛋白tr|K7ERI9|K7ERI9_HUMA目标肽段序列EFGNTLEDK和EWFSETFQK表达水平的变化；和/或5)蛋白sp|P68871|HBB_HUMAN目标肽段序列SAVTALWGK、VNVDEVGGEALGR和EFTPPVQAAYQK表达水平的变化；和/或6)蛋白sp|P00738|HPT_HUMAN目标肽段序列TEGDGVYTLNNEK、HYEGSTVPEK和VTSIQDWVQK表达水平的变化。

【技术特征摘要】
1.一种评估穴位埋线治疗单纯性肥胖有效性的血清蛋白标志物，所述的血清蛋白标志物为：1)蛋白tr|A7L3A3|A7L3A3_HUMAN目标肽段序列QPFVQGLALYTPVVLPR和SLDFTELDVAAEK表达水平的变化；和/或2)蛋白tr|E1B4S9|E1B4S9_HUMAN目标肽段序列HLIDSLIDFLNFPR和EVGTVLSQVYSK表达水平的变化；和/或3)蛋白tr|E9PFZ2|E9PFZ2_HUMAN目标肽段序列EYTDASFTNR、GAYPLSIEPIGVR、NNEGTYYSPNYNPQSR和GEFYIGSK表达水平的变化；和/或4)蛋白tr|K7ERI9|K7ERI9_HUMA目标肽段序列EFGNTLEDK和EWFSETFQK表达水平的变化；和/或5)蛋白sp|P68871|HBB_HUMAN目标肽段序列SAVTALWGK、VNVDEVGGEALGR和EFTPPVQAAYQK表达水...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淼，季光，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属龙华医院，
类型：发明
国别省市：上海,31