一种重组人白细胞介素21工程菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种重组人白细胞介素２１工程菌极其构建方法，构建步骤为：先通过ＰＣＲ扩增获得目的片段，然后经ＤＮＡ测序鉴定后，使目的片段与ｐＥＴ３０ａ（＋）载体连接，然后转化细菌，即获得工程菌。本发明专利技术的工程菌的最佳发酵诱导温度为４２℃，较普通菌高，为工程菌发酵条件的探索提供了有益的启示和科学研究价值；表达的ＩＬ－２１是以高纯度的包涵体形式存在，可有效避免细胞水解酶对蛋白质的破坏，表达的目的蛋白质含６个Ｈｉｓ　　ｔａｇ结构，便于纯化出高纯度的重组蛋白质。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种构建重组人白细胞介素２１工程菌的方法，其特征在于：步骤如下：　　　　（１）合成ＰＣＲ引物：上游引物为５′－ＧＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＡＴＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＣＡＴＧＡＴ－３′；下游引物为５′－ＡＣＣＧＣＴＣＧＡＧＧＧＡＡＴＣＴＴＣＡＣＴＴＣＣＧＴＧＴＧＴ－３′；　　　　（２）ＰＣＲ扩增目的片段：以重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ＩＬ－２１为模板，通过ＰＣＲ基因扩增，获得ＩＬ－２１基因片段；　　　　（３）ＤＮＡ测序鉴定：将上述ＰＣＲ扩增得到的ＩＬ－２１基因片段和ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接，构建重组载体ｐＭＤ１８－Ｔ－ＩＬ－２１，将重组载体ｐＭＤ１８－Ｔ－ＩＬ－２１转化细菌，用选择性培养基筛选阳性克隆，进行...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许晓群，王郡甫，郑瑞，张彩，张建华，刘金生，
申请(专利权)人：山东省医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]