The invention discloses a discovery and identification of serum protein and protein expression difference method combined with the MALDI token, TOF MS/MS technology using iTRAQ markers, discovery and identification of liver cancer serum protein expression differences, MRM validation marker protein; the present invention for tumor markers effective for early diagnosis and prognosis of canceration mechanism research it is important to determine the disease. The new protein markers of hepatocellular carcinoma were screened by gene knock in and out, and nude mice experiment in vivo, to observe its effect on the biological behavior of the tumor the expression of candidate genes was blocked or upward, locate the key protein in human hepatocarcinogenesis; through bioinformatics analysis, analysis of these key proteins in the signal system in the network; using MRM absolute quantitative validation, evaluation of these key protein polypeptide HCC diagnosis value of liver cancer and correlation with clinical analysis, put forward their feasibility in cancer prevention, early diagnosis and prognosis of clinical applications.
【技术实现步骤摘要】
一种发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白和验证标志物蛋白方法
本专利技术涉及基因转录组学和蛋白质组学领域,尤其是一种发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白和验证标志物蛋白方法。
技术介绍
20世纪原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手,在城市仅次于肺癌,在农村则仅次于胃癌[1]。目前广西每年有3.5万人左右死于恶性肿瘤,其中,死于肝癌的有1.2万人左右,可见,肝癌是广西第一位癌症杀手。在广西范围内,肝癌危害情况很不均衡。肝癌死亡率较高的县、市,主要集中于桂西南地区,以南宁周边的扶绥、隆安、武鸣三县最为高发,这个局部地区的肝癌发生密度,达到50~60/10万,其中的个别行政村,肝癌发生密度竟高达140~160/10万,这样的肝癌发生率在世界上也是罕见的。肝癌不仅发病率高而且死亡率也高,可谓“癌中之王”,广西肝癌的死亡率已经上升到27.31/10万,占全部恶性肿瘤死亡率的34.12%。由于原发性肝癌早期一般无任何症状,一旦出现临床表现,病情大多已进入中、晚期,而且恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强,因此,寻找有效的肿瘤标志物用于癌变机理研究、药物靶标的设计、疾病的早期诊断及高危人群的筛查成为广西地区肝癌研究的当务之急。目前,肝癌的发现和诊断是通过血清AFP检测结合影像学检查。其中临床较为公认的肝癌诊断标准为:血清AFP浓度>400μg/L,持续4周,影像学发现肝脏有实质性占位且能排除肝炎活动、生殖胚胎性肿瘤等疾病。但仅依靠血清AFP浓度来诊断肝癌,灵敏度为39%~64%之间,特异度为76%~91%,阳性预测值只在9%~32%,这就使得很多肝癌患者漏检,或假阳性 ...
【技术保护点】
一种发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白和验证标志物蛋白方法,其特征在于:由以下步骤组成:利用iTRAQ标记结合MALDI-TOF MS/MS技术,发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白,MRM验证标志物蛋白:利用iTRAQ 技术对30例肝癌和30例正常对照的血清进行分析,共检测到304个蛋白(置信度>95%),发现了38个差异蛋白(P<0.01),与对照相比,19个蛋白在肝癌血清中高表达,19个蛋白在肝癌血清中低表达,其中高表达2倍以上蛋白4个,低表达2倍以下蛋白6个;图1显示其中一个在肝癌中高表达的蛋白Alpha‑1‑antitrypsin;从上述iTRAQ标记发现38个差异蛋白中利用MIDAS(MRM Initiated Detection And Sequencing,MIDAS)技术,完成了14个差异蛋白MRM定性验证;利用外标法完成了三个蛋白进行MRM定量验证,在混合样品中不仅完全证明了这14个差异蛋白的存在,而且还获得了三个蛋白质肽段的定量信息;图2‑3显示的是其中两个蛋白构建的母子离子对;图4显示的是四个蛋白质的MRM 图谱。
【技术特征摘要】
1.一种发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白和验证标志物蛋白方法,其特征在于:由以下步骤组成:利用iTRAQ标记结合MALDI-TOFMS/MS技术,发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白,MRM验证标志物蛋白:利用iTRAQ技术对30例肝癌和30例正常对照的血清进行分析,共检测到304个蛋白(置信度>95%),发现了38个差异蛋白(P<0.01),与对照相比,19个蛋白在肝癌血清中高表达,19个蛋白在肝癌血清中低表达,其中高表达2倍以上蛋白4个,低表达2倍以下蛋白6个;图1...
【专利技术属性】
技术研发人员:于思创,王海云,
申请(专利权)人:南宁科城汇信息科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广西,45
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