利用人CYLD基因对肿瘤进行诊断、治疗及药物开发的方法技术

本发明专利技术公开了一种诊断肿瘤尤其是毛发上皮瘤的方法，它包括检测个体的ＣＹＬＤ基因、转录本和／或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患肿瘤的可能性大于正常人群。本发明专利技术还公开了相应的检测试剂盒，以及治疗肿瘤的方法和药物组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程和医学领域。更具体地，本专利技术涉及利用人CYLD基因及其编码产物诊断和治疗肿瘤尤其是毛发上皮瘤的方法，以及含有CYLD基因和/或蛋白的药物组合物。
技术介绍
毛发上皮瘤是一种皮肤肿瘤。其通常在青春期前发病，好发于面部，尤其是鼻唇沟及上唇，背部，头皮，颈部，躯干，四肢亦可受累。其皮损呈半球形或圆锥形，质地坚实，半透明，黄色或淡红色，有时较大的皮损表明可见毛细血管扩张。毛发上皮瘤不仅影响美容，因为其使背部，头皮，颈部，躯干，四肢受累，故严重者还会在生活中遇到困难。该病为常染色体显性遗传疾病，其发病的机理目前还不清楚。对于该疾病目前尚无满意的治疗方法。然而，迄今为止，尚没有充分揭示毛发上皮瘤的确切原因，也没有人揭示出毛发上皮瘤与某种蛋白存在直接的相关性。此外，本领域还缺乏早期诊断毛发上皮瘤疾病的有效方法以及非手术治疗毛发上皮瘤的有效手段。CYLD是一种已知的蛋白，其基本信息如下英文Gene fromHomo sapiens chromosome 16 working draft sequencesegment. NCBIContig NT_030834GENEGene fromHomo sapiens chromosome 16 working draft sequencesegment.gi|17488444243550-308161CYLD的DNA序列如SEQ ID NO1所示，ORF位于第392-3262位，编码一个全长956个氨基酸的蛋白质(SEQ ID NO2)。CYLD的其他信息可以从Http//www.ncbi.nlm.nih.gov获得。CYLD基因曾被报道其外显子的突变导致了圆柱瘤的发生，但国际上尚无任何文章报道CYLD基因和毛发上皮瘤的关系。毛发上皮瘤的遗传机理信息可从NCBI的OMIM获得。因此，本领域迫切需要开发新的诊断和治疗毛发上皮瘤的有效方法，以及相关的治疗药物，诊断技术和试剂。
技术实现思路
本专利技术的一个目的就是提供一种新的诊断(尤其是早期诊断)肿瘤尤其是毛发上皮瘤的方法及检测试剂盒。本专利技术的另一目的是提供一种新的治疗肿瘤尤其是毛发上皮瘤的方法。本专利技术的再一目的是提供一种治疗肿瘤尤其是毛发上皮瘤的药物组合物。在本专利技术的第一方面，提供了一种对个体的肿瘤易感性进行诊断的方法，它包括步骤检测该个体的CYLD基因、转录本和/或蛋白，并与正常的CYLD基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患肿瘤的可能性高于正常人群。较佳地，被检测的是CYLD的基因或转录本，并与正常CYLD核苷酸序列比较差异。更佳地，所述的肿瘤是毛发上皮瘤，且所述的差异选自SEQ ID NO1中第1853位A缺失。在本专利技术的第二方面，提供了一种治疗肿瘤的方法，它包括步骤给需要所述治疗的病人施用安全有效量的正常CYLD蛋白。较佳地，CYLD蛋白被局部施用于病灶处。在本专利技术的第三方面，提供了一种CYLD蛋白在制备药物组合物方面的的用途以及相应的药物组合物，它含有安全有效量的人CYLD蛋白以及药学上可接受的载体。较佳地，它是药膏。在本专利技术的第四方面，提供了一种检测肿瘤的试剂盒，它包括特异性扩增CYLD基因或转录本的引物。较佳地，它还含有与突变部位结合的探针和/或识别突变位点的酶。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1显示了一常染色体显性遗传的毛发上皮瘤家系的谱系图。图2为典型的患者的脸部照片。图3为患者的活检病理照片。图4显示了CYLD基因中的序列变化，其中SEQ ID NO1的第1853位发生了碱基的缺失，从而导致了移码突变，使其编码的蛋白缩短。具体实施例方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次发现和证明了CYLD与毛发上皮瘤密切相关，而且发现了它的新功能CYLD的改变将直接导致毛发上皮瘤。进一步的研究还暗示，CYLD是一抑癌基因，其突变会导致多种肿瘤的发生。在此基础上完成了本专利技术。通过对一常染色体显性遗传的毛发上皮瘤家系进行遗传连锁分析、候选基因筛选以及大规模测序，已证实该家族中的所有病人在CYLD基因的第10号外显子的1853位发生了碱基的缺失，从而导致了移码突变，使其氨基酸编码缩短，蛋白翻译异常，最终导致了毛发上皮瘤的发生。正常的CYLD编码全长956个氨基酸的蛋白(SEQ ID NO2)，如果在1853位处发生了碱基A的缺失则只编码全长为496个氨基酸的蛋白(SEQ ID NO5)和部分非正常的小肽。CYLD的突变导致了人类个体表现出肿瘤，尤其是毛发上皮瘤。我们的研究表明，正常的CYLD的存在是皮肤正常生理状态的关键，同时CYLD的突变还会导致其他许多肿瘤。鉴于人类CYLD的变异是导致毛发上皮瘤等肿瘤的直接原因之一。因此，可根据此基因及其表达产物设计的药物和诊断治疗技术，可用于诊断和治疗人类的肿瘤，其中包括但并不限于毛发上皮瘤、小汗腺瘤、黑色素瘤、圆柱瘤、胃癌、肝癌等。本专利技术的人CYLD核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据CYLD的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。将CYLD编码序列插入合适的表达载体，再转入宿主细胞，就可以分离出CYLD蛋白。基于本专利技术的新风险，CYLD蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗CYLD蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如毛发上皮瘤等肿瘤)，和用于筛选促进CYLD蛋白功能的物质，如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人CYLD蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人CYLD蛋白功能的多肽分子。另一方面，本专利技术还包括对人CYLD DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人CYLD基因产物或片段。较佳地，指那些能与人CYLD基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本专利技术中抗体包括那些能够结合并抑制人CYLD蛋白的分子，也包括那些并不影响人CYLD蛋白功能的抗体。本专利技术不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。本专利技术的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人CYLD基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人CYLD蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。本专利技术的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对个体的肿瘤易感性进行诊断的方法，其特征在于，它包括步骤：检测该个体的ＣＹＬＤ基因、转录本和／或蛋白，并与正常的ＣＹＬＤ基因、转录本和／或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患肿瘤的可能性高于正常人群。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孔祥银，郑广勇，黄伟，
申请(专利权)人：中国科学院上海生物工程研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]