WBP2与HER2作为共预后因子对患者分层以进行治疗制造技术

本发明专利技术提供一种用于预后癌症患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的方法，所述方法包括：(a)检查来自患者的样品以确定患者是人表皮生长因子受体2(HER2)阳性还是阴性；和(b)测量所述患者样品中的WW结构域结合蛋白质2(WBP2)水平，其中步骤(a)中的结果和步骤(b)中的结果为患者提供总体生存期、癌症复发或治疗应答的预后。本发明专利技术还提供实施本发明专利技术方法的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】WBP2与HER2作为共预后因子对患者分层以进行治疗
本专利技术涉及用于癌症，特别是乳腺癌的预后方法、系统和试剂盒。本专利技术还涉及用于癌症治疗，特别是乳腺癌治疗的患者群体的分层。本申请还涉及用于癌症，特别是乳腺癌预后的方法、系统和试剂盒中的癌症标志物的鉴定。
技术介绍
以下对本专利技术背景的讨论旨在促进对本专利技术的理解。然而，应该理解的是，本讨论并不是承认或认可所提及的任何材料在任何管辖区中在本申请的优先权日之时是公布的、已知的或是公知常识的一部分。全世界的乳腺癌是第二大最常见的癌症类型，并且也是人类癌症死亡最常见的原因之一。该疾病是女性最常见的癌症，并占美国女性癌症发生的三分之一。常规检查可提供信息以协助乳腺癌的诊断或预后，包括乳房X线检查和组织活检，然后结合组织学检查，用针对雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)和/或HER2/neu蛋白质的抗体进行免疫组织化学检测。目前对乳腺癌的治疗包括手术、化学疗法、放射疗法和免疫疗法。靶向性治疗，例如HER2/neu抗体(即赫塞汀(曲妥珠单抗))，是在20世纪90年代后期首次成为可用的。后来开发的HER2/neu抗体包括帕妥珠单抗(Pertuzumab)和拉帕替尼(Lapatinib)。HER2是浸润性癌症的癌症生物标志物，其中HER2在约30％的乳腺癌中过表达。HER2的过表达也发生在卵巢癌、胃癌(stomachcancer)、胃癌(gastriccancer)和子宫癌中。HER2受体蛋白是HER2拮抗剂如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和拉帕替尼的靶标。因此确定治疗性使用HER2拮抗剂的适合性的首要优先事项是证明(例如通过免疫细胞化学技术证明)HER2膜结构域的过表达。然而，并不是所有的HER2阳性癌症患者都对治疗有应答，而且一些HER2阳性癌症即使没有治疗也是自限性的。这表明HER2阳性癌症中有一些亚群更具侵袭性和/或对治疗(特别是赫赛汀(Herceptin)治疗)更具内在抵抗性。对HER2的检测包括但不限于荧光原位杂交(FISH)以检测样品中存在的HER2基因的数目，以及免疫组织化学(IHC)以检测样品中HER2蛋白质的量。但是后一种方法是半定量的。因此，需要确定癌症标志物并找到改进的方法、系统和试剂盒，以允许以高敏感性连续地、更加准确地量化癌症的预后，特别是乳腺癌或被证明存在表达HER2的ERBB2基因的扩增或过表达的其他癌症类型如胃癌(gastriccancer)。需要替代的方法和试剂盒用于分层癌症患者以改善以上提及的至少一个问题。专利技术概述本专利技术的目的是依照本专利技术提供改进的方法和试剂盒。相应地，本专利技术的一方面提供了预后患有癌症的患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的方法，所述方法包括：(a)检查来自患者的样品以确定基于人表皮生长因子受体2(HER2)的预定水平，患者是HER2阳性还是阴性；和(b)测量患者样品中的WW结构域结合蛋白质2(WBP2)水平，其中步骤(a)中的结果和步骤(b)中的结果为患者的总体生存期、癌症复发或对治疗的应答提供了预后。本专利技术的另一个方面提供了用于鉴定在样品中人表皮生长因子受体2(HER2)的量和WW结构域结合蛋白质2(WBP2)的量的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)至少一个第一探针，其适于检测和测量样品中人表皮生长因子受体2(HER2)的水平，以确定样品是HER2阳性还是HER2阴性；和(b)至少一个第二探针，其适于检测和测量样品中的WW结构域结合蛋白质2(WBP2)水平。本专利技术的另一方面提供了用于确定预后总体生存期，癌症复发或治疗应答的体外方法，所述方法包括：(a)测量样品中人表皮生长因子受体2(HER2)的水平；(b)测量样品中WW结构域结合蛋白2(WBP2)的水平，和(c)确定HER2和WBP2的水平是高于还是低于预定水平，其中步骤(c)的结果提供了总体癌症生存期、癌症复发或癌症治疗应答的预后。通过结合附图回顾以下描述的本专利技术的具体实施方案，本专利技术的其它方面对于本领域的普通技术人员将变得明显。附图说明现在将参照附图仅以举例的方式描述本专利技术，其中：图1提供涉及超过200个临床样本分析的Kaplan-Meier存活曲线。(A)总体存活年数依赖于WBP2和HER2状态(n＝221)；(B)无病生存年数依赖于WBP2和HER2状态。(N＝221)；(C)对总体生存期的Kaplan-Meier存活分析依赖于HER2状态；(D)和无病生存期依赖于HER2状态；(E)细胞核中HER2的表达量与WBP2的量的相关性；(F)细胞质中HER2的表达量与WBP2的量的相关性。图2提供免疫印迹分析(A)显示了WBP2介导EGF/HER2信号传导并支持WBP2作为应答靶向EGFR/HER2的药物的潜在预测物。Her2通过WBP2发信号，因此，当WBP2活性异常时阻断Her2将不能有效杀死癌细胞，因为WBP2的异常活性将驱使癌症生长。这意味着异常水平的WBP2可能预测对赫赛汀的应答。通过在人乳腺癌SK-BR-3细胞转染靶向HER2的siRNA敲低HER2。使用萤光素酶的siRNA作为阴性对照。细胞血清饥饿24小时后，用50ng/ml的EGF处理10分钟。细胞裂解物用抗WBP2的抗体免疫沉淀(IP)，并使用抗磷酸酪氨酸(PY20)通过Western印迹(IB)分析内源WBP2的磷酸化。