高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法。本发明专利技术所提供的酿酒酵母工程菌，是利用改进的Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ系统将酿酒酵母中编码中性海藻糖酶的基因敲除，得到生物活性保护物质海藻糖含量提高的菌株Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＡＹ－１８（保藏号ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ　２６６６）。本法具有操作简单、方便易行的特点。本发明专利技术所获得的酿酒酵母工程菌胞内海藻糖含量高，具有良好高温耐性和酒精耐性，在５２℃高温下处理６０ｍｉｎ细胞存活率为８５．１５％，经２０％（Ｖ）酒精冲击４ｈ细胞存活率为９５．１２％，发酵酒精浓度达１８．２％（Ｖ），适合于淀粉质原料的酒精浓醪发酵，能够为酒精发酵工业带来显著的经济效益。工程菌对发酵设备及条件没有特殊要求，一般酒精厂的设备和条件均可使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，涉及工业微生物育种的方法，尤其是一种 耐高温和耐高酒精浓度的酿酒酵母工程菌及其制备方法。
技术介绍
酒精浓醪发酵可提高设备利用率、降低蒸馏能耗和生产成本。然而高浓度 酒精对酵母菌的生长、发酵和存活都具有毒害作用，因此发酵终点的酒精浓度与酵母菌本身的耐酒精性能有关。普通酿酒酵母的酒精发酵浓度为12% (V)左 右，如能将酒精发酵的浓度提高至16% (V)，则可节省蒸馏能耗25%左右。此外，普通 酿酒酵母发酵的最适温度为32X:左右，当温度超过35'C时，酵母菌的生长和发酵能力大 大减弱。如果能提高酵母对温度的耐受性，则可适当提高发酵温度，加快发酵速度，减少 酒精发酵过程中冷却水的消耗量。综上所述，在酒精发酵时，有必要选用耐高温和耐高酒 精浓度的酵母菌。许多研究都表明，海藻糖不仅是酿酒酵母细胞内的一种重要贮藏性碳源，而且可以作 为酵母细胞的活性保护物质。在一些极端环境(冷冻、干燥、热处理等)下，酵母细胞可 以通过调节海藻糖的合成来抵御外界的不良伤害，所以海藻糖含量被认为是酵母耐性的重 要鉴定指标。但当环境条件恢复的情况下，胞内海藻糖又会迅速分解。所以如何本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高耐性酿酒酵母工程菌，是将酿酒酵母中的中性海藻糖酶ＮＴＨ１基因敲除，得到不产生中性海藻糖酶且耐性比所述酿酒酵母高的菌株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖冬光，郭学武，郝欣，吕烨，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]