生产L-氨基酸的微生物和生产L-氨基酸的方法技术

通过培养具有生产Ｌ－氨基酸的能力、但被修饰以使ｙｂｊＥ基因的表达被增强的微生物，来生产Ｌ－氨基酸。从培养基或从微生物收集Ｌ－氨基酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过使用微生物进行发酵来生产L-氨基酸的方法.特 别地，本专利技术涉及生产L-氨基酸，例如L-赖氨酸、L-精氨酸、L-乌 氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸、L-膽氨酸、L-苯丙氨酸、 L-半胱氨酸和L-谷氨酸的方法.这些是工业上有用的L-氨基酸.换 句话说，L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-异亮氨酸和L-膽氨酸作为动物饲料 添加刑、健康食品的成分和氨基酸注射液是有用的.L-精氡酸和L-乌 氛酸作为肝功能促进剂、氨基酸输注液和全面氨基酸制品的成分是有 用的.L-组氨酸作为肝功能促进刑和作为组胺的前体是有用的.L-苯丙氨酸作为甜味刑的前体是有用的.
技术介绍
L-氨基酸通过使用属于短杆菌属(5"v幼ac纽f/"附)、棒杆菌属 (C07/fWac紐f/"加)、埃希氏菌属(五sc/^i7'cWa )等的微生物进行发 酵来工业化生产.已经在EP 0857784A 、 JP 11-192088A 、 WO00/53726和 WO96/17930中报道了生产L-赖氨酸的方法，巳经在EP 0999267A、 EP 1170358A和JP 2002-017342A中报道了生产L-精氨酸的方法.在 这些报道的方法中，使用了产生碱性L-氨基酸的细菌菌林，包括从其 天然或人工突变的菌林、和具有碱性L-氨基酸生物合成酶的増强活性 的重组菌林分离的菌林.此外，也已经报道了使用属于嗜甲基菌属(Me狄j;/印M附)或甲 基菌属(Me幼j，to^c说"s )的突变的或遗传修饰的微生物菌林来从甲 醇生产L-氨基酸的方法(WO00/61723和JP 2001-120269A )，甲醉用于发酵是可以低成本大量地获得的.修饰细菌细胞中L-氨基酸的摄取和输出的方法是公知的，用来改 善所迷细菌的L-氨基酸生产能力.修饰L-氨基酸摄取的方法包括消 除或降低L-氨基酸摄取进入细胞来增强L-氨基酸生产能力，特别地， 这些方法包括删除g/"J5CD採纵子或其部分以消除或减弱L-谷氨酸摄取的方法(EP 1038970A ) 修饰榆出体的方法包括消除或降低L-氨基酸生物合成的中间体或 底物的输出，和增强生产的L-氨基酸的输出的方法.对于消除或降低 L-谷氨酸生物合成的中间体输出的方法，突变或破坏a-酮基戊二酸通 透酶基因以减少a-酮基戊二酸的输出的方法是已知的(WO01/005959 ) 对于增强L-氨基酸输出的方法，增强棒杆菌属细菌的菌林中(^五(碱性L-氨基酸输出体的基因；J. Mol. Microbiol. Biotechnol" 1999 Nov; 1 ( 2 ): 327-36 )的方法是已知的，用于生产L-赖氨酸(W097/23597)或L-精氨酸(美国专利公开2003-0113899),在埃希y/ jr、 ya^V基因(EP 1016710A)的表达的方法也是已知的，已经提 示了这些基因涉及L-氨基酸的输出.对于用于碱性L-氨基酸的输出的基因，上迷的基因是已知 的.然而，当(ys五基因在同化甲醇的细菌例如嗜甲基菌属细菌中扩增， 并且产生的菌株被用于L-賴氨酸或L-精氨酸的生产时，来源于 "/ "e/oiw (棒状杆菌)细菌的野生型/w五基因对于嗜甲基菌属细菌 是致命的，因而必须导入容许宿主微生物生长的突变/"五基因(EP 1266966A).罔此，当被导入到异体微生物中时，/>^￡基罔不总是能 在L-赖氨酸或L-精氨酸的输出方面起作用.因此，期望获得在各种 异体宿主微生物中展现出分泌足够重的L-氨基酸、包括L-赖氨酸和 L-精氨酸的能力的，用于L-氨基酸榆出体和生产的基因.yW五基因位于大炀杆菌的基因組上，已经被预测编码推定的表面 蛋白(Science, 277 (5331): 1453-74， 1997).然而，还没有报道该 基因的克隆和通过在细菌细胞中表达进行分析，因而它的生理功能仍 然是未知的.本专利技术的目的是提供能有效地生产L-氨基酸的菌林.本专利技术的另 一个目的是提供使用这样的菌林有效地生产L-氨基酸的方法.