用指定的抗体通过Western印迹(IB)分析HER2和EGFR的磷酸化。使用β-微管蛋白作为蛋白质上样对照。通过转染HER2的siRNA敲低人乳腺癌细胞SK-BR-3(B)和ZR-751(C)中的HER2。使用萤光素酶的siRNA作为阴性对照。细胞血清饥饿24小时后，用50ng/mlEGF处理10分钟。细胞裂解物用抗WBP2的抗体免疫沉淀(IP)，并使用抗磷酸酪氨酸(PY20)和抗WBP2的抗体通过Western印迹(IB)分析内源WBP2的磷酸化。用指定的抗体通过Western印迹(IB)分析HER2的磷酸化。使用β-微管蛋白作为蛋白质上样对照。图3曲妥珠单抗(Trastuzumab)剂量应答与WBP2表达水平对细胞增殖的影响。使用表达WBP2的慢病毒在BT-474中过表达WBP2(A和B)，以及使用靶向WPB2的两种不同的shRNA在SK-BR-3中敲低WBP2(C和D)，和靶向WBP2的两种不同的siRNA在ZR-75-30中敲低WBP2(E和F)。将每孔10,000个细胞铺在96孔板上用于2D培养(A和C)或铺在96孔超低附着板上用于3D培养(B和D)。曲妥珠单抗孵育3天(SK-BR-3)或5天(BT-474)后，通过使用CellTiter96aqueous非放射性细胞增殖测定法来测量细胞的生存力。细胞生存力通过曲妥珠单抗与未处理的对照细胞相比的倍数变化计算。数据表示为平均值±SD。Studentt检验确定统计学显著性(*或+P<0.05；**或++P<0.01；***或+++P<0.001，相对于载体或对照)。图4曲妥珠单抗剂量应答与WBP2表达对HER2水平和下游信号通路的影响。使用表达WBP2的慢病毒在BT-474中过表达WBP2(A)，并且使用靶向WPB2的两种不同的shRNA在SK-BR-3中敲低WBP2(B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预后患有癌症患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的方法，所述方法包括：(a)基于人表皮生长因子受体2(HER2)的预定水平检查来自患者的样品以确定患者是HER2阳性还是阴性；和(b)测量所述患者样品中的WW结构域结合蛋白质2(WBP2)水平，其中步骤(a)中的结果和步骤(b)中的结果提供对患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的预后。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.23 SG 10201505756X1.一种预后患有癌症患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的方法，所述方法包括：(a)基于人表皮生长因子受体2(HER2)的预定水平检查来自患者的样品以确定患者是HER2阳性还是阴性；和(b)测量所述患者样品中的WW结构域结合蛋白质2(WBP2)水平，其中步骤(a)中的结果和步骤(b)中的结果提供对患者的总体生存期、癌症复发或治疗应答的预后。2.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤(a)和(b)中的结果与来自对照群体的一组预定表达水平结果进行比较。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述对照群体被分层为确定癌症侵袭性的多个亚组。4.根据权利要求3所述的方法，其中每个亚组均参考自包含低于预定水平的WBP2表达的HER2阴性患者的参照组。5.根据权利要求4所述的方法，其中具有高于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性患者的样品提供所述患者与所述参照组相比总体存活几率降低约4至5倍的预后。6.根据权利要求4所述的方法，其中具有低于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性患者的样品提供所述患者与所述参照组相比总体存活几率降低约1至2倍的预后。7.根据权利要求4所述的方法，其中具有高于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阴性患者的样品提供所述患者与所述参照组相比总体存活几率降低约2至3倍的预后。8.根据权利要求4所述的方法，其中具有高于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性患者的样品提供所述患者与所述参照组相比癌症复发几率高约2至3倍的预后。9.根据权利要求4所述的方法，其中具有低于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性患者的样品提供所述患者与所述参照组相比癌症复发几率高约1倍的预后。10.根据权利要求4所述的方法，其中具有高于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阴性患者的样品提供所述患者与参照组相比癌症复发几率高约1至2倍的预后。11.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中具有高于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性结果的样品预测所述患者可能对治疗有应答。12.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中具有低于所述预定水平的WBP2表达水平和HER2阳性结果的样品预测所述患者对治疗有应答的可能性较小。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述治疗包括HER2拮抗剂。14.根据权利要求13所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：林允斌，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG