一种用于检测人血清中AGEs含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测人血清中AGEs含量的方法——胶乳免疫比浊法，该方法中提供的试剂包括碳酸盐缓冲液、稳定剂、偶联剂、防腐剂、抗人AGEs抗体的胶乳微球。该检测方法拓宽了检测的线性范围，并且该方法稳定性和线性好，特异性强，分析灵敏度高，操作简便等优点，可用于临床中常用的全自动生化分析仪。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于疾病的诊断或检测
，具体涉及一种胶乳免疫比浊法用来检测人血清中AGEs的含量。
技术介绍
AGEs是外源性或内源性的蛋白质、脂肪及核酸的氨基和还原糖发生非酶催化反应产生稳定的、不可逆的化合物，同时它能够和人体的组织和细胞相结合并造成严重的破坏。由于它的积聚会引发糖尿病等各种并发症，如糖尿病肾病、阿尔兹海默症、动脉粥样硬化、白内障等症，影响全身各系统，因此对其进行快捷、简单并准确的检验在临床诊断中具有重要意义。目前它的检测方法有放射受体分析法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等，但是这些方法操作过程繁琐，误差大，消耗时间长，自动化程度低，线性范围窄，费用高，灵敏度低，对于临床非常不利，一般只用来定性检测。流行病学和临床研究表明，AGEs与多种疾病的密切相关，现今对其治病机制研究已经取得了很大的进展，同时相关靶点的药物也在不断开发，所以对其进行精确的诊断和准确定量成为了关键解决的限速步骤。因此开发检测该物质的其他方法，在该临床诊断中是具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测AGEs含量的方法。采用胶乳免疫比浊法检测血清中AGEs的含量，包括游离态的AGEs和结合态的AGEs，线性范围宽好，灵敏度高，特异性好、操作简单、方便快速等优点。它能够作为一项新的临床指标，AGEs检测对阐明这些疾病的发病机制和判定治疗效果有一定价值。本专利技术采用以下步骤：一种AGEs检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：试剂R1中含有试剂R2中含有本专利技术中抗人AGEs抗体的胶乳微球的制备步骤：1、每ml反应混合物加入下列各物：a.去离子水是最后容积为1.0mL；b.0.1mL的5x的贮备缓冲溶液，其pH值为6.0-7.0(一般可用0.5MMES缓冲溶液)；胶乳微球最终浓度为5％(W/V)；c.按照二者呈现的0.2∶1～0.5∶1的比例范围加入50mg/ml的NHS在去离子水中的溶液和19.2mg/mL的EDAC在去离子水中的溶液中；2、在室温将此混合物反应18min，不断搅拌；3、用上述的MES缓冲液，除去未反应的NHS和EDAC；4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为5％(w/v)；5、将结合的蛋白质溶于MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL；6、立即加入蛋白质溶液；7、将混合物反应至少2h，轻轻搅拌；8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟；9、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。本专利技术的优点：1.采用的不同粒径的胶乳微球，提升了检测的线性范围和灵敏度。2.采用的偶联剂NHS和EDAC的加入比例的多少，提升了抗体与微球的偶联效率。3.试剂的线性范围宽，准确度高，使用方便，满足临床需要。附图说明：图1：实施例1与对比方法相关性图图2：实施例2与对比方法相关性图图3：实施例3与对比方法相关性图具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明，但是本专利技术要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。实施例1按照下面讲述的检测步骤，在550nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝4∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.5∶1，检测一批数量为40例血清样本。本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：表1操作程序结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。实施例2按照下面讲述的检测步骤，在600nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝5∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.2∶1，检测同实施例1相同的40例血清样本。本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：表2操作程序结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。实施例3按照下面讲述的检测步骤，按照上述的检测步骤，在580nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝6∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.4∶1，检测同实施例1和实施例2相同的40例血清例样本。本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：表3操作程序结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。实施例4将上述实施例1～3的相同血清样本进行荧光光谱法检测(对比方法)，实施例1～3的结果与对比方法比较。表4所有实施例检测结果汇总(ng/mL)综合上述结果实施例1～3中的结果采用BS-420全自动生化分析仪，对40个血清样本进行测定，并对测定值进行相关分析并与对比方法检测结果比较，其中实施例1的相关系数：r2＝0.997，线性方程为：y＝0.999x+0.067。其中实施例2的相关系数：r2＝0.982，线性方程为：y＝1.003x+0.124。其中实施例3的相关系数：r2＝0.964，线性方程为：y＝0.960x+0.469；结果表明实施例1中的试剂的检测与对比方法的相关性较好。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测AGEs含量的方法，其特征包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：试剂R1中含有试剂R2中含有

【技术特征摘要】
1.一种检测AGEs含量的方法，其特征包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：试剂R1中含有试剂R2中含有2.根据权利要求1所述的一种检测AGEs含量的方法，其特征在于该方法中所用到的抗人AGEs的抗体连接胶乳微球。3.根据权利要求1所述的一种检测AGEs含量的方法，其特征在于该方法中当羧基...

【专利技术属性】
技术研发人员：王贤俊，何丹，
申请(专利权)人：王贤俊，
类型：发明
国别省市：浙江;33