本专利技术的专利技术人勤勉地研究以实现上述的目的，结果，根据对高 浓度L-赖氨酸的抗性，获得了yWf基因， 一种新型的L-氨基酸输出 体基因.此外，他们还发现，L-氨基酸，包括碱性L-氨基酸例如L-rhtA、 B、 C基因(JP2000-189177A)和专利技术概述赖氨酸、L-精氨酸、L-乌氨酸和L-組氨酸；脂肪族的L-氨基酸例如 L-异亮氨酸；羟基L-氨基酸例如L-苏氨酸；环状L-氨基酸例如L-脯 氨酸；芳香族L-氨基酸例如L-苯丙氨酸；含碟的L-氨基酸例如L-半 胱氨酸；和酸性L-氨基酸例如L-谷氨酸，可以使用在其中y矽五基因 的表达被增强的橄生物来有效地生产.本专利技术的目的是提供具有L-氨基酸生产能力的微生物，其中所述 微生物被修饰从而j^/五基因的表达被増强.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述的微生物，其中通过提高 所迷y々/五基因的拷贝数目，或通过修饰所迷j^/五基因的表达调节序 列来增强所述j;^五基因的表达.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中由所述yW五 编码的蛋白质的氡基酸序列选自SEQ 2、 9和10,其中所述蛋白质具 有L-氨基酸榆出能力.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述紳乂五基 因选自(a) 包含SEQIDNO: 1的核苷酸序列的DNA;和(b) 在严格条件下与SEQ ID NO: 1的核苷酸序列、或与可从 SEQ ID NO: 1的核苷酸序列制备的探针可杂交的DNA，并且其中所 述DNA编码具有L-氨基酸输出能力的蛋白质.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述J^五基 因选自(a) 具有SEQ ID NO: 1中核苷酸编号49到948的核苷酸序列 的DNA;和(b) 在严格条件下与SEQ ID NO: 1中核苷酸编号的到948的 核苷酸序列、或与可从SEQ ID NO: 1中核苷酸编号49到948的核 苷酸序列制备的探针可杂交的DNA，并且其中所述DNA编码具有L-氨基酸输出能力的蛋白质.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述的微生物，其中所述微生 物的所述L-氨基酸榆出能力通过所述增强所述y々/五基因的表达来提高.本专利技术的进一步的目的是提供如上所迷的微生物，其中微生物对 L-氨基酸或L-氨基酸类似物的抗性通过所迷增强所述y矽五基因的表达来提高.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述L-氨基 酸选自L-赖氨酸、L-精氨睃、L-鸟氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸、L-膽氨酸、L-苯丙氨酸、L-半胱氨酸和L-谷氨酸.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述微生物 属于肠细菌家族.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述属于肠 细菌家族的微生物是属于埃希氏杆菌属的微生物.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述微生物 是CV^/ie/iw7if细菌 本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述微生物 是同化甲醇的微生物.本专利技术的进一步的目的是提供如上所述微生物，其中所述同化甲 醇的微生物属于嗜甲基菌属或甲基菌属.本专利技术的进一步的目的是提供生产L-氨基酸的方法，包括在培养 基中培养如上所迷的微生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有Ｌ－氨基酸生产能力的微生物，其中所述微生物被修饰从而ｙｂｊＥ基因的表达被增强。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：植田拓嗣，中井勇太，郡司义哉，泷川里绘，城永祐志，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]